畢業(yè)論文復(fù)方白芍保肝顆粒生產(chǎn)工藝研究

摘要化學(xué)性肝損傷,是由化學(xué)性肝毒性物質(zhì)所造成的肝損傷。大自然和人類工業(yè)生產(chǎn)過程中均存在一些對(duì)肝臟有毒性的物質(zhì)，可引起不同程度的肝細(xì)胞壞死、脂肪變形、肝硬化和肝癌。對(duì)治療化學(xué)性肝損傷的藥物研究很多,但多為單方藥物。本文以白芍為主要原材料，以葛根、甘草、五味子、丹參為輔料，在傳統(tǒng)中醫(yī)藥配方的基礎(chǔ)上嚴(yán)格按照保健食品開發(fā)的相關(guān)要求及法律法規(guī)加以合理調(diào)整，進(jìn)而研發(fā)制作對(duì)抗化學(xué)性肝損傷的保健食品，復(fù)方白芍保肝顆粒。文章主要通過正交實(shí)驗(yàn)，對(duì)提取劑濃度、提取時(shí)間、提取溫度、提取劑用量、提取次數(shù)等因素進(jìn)行比較，并采用紫外分光光度法，以芍藥苷，五味子醇甲，葛根素的回收率為主要參考指標(biāo)篩選最佳提取工藝。實(shí)驗(yàn)得出的最佳醇提工藝：提取劑為75%乙醇，提取三次，提取時(shí)間分別為1h，料液比分別為1:4。實(shí)驗(yàn)得水提最佳工藝為：提取三次，每次料液比1:6，每次時(shí)間分別為1.5h，醇沉工藝以70%乙醇效果最佳。最后經(jīng)最佳提取工藝測(cè)得，五味子醇甲收率為，1.62%；葛根素收率為，3.69%；芍藥苷收率為，2.52%?；厥章示?0%以上。關(guān)鍵詞：保肝；白芍；五味子；正交試驗(yàn)

AbstractChemicalliverinjury,iscomposedofchemicallivertoxicliverinjurycausedby.Natureandhumanindustrialproductionprocesstherearesomeonhepatictoxicsubstances,cancausevaryingdegreesofnecrosisoflivercells,fatdeformation,livercirrhosisandhepatocellularcarcinoma.Onthetreatmentofchemicalliverinjuryofmany,butforthesingledrug.Thewhitepeonyrootasmainrawmaterials,usingtherootofkudzuvine,licorice,Schisandra,Salviamiltiorrhizaasauxiliarymaterial,inthetraditionalChinesemedicineformulaonthebasisofthedevelopmentofhealthfoodinstrictaccordancewiththerelevantrequirementsandlawsandregulationstoadjust,andR&Dproductionagainstchemicalliverinjuryofhealthfoodproducts,compoundwhitepeonyliverparticles.Thisarticlemainlythroughtheorthogonalexperiment,theextractingagentconcentration,extractiontime,extractiontemperature,extractionagent,extractiontimesandotherfactorswerecompared,andtheultravioletspectrophotometry,thepaeoniflorin,schisandrin,HoneSorecoveryrateasthemainreferenceindexforscreeningthebestextractionprocess.Experimentresultsshowthattheoptimalalcoholextractionprocessofextractingagent:75%ethanol,extractingforthreetimes,extractiontimewere1H,solid-liquidratioare1:4.Experimentofwaterextractionprocessforextractingforthreetimes,eachtime:liquidratio1:6,eachtimearerespectively1.5h,alcoholprecipitationprocesswith70%ethanoleffectisbest.Finally,theoptimumextractionprocessofSchizandrolAmeasured,yield,1.62%;puerarinyield,3.69%;paeoniflorinyield,2.52%.Therecoveryrateswereallover70%.Keywords:Protectionoftheliver；Whitepeonyroot；Schisandrin；Processformula

目錄TOC\o"1-3"\h\u摘要 1Abstract 2前言 5第一章文獻(xiàn)綜述 61.1化學(xué)性肝損傷 61.1.1化學(xué)性肝損傷簡(jiǎn)介 61.1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀 61.1.3市場(chǎng)現(xiàn)有產(chǎn)品及使用方法 81.2復(fù)方白芍保肝顆粒 91.2.1原材料簡(jiǎn)介 91.2.2原料功效成分及作用 101.2.3產(chǎn)品歸屬及作用 11 111.3功效成分提取方法及檢測(cè) 121.3.1功效成分提取 121.3.2提取目標(biāo)要求 121.4本文研究?jī)?nèi)容及意義 12第二章實(shí)驗(yàn)部分 142.1實(shí)驗(yàn)原料與設(shè)備 14 142.1.2實(shí)驗(yàn)設(shè)備 152.2試驗(yàn)方法 15 15 17 17 182.3工藝部分 19 192.3.2醇提工藝選擇 19 23 23 28第三章結(jié)果與討論 283.1結(jié)果總結(jié) 283.2工藝說明 313.2.1原輔料質(zhì)量檢驗(yàn) 31 31 31前景展望 32致謝 33參考文獻(xiàn) 34

前言化學(xué)性肝損傷,是由化學(xué)性肝毒性物質(zhì)所造成的肝損傷。這些化學(xué)物質(zhì)包括酒精、環(huán)境中的化學(xué)毒物及某些藥物。大自然和人類工業(yè)生產(chǎn)過程中均存在一些對(duì)肝臟有毒性的物質(zhì)，可引起不同程度的肝細(xì)胞壞死、脂肪變形、肝硬化和肝癌。對(duì)治療化學(xué)性肝損傷的研究很多,但多為單方藥物。近些年對(duì)復(fù)方白芍保肝顆粒配方中所用的白芍、五味子、甘草、葛根、丹參五味藥，在緩解化學(xué)性肝損傷方面的研究報(bào)道較多，經(jīng)查證復(fù)方中藥對(duì)化學(xué)性肝損傷在功效及安全性上優(yōu)于單方中藥。而目前我國保健品市場(chǎng)空前發(fā)展，因此復(fù)方白芍保肝顆粒的開發(fā)，有相當(dāng)大的潛在市場(chǎng)。有養(yǎng)血柔肝、緩中止痛、斂陰收汗的功能[1]。白芍提取物對(duì)D-半乳糖胺所致肝損傷和SGPT升高有明顯的對(duì)抗作用，能使SGPT降低，并使病變和壞死的肝細(xì)胞恢復(fù)正常[2]。白芍的乙醇提取物能使黃曲霉素B1引起的大鼠急性肝損傷所表現(xiàn)出來的乳酸脫氫酶及同功酶的總活性升高得以降低。白芍總苷可抑制四氯化碳所致小鼠血漿GPT和乳酸脫氫酶升高。有人認(rèn)為，四氯化碳所致的肝損傷是因細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)發(fā)生過氧化作用而破壞，使血中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和乳酸脫氫酶升高，白芍總苷可能對(duì)肝細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用，因此可使轉(zhuǎn)氨酶降低?！兜崮媳静荨?“瀉脾熱，止腹疼，止水瀉，收肝氣逆疼，調(diào)養(yǎng)心肝脾經(jīng)血，舒經(jīng)降氣，止肝氣疼。”《醫(yī)學(xué)啟源》:”安脾經(jīng)，治腹痛，收胃氣，止瀉利，和血，固腠理，瀉肝，補(bǔ)脾胃?！睆埳嚼?“仲圣之法，實(shí)即秦、漢以前歷圣相傳之法。說者每謂酸痛是肝木凌脾，芍能助脾土而克肝木，故為腹痛之主藥。要知肝秉剛強(qiáng)之性，非藉陰液以涵濡之，則暴戾恣瞄，一發(fā)而不可制，當(dāng)其沖者，實(shí)惟脾土先蒙其害，凡心胃痛、腹?jié)M痛、胸脅刺痛、支撐脹悶，無一非剛木凌脾之病。宋、元以來，治此者多尚香燥氣藥，以剛濟(jì)剛，氣行而通則不痛。非不暫圖目前之效，然愈燥而陰愈耗，肝愈橫，頻發(fā)加劇，卒至肝脾之陰兩竭，而燥藥且不可復(fù)施，此行氣伐肝，適以變本加厲，非徒無益，而又害之矣。仲圣以芍藥治腹痛，一以益脾陰而攝納至陰耗散之氣，一以養(yǎng)肝陰而柔剛木桀驁之威，與行氣之藥，直折肝家悍氣者，截然兩途，此瀉肝與柔肝之辨。而芍藥所以能治腹痛脹滿、心胃刺痛、胸脅脹痛者，其全體大用，即此是法，必不可與伐肝之劑作一例觀也?！保ā侗静菡x》）考慮到復(fù)方白芍保肝顆粒的開發(fā)屬廠家委托，原料白芍產(chǎn)地優(yōu)勢(shì)，因此配方以白芍為君藥，其它四味藥為臣藥。本文在已有中醫(yī)理論基礎(chǔ)上做了適當(dāng)調(diào)整，根據(jù)保健食品原材料的選擇要求將五味子、葛根、甘草、丹參進(jìn)行合理的搭配，通過正交實(shí)驗(yàn)獲得最佳提取工藝，按照安全、節(jié)能、節(jié)水等要求，以五味子醇甲、芍藥苷、葛根素的收率為主要指標(biāo)篩選水煎醇沉，醇提熱回流，濃縮等的最佳工藝，并配以適當(dāng)?shù)奶鹞秳┌咨疤?、包埋劑麥芽糊精進(jìn)行制粒，制得復(fù)方白芍保肝顆粒。第一章文獻(xiàn)綜述1.1化學(xué)性肝損傷1.1.1化學(xué)性肝損傷簡(jiǎn)介化學(xué)性肝損傷,是由化學(xué)性肝毒性物質(zhì)所造成的肝損傷。這些化學(xué)物質(zhì)包括酒精、環(huán)境中的化學(xué)毒物及某些藥物。作為人體的重要解毒器官的肝臟，具有肝動(dòng)脈和肝靜脈雙重血液供應(yīng)。化學(xué)物質(zhì)可通過胃腸道門靜脈或體循環(huán)進(jìn)入肝臟進(jìn)行轉(zhuǎn)化，因此肝臟容易受到化學(xué)物中的毒性物質(zhì)損害。大自然和人類工業(yè)生產(chǎn)過程中均存在一些對(duì)肝臟有毒性的物質(zhì)，稱為“親肝毒物”，這些毒物在人群中普遍易感，潛伏期短，病變的過程與感染的劑量直接相關(guān)，可引起肝臟不同程度的肝細(xì)胞壞死、脂肪變形、肝硬化和肝癌。根據(jù)毒性的強(qiáng)弱，親肝毒物可分為三類：①劇毒類：包括磷、三硝基甲苯、四氯化碳、氯奈、丙烯醛等。②高毒類：砷、汞、銻、苯胺、氯仿、砷化氫、二甲基甲酰胺等。③低毒類二硝基酚、乙醛、有機(jī)磷、丙烯晴、鉛等。一些親肝毒物與其他非毒性化學(xué)物質(zhì)結(jié)合，可增加毒性，如脂肪醇類（甲醇、乙醇、異丙醇等）能增強(qiáng)鹵代烴類（四氯化碳、氯仿等）的毒性。這些親肝毒物的致病機(jī)理：①脂肪變性。四氯化碳、黃磷等可干擾脂蛋白的合成與轉(zhuǎn)運(yùn)，形成脂肪肝。②脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。這是中毒性肝損傷的特殊表現(xiàn)形式，如四氯化碳在體內(nèi)代謝產(chǎn)生一種氧化能力很強(qiáng)的中間產(chǎn)物，導(dǎo)致生物膜上的脂質(zhì)過氧化，破壞膜的磷脂，改變細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能。③膽汁郁積反應(yīng)。這主要與肝細(xì)胞膜和微絨毛受損，引起膽汁酸排泄障礙有關(guān)。1.1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀關(guān)于化學(xué)性肝損傷國內(nèi)外研究主要是圍繞酒精肝及排毒解毒為主題，其中作為藥物原料的甘草，葛根，五味子的研究比較多。甘草苷是甘草中主要的活性成分，為白色或淡黃色結(jié)晶型粉末，無臭，有特殊甜味，其甜度約為蔗糖的250倍。易溶于熱水和熱的稀乙醇，不溶于無水乙醇和乙醚。分子式為C42H62O16，分子量為822.93，熔點(diǎn)220℃。甘草苷具有抗炎、抗病毒和保肝解毒及增強(qiáng)免疫功能等作用。甘草苷具有腎上腺皮質(zhì)激素樣作用，能抑制毛細(xì)血管通透性，減輕過敏性休克的癥狀?？梢越档透哐獕翰∪说难迥懘?。由于甘草苷有糖皮質(zhì)激素樣藥理作用而無嚴(yán)重不良反應(yīng)，在臨床中被廣泛用于治療各種急慢性肝炎、支氣管炎和艾滋病。還具有抗癌防癌、干擾素誘生劑及細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)劑等功能。無論通過靜脈注射或口服給予甘草苷，甘草酸在體內(nèi)代謝成甘草次酸而發(fā)揮作用，這一轉(zhuǎn)化過程依賴腸道正常菌群水解，緩慢進(jìn)行。靜脈注射的甘草酸首先在肝細(xì)胞內(nèi)由溶酶體中β-D-葡萄甘酸酶代謝成3-單-葡萄甘酸甘草次酸，后者在肝臟中進(jìn)一步代謝，隨膽汁排入腸內(nèi)，由腸內(nèi)細(xì)菌代謝成甘草次酸，再吸收入血。甘草次酸在體外的活性較甘草酸強(qiáng)3～6倍，在體內(nèi)強(qiáng)10～15倍。毒性小，對(duì)重要臟器無明顯損害。少數(shù)患者服藥后可出現(xiàn)浮腫，個(gè)別可出現(xiàn)胸悶、口渴、低血鉀、輕度血壓升高、頭痛等不良反應(yīng)，也有一例用藥后引起精神癥狀的報(bào)道。以上癥狀停藥后均可消失。五味子素為木蘭科植物五味子果實(shí)的提取物，主要有效成分為木脂素類如五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子丙素、五味子酯甲等。五味子素為棕色粉末，溶于氯仿、甲醇、丙酮、環(huán)己烷、正己烷等，不溶于水。五味子甲素(SchisandrinA)的分子式為C24H32O6，分子量416.51。五味子乙素分子式為C23H28O6，分子量為400.46。五味子醇甲的分子式為C24H32O7，分子量為432.51，五味子素主要用于治療肝炎、神經(jīng)衰弱等癥。具有抗氧化、保肝抗肝損傷、降低轉(zhuǎn)氨酶及解毒作用。還具有收斂固澀，益氣生津，補(bǔ)腎寧心的作用。研究顯示，五味子素有保護(hù)肝臟的作用。在中了四氯化碳毒的動(dòng)物中，五味子素在改善肝臟功能方面起了很大的作用。促進(jìn)肝臟細(xì)胞再生：在1992年，Kubo等學(xué)者指出動(dòng)物在被切除部份肝臟后，五味子可以刺激肝臟的細(xì)胞再生。這是由于在早期的肝臟再生過程中，ODC這種酵素會(huì)參與其中，而五味子素正能增加ODC的活躍度，因而可以刺激肝臟的細(xì)胞再生。五味子素能直接刺激在腦部的呼吸控制中心，從而增加呼吸的深度及次數(shù)。五味子素可直接改善神經(jīng)系統(tǒng)。五味子素可以增強(qiáng)人的思考能力；在有神經(jīng)衰弱問題(如疲倦、焦慮等)的動(dòng)物身上，五味子可以使這些神經(jīng)細(xì)胞正?；瑥亩纳粕窠?jīng)衰弱的問題。對(duì)循環(huán)系統(tǒng)，可以增強(qiáng)心臟肌肉收縮及血管舒張。對(duì)消化系統(tǒng)，可以調(diào)節(jié)胃液的分泌。對(duì)女性生殖系統(tǒng)，能夠刺激子宮的收縮。五味子可說是不帶毒性的。在不同的臨床測(cè)試中，五味子素都顯示其極佳的耐藥力。在實(shí)驗(yàn)中，即使老鼠服用大劑量(5g/kg)也不會(huì)致命。而如果連續(xù)10天讓老鼠口服大劑量的五味子酒精抽取液(5g/kg)，也只是實(shí)驗(yàn)鼠身上發(fā)現(xiàn)輕微的中毒反應(yīng)，如：減少活動(dòng)量；但實(shí)驗(yàn)鼠的所有重要器官都沒有受到明顯的影響。葛根素（puerarin）別名普樂林、葛根黃素、黃豆甙元8-C-葡萄糖甙，是葛根的主要有效成份之一和標(biāo)志成分。化學(xué)名為：8-β-D-葡萄吡喃糖-4,7一二羥基異黃酮。分子式C21H20O9，分子量為416.39。低含量時(shí)為棕色粉末，高含量為白色針狀結(jié)晶粉末，熔點(diǎn)187℃～188℃，溶于甲醇，微溶于乙醇、水，不溶氯仿和乙醚。葛根素是葛根中含量最高的主要有效成分，因此成為評(píng)估葛根類保健食品中的重要指標(biāo)。具有增強(qiáng)心肌收縮力，保護(hù)心肌細(xì)胞作用。能擴(kuò)張血管、降低血壓、改善微循環(huán)。保護(hù)紅細(xì)胞的變形能力，增強(qiáng)造血系統(tǒng)功能。具有抗血小板聚集，增加纖溶活性，降低血粘度作用。對(duì)腎炎、腎病腎衰竭均有保護(hù)作用。對(duì)非特異性免疫、體液免疫、細(xì)胞免疫有明顯的調(diào)節(jié)作用?？纱龠M(jìn)正常人和腫瘤病人的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，增強(qiáng)自然素作用。對(duì)于干擾系統(tǒng)有明顯的刺激和誘生作用。其主要化學(xué)成份為皂苷類化合物葛根黃酮。此外，葛根素對(duì)肝組織免疫損害具有保護(hù)作用，對(duì)突發(fā)性耳聾患者的甲皺微循環(huán)有改善作用，對(duì)缺氧心肌具有保護(hù)作用等功效。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，隨著給藥劑量的增加（35mg/kg、75mg/kg、370mg/kg），藥物的消除半衰期明顯降低（分別為11.8h、10.4h、4.7h）。體內(nèi)分布以肝、腎、心臟和血漿中較多，睪丸、肌肉、脾臟次之，并可通過血腦屏障進(jìn)入中樞。葛根素消除較快，在體內(nèi)不易蓄積。小鼠靜脈注射葛根素，LD50為634.3mg/kg，腹腔注射LD50為1412.2mg/kg。大鼠腹腔注射葛根素150mg/kg、100mg/kg，50mg/kg連續(xù)5周，無積蓄性毒性，對(duì)心、肝、肺、脾、腎、腎上腺及腸等臟器無明顯毒性。犬靜脈注射葛根素，每日50mg/kg、30mg/kg、15mg/kg連續(xù)5周，再觀察70天，對(duì)大小便常規(guī)、血常規(guī)、SGPT，BUN、血糖均無明顯影響。健康成年SD大鼠實(shí)驗(yàn)，劑量為50、150mg/kg，對(duì)雌性大鼠胚胎及雄性大鼠生殖細(xì)胞均無致畸作用。致突變?cè)囼?yàn)表明，葛根素沒有潛在的致癌和致突變危險(xiǎn)性。少數(shù)病人在用藥開始時(shí)出現(xiàn)暫時(shí)性腹脹、惡心等反應(yīng)，繼續(xù)用藥可自行消失。極少數(shù)病人用藥后有皮疹、發(fā)熱等過敏現(xiàn)象，立即停藥或?qū)ΠY治療后，可恢復(fù)正常。嚴(yán)重肝、腎損害，心衰及其他嚴(yán)重器質(zhì)性疾病者禁用。有出血傾向者慎用。對(duì)葛根素有過敏或過敏體質(zhì)者禁用。1.1.3市場(chǎng)現(xiàn)有產(chǎn)品及使用方法目前治療化學(xué)性肝損傷的藥品種類很多，而保健食品雖不多但潛在市場(chǎng)很大。因?yàn)樗幤穼?duì)肝的傷害作用是不可避免的，因此副作用一直是消費(fèi)者在購買治療化學(xué)性肝損傷藥品時(shí)所顧忌的一方面。目前主要是以下幾種藥品。肌醇：能促進(jìn)肝中脂肪代謝，可用于脂肪肝的防治，常用片劑0.25g/片，劑量為0.5～1g，一日三次。肝泰樂：可能降低肝淀粉酶的活動(dòng)，阻止糖原分解，使肝糖原量增加，脂肪貯量減少，可用于急、慢性肝炎，肝硬化等。此外，本品可和多種藥物、毒物結(jié)合成無毒的葡萄糖醛酸結(jié)合物隨尿排出。用法：口服0.1～0.2g，一日3次，或肌肉或靜脈注射0.1～0.2g，一日1～2次。輔酶A：為體內(nèi)乙?；磻?yīng)的輔酶，對(duì)糖、脂肪及蛋白質(zhì)的代謝起重要作用，和體內(nèi)乙酰膽堿合成、肝糖原積存、膽固醇量的降低及血漿脂肪含量的調(diào)節(jié)等有關(guān)，但對(duì)其療效尚有爭(zhēng)議。用法：靜滴，一日1～2次，或隔日1次，每次50U，用生理鹽水或5～10％葡萄糖500ml稀釋。肌注，一日1次，每次50U，以生理鹽水溶解后注射，一般以7～14日為一療程。GIK：在10％葡萄糖溶液1000ml中，加入10％氯化鉀10ml，正規(guī)胰島素8～12U，緩慢靜脈滴注，一日1次。肝樂：40mg口服，一日3次；或40～60mg肌注，一日1次。茵陳制劑、水飛薊制劑、田基黃針等中藥。較重病例,可使用糖皮質(zhì)激素，根據(jù)病情，調(diào)整劑量及療程，但要注意其副作用，特別注意預(yù)防上消化道出血。1.2復(fù)方白芍保肝顆粒1.2.1原材料簡(jiǎn)介白芍為毛莨科植物芍藥的干燥根。呈圓柱狀，平直或稍彎曲，兩端平截，長(zhǎng)5～18cm，直徑1～2.5cm。表面類白色或淡棕紅色，光潔或有縱皺紋及細(xì)根痕，偶有殘存的棕褐色外皮。質(zhì)堅(jiān)實(shí)，不易折斷，斷面較平坦，類白色或微帶紅棕色，形成層環(huán)明顯，射線放射狀。氣微，味微苦、酸。五味子不規(guī)則球形或扁球形直徑5～8mm。表面紅色、紫紅色或暗紅色，皺縮，顯油潤(rùn)；有的表面棕黃色，有光澤，種皮薄而脆。果肉氣微，味酸；種子破碎后，有香氣，味辛微苦[1]。丹參根莖短粗，頂端有時(shí)殘留莖基。根數(shù)條，長(zhǎng)圓柱形，略彎曲，有的分枝并具須狀根，長(zhǎng)10～20cm，直徑0.3～1cm，表面棕紅色或暗棕紅色，粗糙，具縱皺紋。老根外皮疏松，多顯紫棕色常成鱗片狀剝落。質(zhì)硬而脆，斷面疏松，有裂隙或略平整而致密，皮部棕紅色，木部灰黃色或灰黃色或紫褐色，導(dǎo)管束黃白色，呈放射狀排列。氣微，味道微苦澀[1]。葛根呈終切的長(zhǎng)方形厚片或小方塊，長(zhǎng)5～35cm，厚0.5～1cm。外皮淡棕色，有縱皺紋，粗糙。切面黃白色，紋理不明顯。質(zhì)韌，纖維性強(qiáng)。氣微甜[1]。甘草呈圓柱形，長(zhǎng)25～100cm，直徑0.6～3.5cm，外皮松緊不一。表面紅棕色或灰棕色，具想著的縱皺紋、溝紋、皮孔及稀疏的細(xì)根痕。質(zhì)堅(jiān)實(shí)，斷面略顯纖維性，黃白色，粉性，形成層環(huán)明顯，射線放射裝，有的有裂隙。根莖呈圓柱形，表面有芽痕，斷面中部有髓。氣微，味甜而特殊[1]。1.2.2原料功效成分及作用白芍有益氣、養(yǎng)血、止痹、通絡(luò)的作用，是風(fēng)濕免疫性疾病、肝炎、肝硬化等疾病治療的重要組方之一。其藥效成分主要為一組糖苷類物質(zhì)，包括芍藥苷、羥基芍藥苷、芍藥花苷、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷等，統(tǒng)稱為白芍總苷（Totalglu-cosidesofpeony,TGP），其中芍藥苷占總苷量的90%以上，分子式為C23H28O11[2]。五味子中五味子素（schizandrin）、去氧五味子（de-oxyschizandrin）、新五味子素（neoschizandrin）、可以保護(hù)人體五臟-心、肝、脾、肺、腎。五味子能促進(jìn)肝臟的解毒過程、保護(hù)肝臟免受毒害，并能再生因?yàn)E用酒精、藥物或肝炎而受損的肝臟組織。五味子亦能有效地降低不斷升高的轉(zhuǎn)胺酶–丙胺酸轉(zhuǎn)胺酶（SGPT/ALT-20天內(nèi)降低75%）和甲型胎兒球蛋白（AFP-最廣泛用于生化血液檢驗(yàn)以檢測(cè)肝癌）水平，比起廣為人知的水飛薊素（取自奶薊），其效用更安全。醋胺酚（一種常用的退熱鎮(zhèn)痛藥）足以降低肝臟的谷胱甘肽（GSH）水平，可能造成肝臟受損，而五味子能加速醋胺酚的代謝率及減低GSH耗損，幫助保護(hù)肝臟。[3]葛根含多種黃酮類成分，主要活性成分為大豆素(daidzein）、大豆甙（daidzin）、葛根素（puerarin）、葛根素-7-木糖甙（puerarin-7-xyloside）等提高肝細(xì)胞的再生能力，恢復(fù)正常肝臟機(jī)能，促進(jìn)膽汁分泌，防止脂肪在肝臟堆積[4]，促進(jìn)新陳代謝，加強(qiáng)肝臟解毒功能，防止酒精對(duì)肝臟的損傷。對(duì)高血脂形成的冠狀動(dòng)脈硬化，通過改善心肌缺血狀態(tài)，防治冠心病、心絞痛、心肌梗塞等心血管疾病。對(duì)高血脂形成的腦動(dòng)脈硬化，通過改善腦缺血狀態(tài)，防治腦梗塞、偏癱、血管性癡呆等腦血管疾病。強(qiáng)化肝膽細(xì)胞自身免疫功能，抵抗病毒入侵。甘草中甘草酸（glycyrrhizicacid），又稱甘草甜素，一種三萜衍生物，分子式C42H62O16，為甘草次酸的二葡萄糖醛苷（見苷），是甘草的甜味成份，存在于甘草屬植物中，在乙酸中結(jié)成片狀或棱柱狀晶體。在220℃分解，溶于水。甘草次酸分子式C30H46O4。有兩種同質(zhì)異晶體。熔點(diǎn)分別為300～304℃和287～293℃，比旋光〔α〕D+163°，溶于乙醇。甘草浸膏及甘草甜素對(duì)某些藥物中毒、食物中毒、體內(nèi)代謝產(chǎn)物中毒都有一定的解毒能力。解毒作用的有效成份為甘草甜素，解毒機(jī)制為甘草甜素對(duì)毒物有吸附作用，甘草甜素水解產(chǎn)物葡萄糖醛酸能與毒物結(jié)合，以及甘草甜素有腎上腺皮質(zhì)激素樣作用，增強(qiáng)肝臟的解毒能力等方面因素綜合作用的結(jié)果。丹參中丹參酮Ⅰ，ⅡA，ⅡB，隱丹參酮，丹參新醌B，二氫丹參酮Ⅰ，亞甲基丹參醌等[8]。丹參具有加強(qiáng)心肌收縮力、改善心臟功能，不增加心肌耗氧量、擴(kuò)張冠脈，增加心肌血流量；擴(kuò)張外周血管，血流增加；腦血流量下降；提高纖溶酶活性；延長(zhǎng)出、凝血時(shí)間；抑制血小板聚集（提高血小板內(nèi)cAMP水平抑制TXA2合成）；改善血液流變學(xué)特性（血粘度降低、紅細(xì)胞電泳時(shí)間縮短）；促進(jìn)組織的修復(fù)與再生，壞死心肌清除快；纖維母細(xì)胞分化、膠原纖維形成較明顯；肉芽形成比較成熟。局部淤血減輕、血液循環(huán)改善，愈合時(shí)間縮短。對(duì)過度增生的纖維母細(xì)胞有抑制作用。改善肝微循環(huán)。丹參制劑中含有隱丹參酮、二氫丹參酮，對(duì)體外的葡萄球菌、大腸桿菌、變性桿菌有抑制作用。丹參能使主動(dòng)脈粥樣斑塊形成面積明顯減少，血清總膽固醇、甘油三酯、均有一定程度的降低。丹參可抑制高脂膳食家兔的血脂上升。通過研究發(fā)現(xiàn)丹參素還能抑制細(xì)胞內(nèi)源性膽固醇的合成。1.2.3產(chǎn)品歸屬及作用復(fù)方白芍保肝顆粒屬于保健食品，其功效聲稱是對(duì)化學(xué)肝損傷有輔助保護(hù)功能。嚴(yán)格按照根據(jù)保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（中華人民共和國衛(wèi)生部2003年版）規(guī)定的功能開發(fā)。首先按照經(jīng)典中醫(yī)著作選取合適藥材，再根據(jù)保肝清肝等處方及臨床治療的經(jīng)驗(yàn)和國內(nèi)外的研究報(bào)道，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行合理適當(dāng)調(diào)整。選取白芍、五味子、甘草、葛根與丹參為原料。同時(shí)由于原料產(chǎn)地及供應(yīng)的特殊性選擇白芍為君藥其余為臣藥。其次按照保健食品選材規(guī)定《衛(wèi)生部關(guān)于進(jìn)一步規(guī)范保健食品原料管理的通知》（衛(wèi)法監(jiān)發(fā)[2002]51號(hào))、《中國食物成分表》、《營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB14880）、《關(guān)于印發(fā)<營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充劑申報(bào)與審評(píng)規(guī)定（試行）>等8個(gè)相關(guān)規(guī)定的通告》、《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB2760）等。其中按照《衛(wèi)生部關(guān)于進(jìn)一步規(guī)范保健食品原料管理的通知》（衛(wèi)法監(jiān)發(fā)[2002]51號(hào))中規(guī)定保健食品原料總個(gè)數(shù)為5沒有超過規(guī)定的14個(gè)；附件1之外的動(dòng)植物物品（或原料），個(gè)數(shù)為3個(gè)沒有超過4個(gè)其中附錄2里有丹參，五味子，白芍三味藥；使用附件1和附件2之外的動(dòng)植物物品（或原料），個(gè)數(shù)不得超過1個(gè)，而配方中沒有涉及，綜上配方的選材是符合保健品開發(fā)要求的。1.3功效成分提取方法及檢測(cè)1.3.1功效成分提取白芍主要以芍藥苷的為目標(biāo)功效成分，經(jīng)查證其芍藥苷為吸濕性無定形棕褐色粉末（90%為類白色粉末），可以選擇醇提，也可選擇水提，兩者效果相近，再參考《中國藥典》有關(guān)標(biāo)志性成分提取方法，故得出醇提效果稍好，因此需要正交實(shí)驗(yàn)選擇最佳提取工藝。五味子中以五味子醇甲為標(biāo)志性成分，經(jīng)查尋相關(guān)文獻(xiàn)，可知其水溶性較好，故可選擇水提工藝。丹參中以丹參酮ⅡA為標(biāo)志性成分，易溶于乙醇，丙酮，乙醚，苯等有機(jī)溶劑，微溶于水故選擇醇提工藝。葛根中的葛根素、甘草中的甘草苷水溶性較好，于是選擇水提工藝。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)選擇每味中藥目標(biāo)成分得率為主，以節(jié)能節(jié)材為輔，選擇混提最佳工藝條件。經(jīng)過查證大量文獻(xiàn)及研究報(bào)道，現(xiàn)擬定白芍與丹參采用醇提法進(jìn)行混提，五味子、葛根、甘草采用水提。由于水提工藝以水為溶劑，加熱煮沸提取，但相應(yīng)地增加其他水溶性成分如蛋白質(zhì)、多糖、鞣質(zhì)等雜質(zhì)，可用傳統(tǒng)的醇沉法除去。醇沉過程中伴隨吸附和包埋，致使功效成分有不同程度的損失。提取水提液中功效成分時(shí)，選擇一個(gè)合適的醇濃度，能夠提高醇沉的效率。1.3.2提取目標(biāo)要求對(duì)各藥材目標(biāo)成分檢測(cè)，參照《中華人民共和國藥典2010版》，每味藥材的所選擇的目標(biāo)成分含量最低值分別為：芍藥苷1.2%；葛根素2.4%；五味子醇甲0.4%，經(jīng)過提取工藝后功效成分的轉(zhuǎn)移率分別不得小于50%。1.4本文研究?jī)?nèi)容及意義肝是人體非常重要的臟器之一，具有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)、糖、脂肪代謝；生成、排泄膽汁，幫助脂肪的消化和吸收；解毒；凝血；調(diào)節(jié)血容量、水、電解質(zhì)等功能。中醫(yī)認(rèn)為，肝是藏血之臟，既能貯藏血液，又能調(diào)節(jié)血量，與人體的活力密不可分；肝同時(shí)影響脾胃運(yùn)化，如果肝有病證，脾胃功能也會(huì)失調(diào)；再者，肝主情志，如果生氣、憤怒就會(huì)引起肝氣郁結(jié)、肝陽上亢等，反過來，肝病患者情緒易激動(dòng)、心情郁悶、脾氣較大。自古我國中醫(yī)就有季節(jié)養(yǎng)生的傳統(tǒng)。中醫(yī)認(rèn)為，春節(jié)萬物生發(fā)，樹木生長(zhǎng)，五行為木，而肝臟中醫(yī)五行同屬木，春季宜養(yǎng)肝。本文旨在研究白芍、五味子、丹參、葛根、甘草五味中藥的最佳提取工藝，本著功效成分最大程度提取，能源資源最大節(jié)約，安全簡(jiǎn)便的原則，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其中包括，原藥材檢驗(yàn)，提取工藝選擇及最佳提取方法，濃縮制浸膏，顆粒劑制作等主要過程，其中提取工藝的選擇則是本實(shí)驗(yàn)的重點(diǎn)。通過合理的實(shí)驗(yàn)探究，使得研究結(jié)果能為大規(guī)模生產(chǎn)提供重要技術(shù)參數(shù)和質(zhì)量指標(biāo)。第二章實(shí)驗(yàn)部分2.1實(shí)驗(yàn)原料與設(shè)備白芍、五味子、甘草、葛根、丹參飲片，購于北京同仁堂大藥房長(zhǎng)春店。麥芽糊精、白砂糖購于歐亞超市。甘草苷標(biāo)準(zhǔn)品，中國藥品生物質(zhì)檢所；五味子醇甲標(biāo)準(zhǔn)品，中國藥品生物質(zhì)檢所；葛根素標(biāo)準(zhǔn)品，中國藥品生物質(zhì)檢所；丹酚酸B標(biāo)準(zhǔn)品，飛宇生物科技有限公司；苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品，飛宇生物科技有限公司；丹參酮A標(biāo)準(zhǔn)品，飛宇生物科技有限公司；乙醚，北京化工廠；三氯甲烷，北京化工廠；石油醚，北京化學(xué)試劑公司；甲醇，北京化工廠；乙醇，北京化工廠；香草醛，沈陽市試劑五廠；濃硫酸，北京化學(xué)試劑公司；甲苯，北京化工廠；乙酸乙酯，北京化工廠；純化水，工業(yè)大學(xué)生物樓實(shí)驗(yàn)室；正丁醇，北京化工廠；95%乙醇，天津富宇精細(xì)化工有限公司；香草醛，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所；甲酸，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所；2.1.2實(shí)驗(yàn)設(shè)備DK-8D型電熱恒溫水槽，上海醫(yī)用恒溫設(shè)備廠；分析天平：感量0.0001g，北京賽多利斯天平有限公司；LYYF-GYM-86實(shí)驗(yàn)型粉碎機(jī)，浙江豐利粉碎設(shè)備有限公司；101-A點(diǎn)熱鼓風(fēng)干燥箱，上海醫(yī)用恒溫設(shè)備廠；DL－I型萬用電爐，北京中興偉業(yè)儀器公司；低溫電冰箱，中國海爾集團(tuán)有限公司；紫外分光光度儀（UV1102），上海天美科學(xué)儀器公司；RE-52C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；DF-101S磁力攪拌器，金壇市科析儀器有限公司；電飯鍋，九陽股份有限公司；索氏提取器，中西遠(yuǎn)大有限公司；2.2試驗(yàn)方法提取工藝流程圖綜合以上試驗(yàn)所得最佳工藝，將醇提工藝與水提工藝綜合：白芍300g、丹參150g，乙醇濃度為75%，提取三次，料液比分別為1:4；提取時(shí)間每次為1h。合并三次濾液減壓回收乙醇，回收條件為60℃，-0.06Mpa，得到濃縮液。繼續(xù)加熱濃縮溫度控制在80℃左右，以防功效成分分解影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。當(dāng)濃縮至相對(duì)密度1.25～1.30(60℃)時(shí)停止?jié)饪s。葛根250g、五味子150g、甘草250g，料液比1:6；提取時(shí)間為每次1.5h進(jìn)行提取，將三次提取液過濾后合并，然后進(jìn)行加熱濃縮，使?jié)饪s液密度達(dá)到相對(duì)密度1.25～1.30(60℃)，停止?jié)饪s，放冷，稱重并測(cè)量體積，加入95%乙醇，乙醇量要使加入的乙醇濃度達(dá)到70%。封口并放入冷藏室24h。將得到的浸膏與醇提工藝所得浸膏混合，60℃烘干，研磨成粉末。以下為提取工藝的生產(chǎn)工藝流程圖。葛根250g、五味子1葛根250g、五味子150g、甘草250g白芍300g丹參150g乙醇濃度為75%，提取三次，料液比分別為乙醇濃度為75%，提取三次，料液比分別為1:4；提取時(shí)間每次為1h提取3次；料液比1:6；提取時(shí)間每次1.5h濾液濾液濾液 濾液減壓濃縮（60℃減壓濃縮（60℃，-0.08Mpa）至相對(duì)密度1.25～1.30(60℃)減壓減壓回收乙醇（60℃，-0.06Mpa）浸膏浸膏濃縮液濃縮液減壓濃縮（減壓濃縮（60℃，-0.08Mpa）至相對(duì)密度1.25～1.30(60℃)70%乙醇進(jìn)行醇沉，放置冰箱70%乙醇進(jìn)行醇沉，放置冰箱24h冷藏醇沉后浸膏醇沉后浸膏浸膏浸膏加熱濃縮使浸膏濃度在加熱濃縮使浸膏濃度在1.1-1.5范圍之內(nèi)60℃烘干，研碎混合圖2-1提取工藝流程圖制劑工藝流程圖見圖2-2。白砂糖、麥芽糊精白芍、丹參、甘草、五味子、葛根提取浸膏白砂糖、麥芽糊精白芍、丹參、甘草、五味子、葛根提取浸膏粉碎過篩（80目）粉碎過篩（80目）先混合15分鐘，再用90%乙醇配制調(diào)和先混合15分鐘，再用90%乙醇配制調(diào)和軟材軟材搖擺顆粒機(jī)20目制粒搖擺顆粒機(jī)20目制粒濕濕顆粒干燥（50—60干燥（50—60℃）,整粒（10目、40目）顆粒顆粒分裝（裝量5g/袋）分裝（裝量5g/袋）復(fù)合膜 復(fù)合膜外包裝外包裝成品成品圖2-2制劑工藝本文所用的試驗(yàn)方法中，最為重要的是提取工藝，由于提取工藝涉及醇提和水提，而且每一種提取方法都有很多因素在左右實(shí)驗(yàn)結(jié)果，因此本實(shí)驗(yàn)選擇以正交實(shí)驗(yàn)為手段，選擇最佳的工藝條件。芍藥苷：取5g烘干后的浸膏粉末放入圓底燒瓶中，85%乙醇100ml，加熱回流2h，過濾，濾液濃縮，水溶解，用石油醚除去脂類，85%乙醇定容至10ml容量瓶。取苯甲酸標(biāo)品適量，用85%乙醇制備100ug/ml的苯甲酸溶液。分別吸取上述溶液用85%乙醇配成5.00、4.00、3.00、2.00、1.00、0.5ug/ml的溶液，以85%乙醇為空白對(duì)照，進(jìn)行紫外檢測(cè)。葛根素：取5g干膏粉末放入圓底燒瓶，用30%乙醇加熱回流提取1.5h，過濾，蒸干，用30%乙醇定容至10ml容量瓶。取葛根素標(biāo)品適量，用30%乙醇制備100ug/ml的葛根素溶液。分別吸取上述溶液用30%乙醇配成10.00、8.00、6.00、4.00、2.00、1ug/ml的溶液，以30%乙醇為空白對(duì)照，進(jìn)行紫外檢測(cè)。五味子醇甲定量檢測(cè)五味子醇甲：取干膏粉末2g，采用索氏提取法，提取劑甲醇-氯仿混合液（3:1），溶劑量60ml，提取三次，每次1.5h，過濾，合并濾液，濃縮至干，殘留物用甲醇溶凈定容至25ml容量瓶。取五味子醇甲標(biāo)品適量，用甲醇制備0.5mg/ml的五味子醇甲溶液。分別吸取上述溶液用甲醇配成5.00、4.00、3.00、2.00、1.00、0.5ug/ml的溶液，以甲醇醇為空白對(duì)照，進(jìn)行紫外檢測(cè)。丹參定性檢測(cè)丹參酮ⅡA進(jìn)行定性實(shí)驗(yàn)，取干膏1g加乙醚5ml，振搖，放置1h，濾過，慮液揮干，殘?jiān)宜嵋阴ト芙?，取?biāo)準(zhǔn)液，點(diǎn)硅膠G板，薄層分析。丹酚酸B75%回流提取1.5h，得出樣品，在GF254板上進(jìn)行薄層分析[13]。甘草苷定性檢測(cè)取干膏3g，加40ml乙醚，加熱回流提取1h，濾過，醚液倒出，加30ml甲醇690C回流1h，濾過蒸干，殘?jiān)铀?0ml，放入分液漏斗，用正丁醇蒸干，渣用甲醇溶解待用，硅膠G板薄層分析。首先在進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)之前對(duì)原藥材進(jìn)行了檢測(cè)。采用紫外分光光度法測(cè)得芍藥苷含量為2.52%，五味子醇甲含量為1.57%，葛根素含量為4.49%。丹參酮ⅡA、丹酚酸B、甘草苷在硅膠板上與標(biāo)準(zhǔn)品在同一位置顯同形狀、相同顏色斑點(diǎn)，由此得出所購藥品合格。然后再按照試驗(yàn)方案進(jìn)行正交試驗(yàn)，依據(jù)上述對(duì)實(shí)驗(yàn)所得浸膏中標(biāo)志性成分的檢測(cè)方法檢測(cè)，進(jìn)而得出各指標(biāo)成分的收率。通過選定的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)來選擇最佳工藝條件。2.3工藝部分白芍300g、五味子150g、甘草250g、丹參150g、葛根250g，麥芽糊精和白砂糖適量，按配方制粒得到500g成品。2.3.2醇提工藝選擇丹參與白芍進(jìn)行混合醇提，以芍藥苷回收率為主要指標(biāo)同時(shí)考慮浸膏得率，以乙醇為提取劑時(shí),提取效率主要受到料液比、醇濃度、提取時(shí)間，提取次數(shù)[14]四個(gè)因素影響，針對(duì)這幾個(gè)因素，安排正交實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)水平與因素如表2-1：表2-1醇提工藝因素水平表因素水平A醇濃度（%）B料液比C提取時(shí)間（h）D提取次數(shù)1501:60.512651:5123751:41.53對(duì)白芍中目標(biāo)成分芍藥苷進(jìn)行定量檢測(cè)，丹參功效成分丹酚酸B、丹參酮ⅡA進(jìn)行定性檢測(cè)[17]，檢測(cè)方法如表2-2所示。表2-2標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)目方法芍藥苷取苯甲酸標(biāo)品適量，用85%乙醇制備100ug/ml的苯甲酸溶液。分別吸取上述溶液用85%乙醇配成5.00、4.00、3.00、2.00、1.00、0.5ug/ml的溶液，以85%乙醇為空白對(duì)照，進(jìn)行紫外檢測(cè)。圖2-3芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)曲線表2-3浸膏目標(biāo)成分處理方法項(xiàng)目方法芍藥苷取5g烘干后的浸膏粉末放入圓底燒瓶中，85%乙醇100ml，加熱回流2h，過濾，濾液濃縮，水溶解，用石油醚除去脂類，85%乙醇定容至10ml容量瓶。丹參酮ⅡA取0.2g干膏粉末，加入15ml乙醚，加熱回流1h，濾過，揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml溶解，放入容量瓶待用。丹酚酸B取0.2g干膏粉末放入圓底燒瓶中，加入25ml75%甲醇，加熱回流1h，放冷，濾過，濾液濃縮至1ml，放入容量瓶。由標(biāo)準(zhǔn)曲線可得回歸方程：y=0.0598x+0.0015（R2=0.9998）………（公式2.1）y：標(biāo)準(zhǔn)曲線中縱軸代表濃度，ug/ml；x：標(biāo)準(zhǔn)曲線橫軸代表吸光度；所取浸膏樣品中芍藥苷量計(jì)算：芍藥苷量=V0×C…（公式2.2）V0：芍藥苷樣液總體積，ml；C：芍藥苷樣液濃度，ug/ml；芍藥苷收率計(jì)算：芍藥苷收率=Vo×C×（M2÷M1）÷W×100%……（公式2.3）C：測(cè)定的A值在回歸方程中求出的目標(biāo)成分濃度，g/ml；Vo：樣品提取液總體積，ml；M1：取樣品干膏量，g；M2：總干膏重,g；W：原藥材重量，g；試驗(yàn)指標(biāo)為芍藥苷收率與提取物收率兩者的綜合評(píng)分，計(jì)算公式如下：提取物收率=M÷W×100%………………（公式2.4）綜合評(píng)分=芍藥苷收率×0.7+提取物收率×0.3……………（公式2.5）M：提取所得浸膏總重，g；W：原藥材重量，g。稱取白芍粉末300g、丹參粉末150g（過40目篩），平分9份進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并放在提取容器內(nèi)浸泡1h[15]，然后進(jìn)行回流提取，保持容器內(nèi)提取劑呈微沸狀態(tài)。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果以綜合評(píng)分（綜合評(píng)分=芍藥苷收率×0.7+提取物收率×0.3）為指標(biāo)，結(jié)果如下表2-4：表2-4醇提工藝實(shí)驗(yàn)結(jié)果序號(hào)因素芍藥苷收率（%）提取物收率（%）綜合評(píng)分(%)ABCD1504:10.5011.2322.307.5512505:11.0021.3123.457.9523506:11.5031.4225.558.6594654:11.0031.4326.508.9515655:11.5011.2623.327.8786656:10.5021.3124.508.2677754:11.5022.3926.009.4738755:10.5032.3325.989.4259756:11.0012.3526.219.508K124.1625.9825.2424.94TK225.1025.2626.4125.6977.664K328.4126.4326.0127.04CTK12583.80674.70637.21621.85670.1885K22629.81637.82697.54660.08K32806.90698.76676.52730.89Qj2,020.512,011.272,011.272,012.82SSj3.3155550.2354580.2348130.752809表2-5方差分析表方差來源偏差平方和自由度方差F值顯著性A3.21.65777714.21F<0.01B0.23545820.1177291C0.20.1174061D0.20.3764043.21F0.10(2,2)=9，F(xiàn)0.05(2,2)=19，F(xiàn)0.01(2,2)=99；Ki：為對(duì)應(yīng)因素i水平三組實(shí)驗(yàn)結(jié)果之和；T:為9組實(shí)驗(yàn)結(jié)果之和；GT=T2÷9；Qj=（K1j2+K2j2+K3j2）÷3；列偏差平方和：SSj=Qj-CT；因素自由度：dfj=m-1，m為水平數(shù)；方差Vj=SSj÷dfj； 根據(jù)方差分析結(jié)果：B、C、D因素各水平之間沒有顯著差異，A因素各水平之間存在顯著差異，且四個(gè)因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響主次順序A>D>B>C。由于A3>A2>A1，B3>B1>B2，C2>C3>C1，D3>D2>D1，且B、C對(duì)結(jié)果影響不大，考慮經(jīng)濟(jì)、能源資源條件，因此最佳工藝應(yīng)為A3B1C2D3，即：醇濃度75%，料液比1:4,提取3次，每次1h。實(shí)際生產(chǎn)中,原料研碎后冷浸1h效果更好。按處方量稱取各藥材，共3份，按照所選最佳提取條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，并測(cè)定芍藥苷的量和出膏率及計(jì)算綜合評(píng)分[16]。結(jié)果見表2-6。3次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明，檢測(cè)指標(biāo)接近正交表中最優(yōu)值，說明優(yōu)選的提取條件基本可行。表2-6驗(yàn)證試驗(yàn)編號(hào)芍藥苷收率（%）提取率（%）綜合評(píng)分12.5225.349.36622.6425.609.52832.5825.519.459平均值2.5224.519.451浸膏制備將三次醇提工藝所得濾液（應(yīng)在溫度降到室溫再過濾，盡量避免過多雜質(zhì)透過濾布）合并，倒入燒杯內(nèi)在水浴鍋內(nèi)進(jìn)行加熱濃縮，并不斷攪拌，防止局部受熱不均帶來不可挽回的后果，將濃縮的濾液在適當(dāng)時(shí)機(jī)轉(zhuǎn)入小的燒杯內(nèi)繼續(xù)濃縮，并用婆梅氏比重計(jì)檢測(cè)得膏密度，當(dāng)密度在1.11-1.25之間時(shí)[17]，停止?jié)饪s，將容器內(nèi)壁刮干凈，待用。水提工藝是對(duì)五味子、甘草、葛根進(jìn)行功效成分提取，稱取五味子150g，甘草250g，葛根250g，共九份進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。其中標(biāo)志性成分以五味子醇甲和葛根素為主，進(jìn)行含量測(cè)定,以水為提取溶媒時(shí),煎煮效率主要受到加水量、煎煮次數(shù)、煎煮時(shí)間三個(gè)因素的影響。針對(duì)這三個(gè)因素,實(shí)驗(yàn)中給每個(gè)因素設(shè)計(jì)三個(gè)水平。利用L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)[29]。其因素水平安排見表2-7:表2-7水提工藝因素水平表水平因素A料液比B提取次數(shù)C提取時(shí)間（h）D（空白列）11:411h121:521.5h231:632h3五味子中五味子醇甲與葛根中葛根素進(jìn)行定量檢測(cè)，甘草中甘草苷進(jìn)行定性檢測(cè)。檢測(cè)方法如下表2-8：表2-8標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制目標(biāo)方法葛根素取葛根素標(biāo)品適量，用30%乙醇制備100ug/ml的葛根素溶液。分別吸取上述溶液用30%乙醇配成10.00、8.00、6.00、4.00、2.00、1ug/ml的溶液，以30%乙醇為空白對(duì)照，進(jìn)行紫外檢測(cè)。五味子醇甲取五味子醇甲標(biāo)品適量，用甲醇制備0.5mg/ml的五味子醇甲溶液。分別吸取上述溶液用甲醇配成5.00、4.00、3.00、2.00、1.00、0.5ug/ml的溶液，以甲醇醇為空白對(duì)照，進(jìn)行紫外檢測(cè)。表2-9浸膏樣品處理項(xiàng)目方法葛根素取5g干膏粉末放入圓底燒瓶，用30%乙醇加熱回流提取1.5h，過濾，蒸干，用30%乙醇定容至10ml容量瓶。甘草苷取0.2g干膏粉末放入圓底燒瓶，加入40ml乙醚，加熱回流1h，濾過，乙醚定容至10ml。五味子醇甲取干膏粉末2g，采用索氏提取法，提取劑甲醇-氯仿混合液（3:1），溶劑量60ml，提取三次，每次1.5h，過濾，合并濾液，濃縮至干，殘留物用甲醇溶凈定容至25ml容量瓶。圖2-4五味子標(biāo)準(zhǔn)曲線圖2-5葛根素標(biāo)準(zhǔn)曲線由標(biāo)準(zhǔn)曲線可得五味子回歸方程：y=35.339x+0.0069（R2=0.9994）…（公式2.6）由標(biāo)準(zhǔn)曲線可得葛根素回歸方程y=63.996x+0.1155（R2=0.9994）……（公式2.7）y：標(biāo)準(zhǔn)曲線中縱軸代表濃度，ug/ml；x：標(biāo)準(zhǔn)曲線橫軸代表吸光度；所取浸膏樣品中芍標(biāo)志性成分含量計(jì)算：標(biāo)志性成分含量=V0×C………（公式2.8）V0：標(biāo)志性成分樣液總體積，ml；C：標(biāo)志性成分樣液濃度，ug/ml；標(biāo)志性成分收率計(jì)算：標(biāo)志性成分收率=Vo×C×（M2÷M1）÷W×100%…（公式2.9）C：測(cè)定的A值在回歸方程中求出的目標(biāo)成分濃度，g/ml；Vo：樣品提取液總體積，ml；M1：取樣品干膏量，g；M2：總干膏重,g；W：原藥材重量，g；稱取9份葛根（250g）、五味子（150g）、甘草（250g）進(jìn)行研磨粉碎，并過40目篩，然后倒入水煎容器內(nèi)，按照正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)按比例加入蒸餾水，浸泡30min。進(jìn)行水提工藝優(yōu)選實(shí)驗(yàn)，并不斷攪拌，將初始的水液面標(biāo)記，在加熱提取的過程中不斷補(bǔ)加純化水，使液面保持在初始位置。將所得的濾液濃縮制得浸膏后。用以上檢測(cè)方法對(duì)所得浸膏中功效成分進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：表2-10水提正交實(shí)驗(yàn)序號(hào)因素葛根素收率（%）五味子醇甲收率（%）A料液比B提取次數(shù)C提取時(shí)間D（空白）11:41113.471.4421:421.523.831.831:43233.91.8741:511.533.421.4651:52213.731.6861:53123.911.8571:61223.71.5581:62133.851.6691:631.514.112.01表2-11葛根素收率分析ABCDK111.2010.5911.2311.31GK211.0611.4111.3611.4433.92K311.6611.9211.3311.17TK12125.44112.15126.11127.92127.8407K22122.32130.19129.05130.87K32135.96142.09128.37124.77Qj383.72384.42383.53383.56SSj0.0656890.3001560.0030890.012156表2-12葛根素收率方差分析方差來源偏差平方和自由度方差F值顯著性A0.06568920.03284421.27F<0.05B0.30015620.15007897.17F<0.05C0.00308920.0015441D0.01215620.0060783.94根據(jù)葛根素收率方差分析結(jié)果，B因素個(gè)水平之間差異高度顯著，A因素個(gè)水平之間顯著差異，各因素對(duì)結(jié)果影響先后順序?yàn)锽>A>C,且A3>A1>A2,B3>B2>B1,C2>C3>C1，因?yàn)镃因素各水平間影響不顯著故最佳工藝可定為A3B3C2。表2-13五味子醇甲收率分析ABCDK15.114.454.955.13GK24.995.145.275.2015.32K35.225.735.104.99TK1226.1119.8024.5026.3226.07804K2224.9026.4227.7727.04K3227.2532.8326.0124.90Qj78.2679.0678.2978.26SSj0.0088220.2736220.0170890.007622表2-13五味子醇甲收率方差分析方差來源偏差平方和自由度方差F值顯著性A0.00882220.0044110.52B0.27362220.13681116.01F<0.10C0.01708920.0085441D0.00762220.0038110.45根據(jù)五味子醇甲方差分析結(jié)果，B因素各水平之間存在顯著差異，A、C各水平之間沒有顯著差異，且各因素對(duì)結(jié)果影響先后順序?yàn)锽>C>A，又由于A3>A1>A2，B3>B2>B1，C2>C3>C1，因?qū)嶋H生產(chǎn)中從節(jié)約能源資源考慮，因A、C個(gè)水平影響不顯著，故最佳工藝應(yīng)為暫定為A1B3C2。綜合五味子醇甲收率與葛根素收率方差結(jié)果，最后選擇最佳工藝為A3B3C2。按處方量稱取各藥材，共3份，按照所選提取條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并測(cè)定葛根素、五味子醇甲的收率，計(jì)算綜合評(píng)分，結(jié)果見下表。3次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，檢測(cè)指標(biāo)接近或者高于正交表中最優(yōu)值，說明優(yōu)選的提取條件可行。

編號(hào)葛根素收率（%）五味子醇甲收率（%）14.001.8323.971.7933.941.85平均值3.971.82通過上述分析最后總結(jié)出最佳提取工藝條件見表2-14。表2-14水提及醇提工藝結(jié)果工藝次數(shù)時(shí)間料液比醇濃度醇提工藝31h1:475%水提工藝31.5h1:6將三次水提工藝所得濾液（應(yīng)在溫度降到室溫再過濾，盡量避免過多雜質(zhì)透過濾布）合并，加熱濃縮，并不斷攪拌，并用婆梅氏比重計(jì)檢測(cè)得膏密度，當(dāng)密度在1.11-1.25之間時(shí)，停止?jié)饪s，待用。由于水提工藝所得過濾液中摻雜著過多淀粉、蛋白質(zhì)、樹脂、鞣質(zhì)等其他成分[5]而這些成分非實(shí)驗(yàn)所需，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定的影響，于是選擇醇沉工藝對(duì)水提液進(jìn)行純化，選擇純化工藝。影響醇沉的主要因素有相對(duì)密度和醇濃度。一般選擇相對(duì)密度為1.10～1.20g/cm3(70～750C),醇沉?xí)r間一般為12～36h,通常24h即可較好沉淀分層,故選擇醇沉?xí)r間為24h。選擇醇沉濃度為50%、60%、70%,以提取率和五味子醇甲，葛根素的含量為指標(biāo),進(jìn)行考核篩選。結(jié)果見下表：表2-15醇沉實(shí)驗(yàn)醇沉濃度(%)浸膏得率(%)五味子醇甲含量(%)葛根素(%)綜合評(píng)分5020.481.493.219.546018.911.623.699.397019.771.823.929.95綜合評(píng)分=浸膏得率（%）×0.3+[五味子醇甲含量(%)+葛根素(%)]×0.7通過上述實(shí)驗(yàn)得出最佳醇沉濃度為70%，用此濃度的乙醇對(duì)浸膏進(jìn)行醇沉，目標(biāo)成分損失較少，且能得到理想的膏重。第三章結(jié)果與討論3.1結(jié)果總結(jié)通過以上醇提實(shí)驗(yàn)，水提醇沉實(shí)驗(yàn)得出最佳工藝條件如表：表3-1實(shí)驗(yàn)結(jié)果總結(jié)工藝 次數(shù)時(shí)間料液比醇濃度醇提工藝31h1:475%水提工藝31.5h1:6醇沉：70%通過測(cè)定最佳工藝所得浸膏中的目標(biāo)成分，五味子醇甲收率：1.62%；葛根素收率：3.69%；芍藥苷收率：2.52%。甘草苷、丹參酮ⅡA、丹酚酸B的薄層結(jié)果見圖3-1至圖3-3。定量檢測(cè)結(jié)果目標(biāo)成分回收率均在70%以上。制粒工藝通過篩選，選擇附形劑乙醇濃度85%，使麥芽糊精與白砂糖適量與浸膏烘干物混合均勻，制粒。圖圖3-1丹酚酸B圖3-2丹參酮IIA圖3-3甘草苷3.2工藝