胃保護素對破骨細胞的作用

關(guān)于胃保護素對破骨細胞的作用第1頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五

Ghrelin(胃動素、胃腸動素)是生長激素促分泌物質(zhì)受體(growthhormonesecretagoguereceptor,GHS-R)的內(nèi)源性配體.

Ghrelin的結(jié)構(gòu)：

Ghrelin是由28個氨基酸組成的小分子多肽，它有兩種形式：Ghrelin-28和des-Gln14-ghrelin,除了第14位氨基酸Gln的缺失,des-Gln14-ghrelin生物活性與Ghrelin相同。GhrelinN端第3位絲氨酸殘基上的n-辛?；╪-octanoylgroup）對生物活性具有重要作用。人和大鼠的Ghrelin在進化上高度保守，僅11位和12位上相差兩個氨基酸。

BackgroundKnowledge第2頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五StructuresofhumanandratghrelinsBothhumanandratghrelinsare28-aminoacidpeptides,inwhichSer3ismodifiedbyafattyacid,primarilyn-octanoicacid.Thismodificationisessentialforghrelin’sactivity.K：賴氨酸，A丙氨酸;R:精氨酸，V:纈氨酸第3頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五Thestructureofghrelinreceptor,GHSRGHSRisaseventransmembrane-domainG-proteincoupledreceptor.TwotranscriptsareproducedfromthehumanGHSRgenebyalternativesplicing:GHSR1aencodesthefunctionalreceptor,andGHSR1b,whichistruncatedaftertransmembranedomain5,appearstobeunabletostimulateintracellularsignalingpathways.第4頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五SignaltransductionpathwayGHsecretagogues(GHSs)stimulateGHreleasethroughtheGHSreceptor(GHS-Rorghrelinreceptor)toincreaseintracellularCa2([Ca2]i)levels.GHSsareartificialmoleculesanddonotexistinnature,sothereisnostructuralhomologybetweenghrelinandpeptideGHSs.第5頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五SummaryGhrelinisreleasedinresponsetofasting,suchthatcirculatinglevelsarehighestimmediatelypriortomeals.Ghrelinincreasedthebone-resorbingactivityofratosteoclasts,butdidnotalterosteoclastdifferentiationinamurinebonemarrowassaynorboneresorptioninexvivocalvarialcultures.

Ghrelinshowedmitogenicactivityinosteoblasts,withastrongeffectinhumancellsandaweakereffectinratosteoblasts.第6頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五1.IntroductionBoneturnoverisacutelyresponsivetofoodintake,withboneresorptionincreasedduringfastingandsuppressedduringfeeding.Numerousfactors,suchasnutritionalcontentorsizeofmeals,mayplayaroleinthisrelationshipandthereisevidencethatsomeguthormones,suchasglucagon-likepeptide-2[3,4],alsoaffectthenormalpostprandialreductionofboneresorption.第7頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五Anumberofstudiesinvestigatedtheeffectsofghrelininskeletaltissue.AstudyoftheexpressionofGHSR1ainhumantissuesdemonstratedaweakpositivesignalinbonemarrow。

Osteoclastresponsetoghrelinhasneverbeeninvestigatedpreviously.Theaimofthecurrentstudywastofurtherinvestigatetheactivityofghrelininbonecells,andinparticularitspossibleroleintheacutestimulationofboneresorptionthatoccursduringfasting.

第8頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五AcylatedghrelinBSA(牛血清白蛋白)GibcobrandFBS(胎牛血清)andmediawereusedTritiatedthymidine（氚化胸腺嘧啶）

Tartrate-resistantacidphosphatase(TRAP)stainingkit(抗酒石酸酸性磷酸酶染色試劑盒試)1,25-dihydroxyvitaminD3osteoprotegerin(OPG)（骨保護素）salmoncalcitonin（鮭魚降鈣素）Materials第9頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五Osteoclastdifferentiationinmousebonemarrowcultures1,25V-D3(10nM)0,2,5d2,4dGhrelinC(0.1-10nM)7dTRAPstainingMNC48-wellplates

MixedmarrowcellsThemixedpopulationofcellsfromthebonemarrowisculturedinthepresenceof1,25-dihydroxyvitaminD3thatpromotesosteoclastformation第10頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五ResultOsteoclastdifferentiationinmousebonemarrowculturesisnotaffectedbyghrelin.OPG:Recombinanthumanosteoprotegerin(10ng/mL)wasincludedasapositivecontrolforinhibitionofosteoclastogenesis.第11頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五Ghrelinincreasedthebone-resorbingactivityofratosteoclastsinvitroBovineboneslicesMatureosteoclastIncubatefor24hGhrelinC:1nM/10nMfixedandstainedforTRAPTRAP(+)CountScrubbingReflectedlightimageofresorptionpitsformedbyratosteoclastsonbovineboneslices

Stainanddry第12頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五Results

Ghrelinataconcentrationof1nMinduceda30%increaseinthenumberofpitsexcavatedbyosteoclasts,whereasat10nMtherewasonlya15%increasewhichwasnotsignificantlydifferentfromthecontrol.Thepotentinhibitorofosteoclastactivity,salmoncalcitonin(10?10M),wasusedasapositivecontrol.第13頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五Osteoclastactivityinmousecalvarialcultureisnotaffectedbyghrelin.Calvariaelabeledinvivowith45Cawerecollectedandincubatedexvivowithexperimentalsubstancesorvehiclefor48hours.Valuesareexpressedaspercentreleased45Cadetectedovertotal45Cainjected(3μCi).PTH:parathyroidhormone(positivecontrol).第14頁，共17頁，2023年，2月20日，星期五Ghrelinismitogenictoprimaryhumanosteoblasts.3H-thymidineincorporationwasmeasuredasanindicatorofcellproliferation.Humanprimaryosteoblastsincubatedfor24or48hoursinthepresenceof0.1nMghrelinshoweda2-foldincreaseinproliferation,asmeasuredbythymidineincorporation.Howtodeterminethymidineincorporation?