T、B淋巴細(xì)胞課件

T、B淋巴細(xì)胞

淋巴細(xì)胞中的T細(xì)胞、Ｂ細(xì)胞在光學(xué)顯微鏡下難以辨別。經(jīng)過對淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志的研究發(fā)現(xiàn)，免疫細(xì)胞膜表面存在著大量不同種類的蛋白質(zhì)分子。這些膜表面分子可用于區(qū)別和鑒定不同的免疫細(xì)胞及其亞群。但更重要的意義是它們與免疫細(xì)胞的分化成熟和免疫功能密切相關(guān)。一、T細(xì)胞的膜表面分子T細(xì)胞的膜表面分子TCR-CD3復(fù)合物CD4/CD8分子CD28、CTLA-4分子CD2分子CD40L絲裂原受體(PHA、ConA、PWM)

CKR

（一）TCR-CD3復(fù)合物TCR：T細(xì)胞抗原受體（T-cellantigenreceptor）

T細(xì)胞表面特異性識別抗原的結(jié)構(gòu)CD3：傳遞T細(xì)胞活化信號ζζ或ζ

η

2.CD3分子①CD3分子具有5種肽鏈，即γ(gamma)、δ(delta)、ε(epsilon)、ζ(zeta)、η(eta)，均為跨膜蛋白。是TCR-CD3復(fù)合體中信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的亞單位，將TCR接受的抗原刺激信號轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞內(nèi)，使T細(xì)胞活化。②成熟T細(xì)胞表面的表面標(biāo)志，用于成熟T細(xì)胞的檢測。

（二）T細(xì)胞的其他膜表面標(biāo)志1.CD4/CD8分子分別出現(xiàn)在不同的成熟T細(xì)胞表面（1）是TCR-CD3的輔助受體，輔助TCR識別MHC-抗原肽分子，又幫助TCR的信號傳遞。（2）依此，T細(xì)胞可分成兩大亞群：CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞，前者具有輔助性T（Th）細(xì)胞的功能，后者具有細(xì)胞毒性T（CTL或Tc）細(xì)胞的活性。

(1)CD4：CD4＋T細(xì)胞約占αβT細(xì)胞

的65%

功能

輔助受體

人類免疫缺陷病毒（HIV）的受體

鑒定T細(xì)胞亞群（CD4）的標(biāo)志(2)CD8：CD8＋T細(xì)胞約占αβT細(xì)胞

的35%功能輔助受體鑒定T細(xì)胞亞群（CD8）的標(biāo)志輔助受體①

CD8分子與MHCⅠ類分子的α3功能區(qū)結(jié)合，可增強(qiáng)TCRαβ與MHCⅠ-抗原肽之間的相互作用。②促進(jìn)TCR識別抗原后的TCR-CD3復(fù)合物介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用。

T細(xì)胞活化的第一信號：

由TCR-CD3復(fù)合物識別并結(jié)合抗原性多肽傳遞抗原信號；CD4、CD8分別識別MHCII和MHCI分子共同完成。②

CTLA-4分子表達(dá)在活化的T細(xì)胞表面，其配體亦是B7分子，但與B7分子的親和力顯著高于CD28。與CD28相反，CTLA-4分子同B7分子結(jié)合提供抑制信號給化T細(xì)胞，阻止T細(xì)胞的增殖，限制T細(xì)胞分泌IL-2。

3.CD2分子又稱LFA-2(lymphocytefunctionassociatedantigen-2,淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-2)和E受體(綿羊紅細(xì)胞受體)。

（1）分布：成熟T細(xì)胞,活化T細(xì)胞表達(dá)水平升高。（2）CD2是與綿羊紅細(xì)胞(SRBC)結(jié)合的受體，又稱E（erythrocyte）受體，因Ｂ細(xì)胞無此表面受體，曾將其作為人T細(xì)胞的重要標(biāo)志。檢測方法是取人外周血淋巴細(xì)胞與SRBC混合后，T細(xì)胞周圍結(jié)合SRBC形成玫瑰花狀，稱E玫瑰花結(jié)試驗(yàn)。曾用此法檢測外周血的T細(xì)胞數(shù)。E花環(huán)試驗(yàn)

4.CD40L(CD40

ligand，又稱gp39分子)（1）分布：活化T細(xì)胞表面的糖蛋白（2）功能：T細(xì)胞表面的CD40L與B細(xì)胞表面的CD40相互作用提供B細(xì)胞活化最重要的第二信號，使B細(xì)胞進(jìn)入充分活化狀態(tài)，促B細(xì)胞對TD-Ag應(yīng)答。

二、T細(xì)胞亞群及其功能1.按表達(dá)TCR類型：αβT細(xì)胞γδT細(xì)胞2.按CD4和CD8表達(dá)：CD4＋T細(xì)胞

CD8＋T細(xì)胞

3.按T細(xì)胞功能：調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Th、Ts）效應(yīng)性T細(xì)胞（CTL、TD）4.按是否受過特異性抗原刺激：童貞T細(xì)胞（初始T細(xì)胞）、活化T細(xì)胞、記憶T細(xì)胞

CD4＋T細(xì)胞

CD8＋T細(xì)胞—αβT細(xì)胞Th1細(xì)胞Th2細(xì)胞CTL(Tc)細(xì)胞Th3細(xì)胞1輔助性T細(xì)胞(helpTcells,Th)實(shí)驗(yàn)說明的問題大劑量（亞致死量）X射線導(dǎo)致T、B淋巴細(xì)胞被殺死植入T細(xì)胞（Th2）無抗體產(chǎn)生植入B細(xì)胞少量抗體產(chǎn)生植入T、B細(xì)胞大量抗體產(chǎn)生

②CD8＋T細(xì)胞

CD表型：CD3+CD4-CD8+，主要為CTL細(xì)胞亞群。

識別抗原時(shí)受MHCⅠ類分子限制

特點(diǎn)功能：細(xì)胞毒作用，免疫調(diào)節(jié)機(jī)制Fas/FasL途徑釋放細(xì)胞毒性蛋白：穿孔素顆粒酶特異性介導(dǎo)靶細(xì)胞裂解或凋亡的機(jī)制為

1.釋放穿孔素，致靶細(xì)胞裂解、死亡；2.釋放顆粒酶，借助穿孔素的孔道進(jìn)入靶細(xì)胞，靶細(xì)胞凋亡；3.CTL高表達(dá)FasL，通過Fas/FasL途徑導(dǎo)致靶細(xì)胞（表達(dá)Fas）凋亡。

TCRγδ細(xì)胞，又稱TCR1T細(xì)胞

少數(shù)成熟T細(xì)胞的TCR分子是由γ鏈和δ鏈組成的異二聚體分子，結(jié)構(gòu)與TCRαβ相似，也稱TCR-1。TCRγδ細(xì)胞多數(shù)為CD4-CD8-雙陰性T細(xì)胞，表面的抗原識別受體缺乏多樣性，抗原識別譜狹窄，它可直接識別抗原(多肽、類脂分子)，不必與MHC結(jié)合。主要為：HSP、CD1復(fù)合物、病毒蛋白及CD1提呈的脂類和糖脂類抗原。

TCRγδ細(xì)胞主要存在于小腸粘膜上皮和表皮，而外周血中僅占成熟T細(xì)胞的1%～5%。因此TCRγδ細(xì)胞是皮膚粘膜局部抗病毒感染的重要效應(yīng)細(xì)胞；同時(shí)還具有抗腫瘤作用及分泌細(xì)胞因子參與免疫調(diào)節(jié)。TCRγδ細(xì)胞識別病原體表面抗原分子后，增殖分化為效應(yīng)細(xì)胞發(fā)揮殺傷作用，殺傷靶細(xì)胞的機(jī)制與NK細(xì)胞和CD8+CTL細(xì)胞相似。T細(xì)胞αβT細(xì)胞γδT細(xì)胞TCR不同CD8+T細(xì)胞CD4+T細(xì)胞Th2細(xì)胞Th1（TD）細(xì)胞CTL細(xì)胞Ts細(xì)胞效應(yīng)性T細(xì)胞調(diào)節(jié)性T細(xì)胞CD4/CD8不同功能不同初始T細(xì)胞是沒有接受過抗原刺激的成熟T細(xì)胞活化T細(xì)胞是執(zhí)行機(jī)體免疫效應(yīng)功能的細(xì)胞記憶性T細(xì)胞維持機(jī)體免疫記憶功能（三）根據(jù)是否受過特異性抗原的刺激可分為：胸腺實(shí)質(zhì)胸腺細(xì)胞:未成熟的T細(xì)胞胸腺基質(zhì)細(xì)胞（TSC）：胸腺上皮細(xì)胞、Mφ、DC等細(xì)胞外基質(zhì)成分三、T細(xì)胞的分化發(fā)育與膜分子的表達(dá)（一）胸腺的結(jié)構(gòu)1.胸腺基質(zhì)細(xì)胞

胸腺基質(zhì)細(xì)胞可分泌細(xì)胞因子IL－7和肽類分子胸腺素、促胸腺生成素、胸腺激素等，并表達(dá)高水平的MHCI類、II類分子，促進(jìn)胸腺細(xì)胞成熟為T細(xì)胞，表現(xiàn)為TCR-CD3成熟，以及不同分化抗原的表達(dá)（CD4、CD8）。通過兩種方式影響胸腺細(xì)胞分化：①細(xì)胞—細(xì)胞間相互接觸②分泌細(xì)胞因子和肽類分子

（二）胸腺為T細(xì)胞分化提供微環(huán)境2.細(xì)胞外基質(zhì)（extracellularmatrix）組成：膠原蛋白、網(wǎng)狀蛋白纖維、葡萄糖胺聚糖和糖蛋白。功能：①維持胸腺內(nèi)細(xì)胞的正常生理功能②促進(jìn)細(xì)胞—細(xì)胞間的相互接觸

③胸腺細(xì)胞移行成熟（三）胸腺的功能1.T細(xì)胞分化、成熟的場所2.自身耐受的建立與維持胸腺基質(zhì)細(xì)胞與胸腺細(xì)胞的相互作用構(gòu)成了決定T細(xì)胞分化、增殖和選擇性發(fā)育的胸腺微環(huán)境。

胸腺細(xì)胞（未成熟的T細(xì)胞）在胸腺微環(huán)境中，循被膜下→皮質(zhì)→髓質(zhì)移行成熟在移行過程中，胸腺細(xì)胞表面分子發(fā)生變化：在被膜下為CD4-CD8-雙陰性（DN）細(xì)胞；在皮質(zhì)為CD4+CD8+雙陽性（DP）細(xì)胞；在髓質(zhì)為CD4+或CD8+單陽性（SP）細(xì)胞。（四）陽性選擇與陰性選擇

1.陽性選擇—發(fā)生在胸腺皮質(zhì)

指發(fā)育中的雙陽性(CD4+CD8+)胸腺細(xì)胞在皮質(zhì)與胸腺上皮細(xì)胞表達(dá)的自身MHC分子相互作用，凡與自己MHC分子有適當(dāng)親和性的胸腺細(xì)胞可與之結(jié)合并導(dǎo)致克隆增殖，而不能與自身MHC分子發(fā)生有效結(jié)合或親和力過高的DP細(xì)胞死亡。決定T細(xì)胞對抗原應(yīng)答的MHC限制性。

胸腺上皮細(xì)胞—提供自身MHC分子“雙陽性”（DP，CD4+CD8+）胸腺細(xì)胞—主要存在于皮質(zhì)區(qū)，與胸腺上皮細(xì)胞表達(dá)的自身MHC分子相互作用，其中與MHCⅠ分子結(jié)合的DP細(xì)胞CD4基因關(guān)閉，CD8表達(dá)水平升高，CD4表達(dá)水平下降直至丟失；而與MHCⅡ分子結(jié)合的DP細(xì)胞CD8基因關(guān)閉，CD4表達(dá)水平升高，CD8表達(dá)水平下降直至丟失，而不能與自身MHC分子發(fā)生有效結(jié)合或親和力過高的DP細(xì)胞死亡。獲得了自身MHC限制性。↓“單陽性”(SP，CD4+或CD8+

)TCRαβ

T細(xì)胞—皮、髓質(zhì)交界處T細(xì)胞發(fā)育的陽性選擇（positiveselection）CD4+CD8+T細(xì)胞＋胸腺上皮細(xì)胞（表面MHC分子）如果與MHC-I結(jié)合，最終分化為CD8+T細(xì)胞如果與MHC-II結(jié)合則最終分化為CD4+T細(xì)胞如果與MHC分子不結(jié)合或親和力過高則在胸腺皮質(zhì)中凋亡胸腺細(xì)胞經(jīng)陽性選擇賦予成熟T細(xì)胞在識別抗原時(shí)具有自身MHC限制性2.陰性選擇—發(fā)生在胸腺皮、髓質(zhì)交界處及髓質(zhì)區(qū)樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞—提供自身抗原肽

經(jīng)過陽性選擇的胸腺細(xì)胞在皮質(zhì)和髓質(zhì)交界處及髓質(zhì)區(qū)與樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞表面的MHCⅡ或Ⅰ類分子-自身抗原肽復(fù)合物結(jié)合。凡能夠以較高親和力與細(xì)胞表面的MHC—自身抗原肽結(jié)合的胸腺細(xì)胞將被誘導(dǎo)凋亡，導(dǎo)致自身反應(yīng)性T細(xì)胞克隆清除或形成克隆不應(yīng)答狀態(tài)，決定T細(xì)胞自身耐受性?！@得自身MHC限制性、自身耐受性（CD4+或CD8+TCRαβT細(xì)胞）

（成熟T細(xì)胞）皮質(zhì)皮髓交界髓質(zhì)皮質(zhì)上皮細(xì)胞DC髓質(zhì)上皮細(xì)胞巨噬細(xì)胞雙陰性期雙陽性期單陽性期T細(xì)胞發(fā)育過程：三個(gè)階段三個(gè)重要事件

雙陰性細(xì)胞（DN,CD4-CD8-）

TCR基因重排（獲得功能性與多樣性的TCR

）

雙陽性細(xì)胞（DP，TCR+CD4+CD8+）

陽性選擇（獲得MHC限制性）

單陽性細(xì)胞(SP，

CD4+或CD8+T細(xì)胞）

陰性選擇（獲得自身耐受）成熟的單陽性細(xì)胞B淋巴細(xì)胞

是淋巴干細(xì)胞在鳥類法氏囊和哺乳類動(dòng)物的骨髓中分化成熟而來，故又稱囊依賴性淋巴細(xì)胞（bursadependentlymphocytes)或骨髓依賴性淋巴細(xì)胞（bonemarrowdependentlymphocytes)，均簡稱Ｂ細(xì)胞。Ｂ細(xì)胞的主要功能是產(chǎn)生抗體負(fù)責(zé)體液免疫。但對T細(xì)胞的功能也有重要作用，特別在T細(xì)胞識別抗原時(shí)，能將處理的抗原遞呈給T細(xì)胞，并提供協(xié)同刺激因子使T細(xì)胞充分活化。

一、B細(xì)胞的膜表面分子

（一）BCR復(fù)合物（mIg-Igα/Igβ）

組成BCR(B-cellantigenreceptor）B細(xì)胞表面特異性識別抗原的結(jié)構(gòu)-mIgIgα(CD79a)Igβ(CD79b)傳導(dǎo)BCR同抗原結(jié)合產(chǎn)生的活化信號

BCR復(fù)合物BCR復(fù)合物：mIg-Igα/Igβ不成熟B細(xì)胞：mIgM成熟B細(xì)胞：mIgM+mIgD

BCR識別抗原的特點(diǎn)及意義

BCR識別的抗原無須APC細(xì)胞進(jìn)行加工處理，也無MHC限制性。mIg-Igα/Igβ產(chǎn)生刺激B細(xì)胞活化的第一信號

BCR與TCR的比較

BCRTCR結(jié)構(gòu)BCR-Igα,βTCR-CD3結(jié)合形式抗原-BCRMHC-抗原-TCR結(jié)合抗原游離抗原MHC-抗原肽識別表位構(gòu)象表位線性表位

（二）B細(xì)胞其它主要表面膜分子1.CD19、CD21和CD81分子

(1)B細(xì)胞活化的協(xié)同受體：CD19、CD21（CR2）和CD81共同組成

CD21（CR2）：補(bǔ)體C3d受體CD19：與CD21交聯(lián)，向胞內(nèi)傳遞信號CD81：與CD19交聯(lián)增強(qiáng)BCR識別抗原產(chǎn)生的信號：補(bǔ)體系統(tǒng)活化

C3d片段與Ag結(jié)合Ag-C3d復(fù)合物BCR與CD21/CDl9/CD81復(fù)合物交聯(lián)增強(qiáng)BCR識別抗原產(chǎn)生的信號，促進(jìn)B細(xì)胞活化

B細(xì)胞重要標(biāo)志，表達(dá)于前B細(xì)胞到成熟B細(xì)胞各發(fā)育階段。(2)功能意義：加強(qiáng)BCR復(fù)合物傳遞的信號，使B細(xì)胞對抗原的敏感性增強(qiáng)100—1000倍。

2.CD40分子

(1)分布：B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞等(2)生物學(xué)功能與CD40L(活化T細(xì)胞)結(jié)合提供B細(xì)胞等活化最重要的第二信號，使之進(jìn)入充分活化狀態(tài)，促進(jìn)B細(xì)胞對TD-Ag應(yīng)答。

B細(xì)胞活化的模型活性封閉沒有Th細(xì)胞的幫助第1信號BIL-4,IL-5,IL-10第2信號ThB第1信號CD40CD40LCD40

3.B7分子包括B7.１（CD80）和B7.2（CD86）(1)分布：成熟B細(xì)胞—初始B細(xì)胞低表達(dá)活化B細(xì)胞高表達(dá)(2)功能：B7分子與表達(dá)在T細(xì)胞上的CD28分子結(jié)合，為初始T細(xì)胞提供協(xié)同刺激信號(第二活化信號），促使T細(xì)胞活化和增殖。

4.絲裂原受體如LPS受體，與LPS結(jié)合后，直接誘導(dǎo)靜息B細(xì)胞活化，增殖與分化。5.細(xì)胞因子受體如IL-2R,IL-4R,IL-6R,IL-10R等二、B細(xì)胞亞群

根據(jù)對抗原的刺激狀態(tài)

依據(jù)CD5分子表達(dá)分類初始B細(xì)胞活化B細(xì)胞記憶B細(xì)胞B1細(xì)胞—CD5+

B2細(xì)胞—CD5-

B細(xì)胞的亞群B1細(xì)胞B2細(xì)胞表面分子mIgM++mIgD—+CD5+—產(chǎn)生Ig的特異性多反應(yīng)性特異性分泌Ig的同種型IgM＞IgGIgG＞IgM針對抗原TI-AgTD-Ag再次應(yīng)答無有三、B細(xì)胞的功能產(chǎn)生抗體，負(fù)責(zé)體液免疫作為專職抗原遞呈細(xì)胞，遞呈抗原分泌細(xì)胞因子參與免疫調(diào)節(jié)

IL-7、IL-13、IL-14、IFN-γ不依賴抗原刺激的骨髓內(nèi)分化階段依賴抗原刺激的外周分化階段未成熟B細(xì)胞僅表達(dá)mIgM,成熟B細(xì)胞同時(shí)表達(dá)mIgD、mIgM四、B細(xì)胞的分化發(fā)育（一）抗原非依賴期(中樞免疫器官—骨髓)骨髓—造血組織，各類免疫細(xì)胞的發(fā)生場所。1.骨髓的結(jié)構(gòu)與造血微環(huán)境骨髓紅骨髓黃骨髓造血組織血竇造血細(xì)胞：基質(zhì)細(xì)胞：分泌多種細(xì)胞因子促造血干細(xì)胞分化發(fā)育—骨髓微環(huán)境骨髓中的原始細(xì)胞、具有多種分化潛能的各種血細(xì)胞

骨髓微環(huán)境：造血組織中的基質(zhì)細(xì)胞（網(wǎng)狀細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等）及其分泌的多種細(xì)胞因子（IL-3、IL-4、IL-6、IL-7、GM-CSF等）、細(xì)胞外基質(zhì)共同構(gòu)成骨髓微環(huán)境，促進(jìn)造血干細(xì)胞分化發(fā)育。

2.骨髓的功能（1）各類血細(xì)胞和免疫細(xì)胞發(fā)生的場所（2）B細(xì)胞分化成熟場所

發(fā)育過程：造血干細(xì)胞淋巴樣干細(xì)胞祖B細(xì)胞（pro-B）前B細(xì)胞(pre-B)未成熟B細(xì)胞成熟B細(xì)胞(在外周免疫器官)。骨髓微環(huán)境在B細(xì)胞發(fā)育中的作用：A.粘附性接觸---粘附分子；B.提供生長因子---SCF和IL-7等。

（3）再次體液免疫應(yīng)答發(fā)生的場所緩慢持久地產(chǎn)生抗體，血清抗體的主要來源。

外周免疫器官？Ag（二）抗原依賴期(外周免疫器官)

成熟B細(xì)胞漿細(xì)胞抗原IgD作為一種類型的免疫球蛋白只在B細(xì)胞的發(fā)育過程中出現(xiàn)。它對B細(xì)胞在不同的發(fā)育階段起到穩(wěn)定的作用。在發(fā)育過程中，B細(xì)胞未表達(dá)IgD時(shí)，遇到抗原就會(huì)發(fā)生凋亡；一旦細(xì)胞開始表達(dá)IgD，B細(xì)胞就會(huì)進(jìn)入一種穩(wěn)定狀態(tài)，遇到抗原就會(huì)分泌Ig。淋巴細(xì)胞如何識別天文數(shù)字的抗原NK受體種類少，“粗線條”識別

TCRTBBCR一個(gè)克隆，一個(gè)受體識別受體的充分多樣性（diversity）︱︱

五、淋巴細(xì)胞抗原識別受體的

編碼基因及多樣性的產(chǎn)生

機(jī)體內(nèi)存在眾多能特異性識別各種抗原的T細(xì)胞或B細(xì)胞不同的T、B細(xì)胞克隆其表面的BCR或TCR的可變區(qū)的氨基酸組成不同編碼基因的差異

（一）遺傳學(xué)基礎(chǔ)發(fā)育早期的T、B細(xì)胞基因?yàn)檎椎?、呈分隔狀態(tài)的胚系基因片段。分化成熟過程中，淋巴細(xì)胞的胚系基因片段發(fā)生不同的重排及重組，導(dǎo)致產(chǎn)生數(shù)量巨大、識別抗原特異性各異的TCR、BCR。1.BCR、TCR的胚系基因結(jié)構(gòu)（1）BCR的胚系基因結(jié)構(gòu)每種Ig肽鏈的編碼基因可分為編碼V區(qū)的和編碼C區(qū)的兩大部分。Ig重鏈V區(qū)基因—由三種胚系基因片段V、D、J拼接而成Ig輕鏈V區(qū)基因—由二種胚系基因片段V、J拼接而成（2）TCRV區(qū)基因—由三種胚系基因片段V、D、J拼接而成BCR和TCRV區(qū)的胚系基因片段V、D、J各有多個(gè)，但在一個(gè)淋巴細(xì)胞細(xì)胞中只有一個(gè)片段參與組成抗原受體V區(qū)的編碼基因。2.BCR、TCR的基因重排及機(jī)制（1）BCR—V、D、J、C基因群中各選擇一個(gè)片段，組成單個(gè)Ig的編碼基因，再轉(zhuǎn)錄翻譯成功能性Ig。重鏈：VH-DH-JH-CH652769輕鏈：VL-JL-CL

κ4051λ3044VH=65×27×6=10530Vκ=40×5=200Vλ=30×4=120VH×Vκ=10530×200=2