- 被代替
- 已被新標(biāo)準(zhǔn)代替
- 2003-04-01 頒布
- 2003-05-15 實(shí)施
下載本文檔
文檔簡介
犐犆犛65.020.99
犅20
中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)
犖犢/犜674—2003
轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測
犇犖犃提取和純化
犇犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳犵犲狀犲狋犻犮犪犾犾狔犿狅犱犻犳犻犲犱狆犾犪狀狋狅狉犵犪狀犻狊犿狊犪狀犱
犱犲狉犻狏犲犱狆狉狅犱狌犮狋狊—犇犖犃犲狓狋狉犪犮狋犻狅狀犪狀犱狆狌狉犻犳犻犮犪狋犻狅狀
20030401發(fā)布20030515實(shí)施
中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布
書
犖犢/犜674—2003
前言
本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部科技教育司提出。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)所、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所、上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)
院、農(nóng)業(yè)部科技發(fā)展中心、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:賈士榮、金蕪軍、張大兵、彭于發(fā)、黃昆侖、李寧、汪其懷、羅云波。
本標(biāo)準(zhǔn)首次發(fā)布。
Ⅰ
書
犖犢/犜674—2003
轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測
犇犖犃提取和純化
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品中DNA提取和純化的方法和技術(shù)要求。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品中DNA的提取和純化。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有
的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn),然而,鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究
是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
NY/T672轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測通用要求
NY/T673轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測抽樣
3原理
通過物理和化學(xué)方法使DNA從樣品的不同組分中分離出來。利用不同的純化方法,棄除樣品中
的蛋白質(zhì)、脂肪、多糖及其他次生代謝物,及DNA提取過程中加入的三氯甲烷、異戊醇、異丙醇、乙醇和
乙酸鈉等,獲得純化的DNA。
4試劑與溶液
除非另有說明,在分析中僅使用分析純試劑;配制好的溶液經(jīng)高溫滅菌后使用。
4.1溴代十六烷基三甲胺(cetyltrimethylammoniumbromide,CTAB)。
4.2三羥甲基氨基甲烷[tris(hydroxymethyl)aminomethane,Tris]。
4.3二水乙二胺四乙酸二鈉(ethylenediaminetetraaceticacid,disodiumsalt,dihydrate,EDTANa·
2H2O)。
4.4E巰基乙醇(Emercaptoethanol)。
4.5三氯甲烷(chloroform)。
4.6異戊醇(isoamylalcohol)。
4.7異丙醇(isopropylalcohol)。
4.8三氯甲烷+異戊醇=24+1(體積比)。
4.976%乙醇溶液:?。罚叮埃恚虩o水乙醇,加水定容至1L。
4.1070%乙醇溶液:?。罚埃埃恚虩o水乙醇,加水定容至1L。
4.11CTAB提取緩沖液Ⅰ:配制每升CTAB提取緩沖液Ⅰ,應(yīng)在800mL去離子水中加入46.75g氯
化鈉,搖動容器使溶質(zhì)完全溶解,然后加入50mL1mol/LTrisHCl(pH8.0)[在800mL去離子水中溶
解121.1g三羥甲基氨基甲烷(Tris),冷卻至室溫后用濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0(約需42mL濃
鹽酸),加水定容至1L,分裝后高壓滅
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