動(dòng)物細(xì)胞的原代培養(yǎng)資料講解

動(dòng)物細(xì)胞的原代培養(yǎng)(péiyǎng)－－組織(zǔzhī)塊法第一頁，共39頁。無菌室下風(fēng)口(fēngkǒu)上風(fēng)口(fēngkǒu)第二頁，共39頁。液氮罐安全柜第三頁，共39頁。著裝(zhezhuānɡ)第四頁，共39頁。操作者進(jìn)入無菌室前先用肥皂洗凈雙手，然后用1‰新潔爾滅浸泡(jìnpào)消毒5分鐘第五頁，共39頁。將小白鼠斷頸處死，然后(ránhòu)用75%酒精或1‰新潔爾滅浸泡消毒，迅速進(jìn)入無菌室。第六頁，共39頁。將小白鼠置超凈工作臺(tái)上，打開(dǎkāi)腹腔第七頁，共39頁。用眼科(yǎnkē)剪和鑷，將腎外膜剪破，并將其剝向腎門，去腎外膜及脂肪，第八頁，共39頁。剪碎組織(zǔzhī)第九頁，共39頁。接種(jiēzhòng)組織塊第十頁，共39頁。移入培養(yǎng)箱中（注意(zhùyì)貼有組織塊的一面朝上），靜止2～3小時(shí)，然后將細(xì)胞培養(yǎng)瓶輕輕翻轉(zhuǎn)(fānzhuǎn)，繼續(xù)靜止培養(yǎng)。第十一頁，共39頁。觀察(guānchá)24～48小時(shí)后若培養(yǎng)液變成黃色且混濁，表示已被污染；若培養(yǎng)液變成紫色，一般細(xì)胞生長不好，則培養(yǎng)液pH過高；若培養(yǎng)液顯為橙黃、橘紅且清澈，一般顯示細(xì)胞生長良好。在相差顯微鏡下觀察，若此時(shí)見細(xì)胞自組織邊緣長出。繼續(xù)培養(yǎng)3～5日，再換部分或全部培養(yǎng)液，待多數(shù)(duōshù)組織塊的生長暈相接，小心挑掉組織塊，繼續(xù)培養(yǎng)3～4天，細(xì)胞貼滿細(xì)胞培養(yǎng)瓶壁時(shí)便可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。第十二頁，共39頁。骨髓瘤細(xì)胞(xìbāo)的培養(yǎng)第十三頁，共39頁。骨髓瘤細(xì)胞(xìbāo)第十四頁，共39頁。消化(xiāohuà)數(shù)分鐘第十五頁，共39頁。中止消化(xiāohuà)、吹散細(xì)胞第十六頁，共39頁。收集(shōují)細(xì)胞、離心第十七頁，共39頁。計(jì)數(shù)(jìshù)第十八頁，共39頁。細(xì)胞(xìbāo)傳代37℃、5％CO2培養(yǎng)(péiyǎng)第十九頁，共39頁。第二十頁，共39頁。小鼠的免疫(miǎnyì)實(shí)驗(yàn)第二十一頁，共39頁。市售綿羊(miányáng)血第二十二頁，共39頁。血球計(jì)數(shù)(jìshù)板計(jì)數(shù)(jìshù)，調(diào)整細(xì)胞濃度第二十三頁，共39頁。抓小鼠的方法(fāngfǎ)第二十四頁，共39頁。腹腔(fùqiāng)注射免疫第二十五頁，共39頁。尾靜脈(jìngmài)免疫第二十六頁，共39頁。皮下免疫(miǎnyì)第二十七頁，共39頁。足墊免疫(miǎnyì)第二十八頁，共39頁。脾臟(pízàng)免疫－1所需器具(qìjù)稱重(chēnɡzhònɡ)第二十九頁，共39頁。脾臟(pízàng)免疫－2注射(zhùshè)麻藥第三十頁，共39頁。脾臟(pízàng)免疫－3打結(jié)(dǎjié)固定小鼠第三十一頁，共39頁。脾臟(pízàng)免疫－4酒精(jiǔjīng)消毒去毛碘酒(diǎnjiǔ)消毒第三十二頁，共39頁。脾臟(pízàng)免疫－5剪開外皮剪開腹膜(fùmó)找到脾臟(pízàng)第三十三頁，共39頁。脾臟(pízàng)免疫－6注射(zhùshè)抗原第三十四頁，共39頁。脾臟(pízàng)免疫－7注射(zhùshè)雙抗縫合(fénghé)傷口第三十五頁，共39頁。每隔15天重復(fù)(chóngfù)注射作加強(qiáng)免疫，共重復(fù)(chóngfù)2次第三十六頁，共39頁。第三次免疫之后(zhīhòu)10天，將小鼠斷尾取血，用ELISA方法，檢測(cè)血清效價(jià)