儀器分析紫外-可見分光光度法2課件

第二節(jié)紫外-可見分光光度計光源吸收池檢測器訊號處理與顯示器一、主要部件可見光源紫外光源氫燈或氘燈>300nm150~400nm1．光源鎢燈或鹵鎢燈具有連續(xù)光譜2．單色器色散元件準(zhǔn)直鏡（聚光鏡）狹縫將復(fù)合光色散成單色光棱鏡光柵準(zhǔn)直鏡將進(jìn)入單色器的發(fā)散光變成平行光，又作聚光鏡，將色散后的平行單色光聚集于出口狹縫。光柵狹縫入射狹縫—使光線成為一細(xì)長條照射到準(zhǔn)直鏡出射狹縫—使需要的單色光投射到溶液中過寬，單色光不純，可使A改變過窄，光通量小，靈敏度降低3．吸收池盛放試液可見光區(qū)玻璃紫外區(qū)石英匹配：T

=0.2%~0.5%光電管放大器指示器陰極（光敏）陽極紫敏光電管200~625nm紅敏625~1000nmR光電倍增管陰極陽極擋板共9個倍增極光二極管陣列檢測器例：二極管陣列，在190~820nm，由316個二極管組成，即2nm一個二極管。在1/10秒內(nèi)即可獲得全光譜圖。樣品光源光柵二極管陣列（一）光路類型單光束分光光度計檢測器數(shù)據(jù)處理顯示樣品光源單色器參比二、分光光度計的光學(xué)性能與類型雙光束分光光度計光源單色器樣品參比檢測器同步切光器（旋轉(zhuǎn)扇面鏡）（二）光學(xué)性能波長范圍195~820nm波長準(zhǔn)確度≤0.5nm波長重現(xiàn)性≤0.5nm透光率測量范圍0~150%（T）吸光度測量范圍-0.1730~+2.00（A）光度準(zhǔn)確度T滿量程誤差≤0.5%光度重復(fù)性≤0.5%分辨率=0.3(260nm處)雜散光220nm處NaI(1%g/ml)≤0.5%吸光度的校正K2Cr2O7溶液：0.0400gK2Cr2O7溶于1L0.05mol/L的KOH溶液中比色皿厚度為1cm溫度為250C測定不同波長下的吸光度

吸收池的校正（配對）a樣品b參比A1=A樣-A參1.2.a參比b樣品A2=A樣-A參要求：A=

A1-A2<1%第三節(jié)、紫外可見分光光度分析方法①對比吸收光譜特征數(shù)據(jù)max

吸收系數(shù)較大靈敏度高

或E1cm1%不同吸收基團(tuán)（相同吸收基團(tuán)）的不同化合物，可有相同的max，但分子量（M）卻很難相同。=10/M

=M/10例如3位酮體4位烯鍵的甾體類化合物在240nm處都有吸收峰A240nm安宮黃體酮炔諾酮=408=571②對比吸收度或吸收系數(shù)的比值1處A1=E1Cl2處A2=E2ClA1A2=E1E2如VB12的鑒別，中國藥典規(guī)定：A361A278=1.70~1.88A361A550=3.15~3.45AAA醋酸潑尼松醋酸氫化可的松醋酸可的松用紫外吸收光譜進(jìn)行定性時需注意：當(dāng)兩種純化合物的吸收光譜有明顯差別時，可以肯定是兩個不同的化合物，而兩吸收光譜相同時，不能肯定是同一化合物。2．雜質(zhì)限量檢查藥物中雜質(zhì)，常需制定一個允許其存在的限量。腎上腺素腎上腺酮例如：A310nm在310nm處腎上腺酮有較強(qiáng)吸收腎上腺素吸收很小為控制腎上腺素中腎上腺酮的量，產(chǎn)品用紫外吸收光度法測定時，要求A<0.05。根據(jù)A=ECl當(dāng)A=0.05時C=AEl=0.054351=0.00012g/100ml產(chǎn)品溶液：2mg/ml=0.2g/100ml雜質(zhì)含量：C雜質(zhì)C產(chǎn)品100%=0.000120.2100%=0.06%2．雜質(zhì)限量檢查有時用A峰/A谷來控制雜質(zhì)限量例：碘磷定

max=294nm雜質(zhì)無吸收

min=262nm雜質(zhì)有吸收碘磷定純品：A294A262=3.39若有雜質(zhì)A262A294A262三、單組分的定量方法（一）吸光系數(shù)法配制溶液在一定時測A或T%根據(jù)A=-lgT=ECl進(jìn)行計算求出含量可查手冊選擇的原則：1.選吸收峰max處2.避免干擾3.不選末端吸收處提高靈敏度許多溶劑在短波長處有吸收。溶劑的極限波長組分的測定波長必須大于溶劑的截止波長例：VB12樣品25.0mg用水溶成1000ml后，盛于1cm吸收池中，在361nm處測得吸收度為0.507，已知E值是207，計算其百分含量。解：C測=A/El=0.507/207=0.00245C樣=25.0mg/ml=0.0025g/100ml

VB12(%)=C測/C樣100%=0.00245/0.0025100%=98.00%（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線法ACAxCx對同一臺儀器，在相同條件下：A=KC不再是物質(zhì)的常數(shù)，隨不同儀器而不同。（三）對照法相同條件下配制標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液，相同的選定波長處測定：A標(biāo)=EC標(biāo)lA樣=EC樣lA標(biāo)EC標(biāo)l

=A樣EC樣lA標(biāo)C標(biāo)

=A樣C樣C標(biāo)A樣C樣=A標(biāo)四、多組分的定量方法解聯(lián)立方程組雙波長法

等吸收雙波長法系數(shù)倍率法導(dǎo)數(shù)光譜法雙波長法（等吸收雙波長消去法）A1xA2x=Axy12選擇1、

2使：1處：A1=A1yA1x+2處：A2yA2x+A2=A=A2-A1=A2)y(A2x+A1)y(A1x+-A1yA2y-==E1)

y(E2y-Cyl系數(shù)倍率法有時不容易從兩組分的吸收光譜中找到合適的等吸收點(diǎn)。AA系數(shù)倍率法選擇1、

2K=E2xE1x=令：A=KA2-A1

A12A=KA2-A1=A2)yK(A2x+A1)y(A1x+-=(KA1)

yA2y-+(KA1)

xA2x-A2xA1x=0E1)

y=(KE2y-Cylxy導(dǎo)數(shù)光譜法如果將一個吸收光譜寫成一個波長的函數(shù)：

A=Cf()它的導(dǎo)函數(shù)的圖像就是導(dǎo)數(shù)光譜。A（）i=Ai+1-Aii+1-i1.導(dǎo)數(shù)光譜的波形和特點(diǎn)：零階一階二階三階四階導(dǎo)數(shù)階數(shù)，峰數(shù)，峰形更銳，分辨能力。峰位：在奇數(shù)階光譜中為0，在偶數(shù)階光譜中為極值。拐點(diǎn)：在偶數(shù)階光譜中為0，在奇數(shù)階光譜中為極值。2.導(dǎo)數(shù)光譜對干擾吸收的消除若能把干擾吸收表達(dá)為一個冪函數(shù)：A干=a0+a1+a22+a33

+…+ann待測組分吸收U與干擾組分共存時：A=a0

+a1+a22+a33+…+ann+

UA’=a1

+2a2+3a32+…+nan

n-1+

U’An+1’=

Un+1’例：組分階次比干擾階次高時可消除干擾3.導(dǎo)數(shù)光譜的