二十五病毒感染檢查及防治原則

二十五病毒感染檢查及防治原則第1頁/共25頁第一節(jié)病毒感染的檢查（一）標本的采集與送檢1.標本采集2.標本處理標本采取必須嚴格無菌操作。對于本身帶有雜菌的標本，如糞便、咽嗽液、痰液等，應加入高濃度青霉素、鏈霉素、慶大霉素等處理。大多數(shù)病毒對甘油有抵抗力，送檢組織、糞便標本等可置于含抗生素的50%甘油緩沖鹽水中，低溫保存送檢。第2頁/共25頁第一節(jié)病毒感染的檢查（一）標本的采集與送檢1.標本采集2.標本處理3.標本送檢與保存病毒在室溫下很快滅活，標本采集后應立即送到病毒實驗室，如實驗室距離較遠或一時無法立即送檢時，應將標本放入裝有冰塊的冰壺內(nèi)，最好在1-2小時內(nèi)送到實驗室，立即進行檢查或分離培養(yǎng)。暫時不能檢查或分離培養(yǎng)時，應將標本存放在-70℃低溫冰箱內(nèi)保存。第3頁/共25頁第一節(jié)病毒感染的檢查（一）標本的采集與送檢（二）病毒的形態(tài)學檢查1.光學顯微鏡檢查用光學顯微鏡可直接觀察痘類病毒的單個病毒體；也可直接被某些病毒受染的組織細胞中的包涵體。根據(jù)包涵體的特點，作出輔助診斷。2.電子顯微鏡檢查1）電鏡直接檢查法：用于從皰疹液、糞便或血清標本中直接檢查皰疹病毒、甲肝病毒、乙肝病毒顆粒等；2）免疫電鏡檢查法：將病毒標本制成懸液，加入特異性抗體混合，可使標本中的病毒顆粒凝聚成團。再用電鏡，可提高病毒的檢出率。第4頁/共25頁第一節(jié)病毒感染的檢查（一）標本的采集與送檢（二）病毒的形態(tài)學檢查（三）病毒的分離培養(yǎng)1.動物接種2.雞胚培養(yǎng)3、組織細胞培養(yǎng)第5頁/共25頁第一節(jié)病毒感染的檢查（三）病毒的分離培養(yǎng)1.動物接種：是最原始的病毒培養(yǎng)方法。目前對某些病毒分離仍然應用。常用的動物有小鼠、大鼠、豚鼠、兔和猴等。接種途徑有鼻內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腦內(nèi)、腹腔內(nèi)、靜脈等。根據(jù)病毒種類不同，選擇敏感的動物及適宜接種部位。如嗜神經(jīng)病毒（乙腦病毒、狂犬病毒）可選用小鼠腦內(nèi)接種，以使病毒增殖，并根據(jù)動物出現(xiàn)的癥狀特征幫助診斷。2.雞胚培養(yǎng)第6頁/共25頁第一節(jié)病毒感染的檢查（三）病毒的分離培養(yǎng)1.動物接種：2.雞胚培養(yǎng)：是一種經(jīng)濟簡便的方法。一般采用孵化9-12天的雞胚，根據(jù)病毒的特性將病毒標本接種于雞胚的不同部位。如皰疹病毒接種于絨毛尿囊上，流感病毒初次分離接種于羊膜腔，傳代培養(yǎng)接種于尿囊內(nèi)。3、組織細胞培養(yǎng)第7頁/共25頁第一節(jié)病毒感染的檢查（三）病毒的分離培養(yǎng)1.動物接種：2.雞胚培養(yǎng)：3、組織細胞培養(yǎng)將離體活組織塊或分散的活細胞加以培養(yǎng)，統(tǒng)稱為組織培養(yǎng)。后者雙稱為單層細胞培養(yǎng)。是目前分離培養(yǎng)病毒的主要方法。通常用人胚腎細胞、人胎盤羊膜細胞、人胚二培體細胞、雞胚等原代細胞以及傳代細胞等制備單層細胞培養(yǎng)。病毒感染細胞后，大多數(shù)能引起細胞病變，無需染色即可直接在普通光學顯微鏡下觀察。有的細胞不產(chǎn)生病變，但能改變培養(yǎng)液的PH，或出現(xiàn)紅細胞吸附及血凝現(xiàn)象（流感病毒），有時還可用免疫熒光技術(shù)檢查細胞中的病毒和細胞變化。組織培養(yǎng)多用于病毒分離培養(yǎng)和檢測中和抗體，制備疫苗等。第8頁/共25頁雞胚接種第9頁/共25頁（四）其他檢查方法1.病毒感染的血清學檢查應用血清學方法診斷病毒感染或進行流行病學調(diào)查就是利用抗原抗體能特異性結(jié)合的原理，用已知的病毒和特異性抗體檢測病人標本新分離的病毒株制備的抗原，或用已知的病毒抗原檢查病人血清中有無相應抗體。病人恢復期血清的抗體效價必須比急性期增高4倍以上才有診斷意義。常用的方法有中和試驗、補休結(jié)合試驗、血凝抑制試驗、免疫擴散及熒光素、酶、放射性核素標記技術(shù)等。2.病毒核酸雜交技術(shù)3.聚合酶鏈反應第10頁/共25頁（四）其他檢查方法1.病毒感染的血清學檢查2.病毒核酸雜交技術(shù)是一種敏感性高、特異性強、應用面廣的診斷技術(shù)和研究手段。原理是根據(jù)雙股DNA具有解離和重新組合的特性，用一條已知的單鏈DNA，標記上放射性核素作探針與固定在硝酸纖維膜上的待測單股DNA進行雜交，再用放射自顯影技術(shù)檢測，以確定有無病原體存在。3.聚合酶鏈反應第11頁/共25頁（四）其他檢查方法1.病毒感染的血清學檢查2.病毒核酸雜交技術(shù)3.聚合酶鏈反應（PCR）是一種快速體外擴增特異性DNA片段的技術(shù)，能在一至數(shù)小時內(nèi)通過簡單的酶促反應使待測的DNA擴增至數(shù)百萬倍，然后取反應產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，即可觀察到核酸條帶，不需放射性核素標記。該技術(shù)可用于病毒、細菌等微生物疾病的診斷。第12頁/共25頁用于病毒培養(yǎng)的細胞單層第13頁/共25頁人胚肺成纖維細胞單層（MRC），呈棱形第14頁/共25頁非洲綠猴腎細胞單層（Vero）第15頁/共25頁第16頁/共25頁

正常細胞細胞病變（CPE）第17頁/共25頁雞紅細胞吸附于流感病毒感染的細胞第18頁/共25頁第二節(jié)病毒感染的防治原則（一）病毒感染的預防1.人工自動免疫目前應用各種滅活疫苗或減毒活疫苗進行人工自動免疫。滅活疫苗常用的有流腦疫苗、狂犬疫苗、流感滅活疫苗等。減毒活疫苗常用的有脊髓灰質(zhì)炎疫苗、麻疹疫苗、流感疫苗、流行性腮腺炎疫苗、風疹疫苗、黃熱病疫苗以及上些聯(lián)合疫苗（如麻疹、風疹、腮腺炎聯(lián)合疫苗）等。滅活疫苗是用甲醛滅活劑滅活病毒核酸，但不影響病毒的抗原性。減毒活疫苗是用自然或人工選擇法對人無毒或弱毒的變異株來制備?；钜呙缑庖咝Ч茫赡芊底?，恢復毒力而致病，也可激活潛伏病毒引起持續(xù)性感染，故有潛在危險性。為提高疫苗的安全性，目前正試用于人體的還有亞單位疫苗（流感疫苗等）和基因工程疫苗，也稱多肽疫苗（乙肝疫苗）第19頁/共25頁第二節(jié)病毒感染的防治原則（一）病毒感染的預防1.人工自動免疫2.人工被動免疫常用的免疫制劑有免疫血清、胎盤球蛋白、人血球蛋白，以及與細胞免疫有關(guān)的轉(zhuǎn)移因子等。注入人免疫球蛋白對甲肝、麻疹、脊髓灰質(zhì)炎等具有緊急預防作用，可使接觸者不出現(xiàn)癥狀或僅出現(xiàn)輕微癥狀。近年來已應用含有高滴度抗-HBs的乙肝免疫球蛋白來預防乙肝，有一定療效。第20頁/共25頁第二節(jié)病毒感染的防治原則（一）病毒感染的預防（二）病毒感染的治療1.干擾素是機體受到病毒或其他干擾素誘生劑刺激，由巨噬細胞、淋巴細胞以及體細胞等多種細胞所產(chǎn)生的一種糖蛋白。（1）種類：α、β、γα、β又稱I型干擾素，γ又稱Ⅱ型干擾素。Ⅱ型干擾素對免疫細胞的調(diào)節(jié)作用強于I型干擾素，而抗病毒作用I型干擾素強于Ⅱ型干擾素。第21頁/共25頁第二節(jié)病毒感染的防治原則（二）病毒感染的治療1.干擾素（1）種類：α、β、γ（2）作用機理：干擾素作用于鄰近的正常細胞，使之合成抗病毒蛋白，抑制病毒蛋白的合成，影響病毒的組裝和釋放。抗病毒蛋白只作用于病毒，對宿主細胞蛋白質(zhì)合成沒有影響，故其副作用小。（3）生物學活性：廣譜抗病毒作用（治療病毒感染-乙肝、皰疹性角膜炎、帶狀皰疹、水痘等）、免疫調(diào)節(jié)作用、抗腫瘤作用第22頁/共25頁第二節(jié)病毒感染的防治原則（二）病毒感染的治療1.干擾素2.化學藥物由于病毒只能在活細胞內(nèi)增殖，故對病毒有效的化學治療劑多對機體細胞有一定損傷作用。目前療效好，毒性小的藥物有鹽酸金剛烷胺、阿糖腺苷、無環(huán)鳥苷、丙氧鳥苷