細(xì)胞培養(yǎng)常用試劑

細(xì)胞培養(yǎng)常用試劑第一頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日Hank’s液D-Hank`s液PBSEDTA胰蛋白酶青霉素、鏈霉素第二頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日Hank`s液與D-Hank`s液

Hank`s液是常見的平衡鹽溶液(BSS)之一。D-Hank`s液則是無(wú)鈣鎂離子的Hank`s液（也有資料認(rèn)為除了不含鈣鎂離子之外也不含葡萄糖）。BSS與細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)下的pH值、滲透壓及無(wú)菌狀態(tài)一致，且配方簡(jiǎn)單，是組織培養(yǎng)基本用液，常用于配制培養(yǎng)基及其他用液，或洗細(xì)胞等，細(xì)胞在這種BSS中可生存幾個(gè)小時(shí)。第三頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日Hank`s液配方Hank`s液（原液）

原液甲：NaCl

160g

KCl

8g

MgSO4·7H2O

2g

MgCl2·6H2O

2g

上述試劑加入800ml雙蒸水。溶解。

CaCl2

2.8g溶于100ml雙蒸水

上述二液混合，加雙蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。

原液乙：

Na2HPO4·12H2O

3.04g

KH2PO4

1.2g

葡萄糖

20g

加入800ml雙蒸水，溶解。

0.4%酚紅溶液

100ml

上述二液混合，加雙蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。

使用時(shí)甲，乙原液按下列比例配成Hanks液

使用液：原液甲1份、原液乙1份、雙蒸水18份濾過(guò)，20min滅菌，放4℃冰箱保存，使用前用NaHCO3調(diào)整pH值。第四頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日D-Hank`s液配方D-Hanks液

NaCl

4.5g

KCl

0.2g

NaHCO3

0.175g

Na2HPO4·12H2O

0.076g

KH2PO4

0.03g

葡萄糖

0.5g

0.4%酚紅

2.5ml

將上述成分依次溶解或加入到雙蒸水中，最后加雙蒸水定容至500ml，以5.6%NaHCO3調(diào)整pH值至7.4，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩５谖屙?yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日酚紅在低pH值時(shí)呈現(xiàn)黃色,在pH6.6至8.0間會(huì)呈現(xiàn)橙色，在高pH值時(shí)呈現(xiàn)紅色。酚紅只是起指示酸堿度的作用，有酚紅較方便但沒(méi)有也無(wú)妨。有人主張最好不用酚紅，可能對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不利，有時(shí)也會(huì)影響一些檢測(cè)結(jié)果。此外酚紅有雌激素樣作用，所以如果做相關(guān)的實(shí)驗(yàn)最好不加。第六頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日對(duì)于Hank`s與D-hank`s液的配制，不同的文獻(xiàn)有不同的配方我們可以看到，兩者最主要的區(qū)別就是D-hank`s液中沒(méi)有鈣鎂離子。第七頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日Hank`s液與D-Hank`s液

用途上的比較Hank`s液是組織培養(yǎng)基本用液，常用于配制培養(yǎng)基及其他用液，或洗滌組織、細(xì)胞等。細(xì)胞在Hank`s液中可以在一段時(shí)間內(nèi)維持一定的活力。另外Hank`s液還可以用于終止EDTA的作用。配制胰酶液或者是胰酶/EDTA的基礎(chǔ)液都是D-hanks液，而不能使用Hank`s液。這是由于鈣離子和鎂離子會(huì)影響胰蛋白酶的活性，也會(huì)阻礙EDTA的作用。第八頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日PBS磷酸鹽緩沖液

磷酸鹽是生物化學(xué)研究中使用最廣泛的一種緩沖劑，由於它們是二級(jí)解離，有二個(gè)pKa值，所以用它們配制的緩沖液，pH范圍最寬：

NaH2PO4：

pKa1＝2.12，

pKa2＝7.21

Na2HPO4：

pKa1＝7.21，

pKa2＝12.32

配酸性緩沖液：用

NaH2PO4，pH＝1～4，

配中性緩沖液：用混合的兩種磷酸鹽，pH＝6～8，

配堿性緩沖液：用

Na2HPO4，pH＝10～12。

因?yàn)榈蜏貢r(shí)鈉鹽難溶，鉀鹽易溶，一般情況下用鉀鹽比鈉鹽好（使用SDS時(shí)除外）。第九頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日PBS與Hank`s液的用途區(qū)別PBS：磷酸緩沖鹽溶液——具有pH緩沖作用的等滲鹽溶液。多用于非活體。

Hank`s：平衡鹽溶液——無(wú)機(jī)鹽和葡萄糖濃度接近大部分動(dòng)物（植物）細(xì)胞的水平，可作為動(dòng)（植）物細(xì)胞短期培養(yǎng)（保存）。多用于活體。Hank`s液中鹽成分較PBS復(fù)雜，且有葡萄糖，可為細(xì)胞提供簡(jiǎn)單的營(yíng)養(yǎng)，而PSB中只有磷酸根，鈉，鉀，氯離子，只是最簡(jiǎn)單的鹽平衡緩沖液，不能為細(xì)胞提供暫時(shí)的營(yíng)養(yǎng)。第十頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日其他緩沖系統(tǒng)碳酸鹽緩沖系統(tǒng)一般細(xì)胞培養(yǎng)液的pH在之間。由于碳酸鹽pH緩沖系統(tǒng)是一種生理pH緩沖系統(tǒng)，大多數(shù)培養(yǎng)液用它來(lái)保持穩(wěn)定的pH。為了維持穩(wěn)定的pH，培養(yǎng)箱中的二氧化碳需要維持在2-10%之間，以保持培養(yǎng)液中溶解的二氧化碳的濃度。第十一頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日HEPES緩沖系統(tǒng)HEPES，即4-羥乙基哌嗪乙磺酸HEPES在之間有很強(qiáng)的緩沖能力，當(dāng)透氣的培養(yǎng)器皿被拿到二氧化碳培養(yǎng)箱外面的時(shí)候，由于空氣中二氧化碳濃度很低，培養(yǎng)液中碳酸鹽緩沖系統(tǒng)就會(huì)失去效果，這時(shí)候HEPES緩沖系統(tǒng)就能繼續(xù)保持pH的穩(wěn)定。第十二頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日EDTA與胰蛋白酶EDTA，常用的陽(yáng)離子螯合劑。組織細(xì)胞間存在鈣黏蛋白（一類Ca2+依賴的細(xì)胞黏著糖蛋白）。而EDTA可以通過(guò)螯合金屬離子，破壞Ca2+或Mg2+依賴性的細(xì)胞黏著。胰蛋白酶水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì)，方便形成細(xì)胞懸液。第十三頁(yè)，共十五頁(yè)，2022年，8月28日消化細(xì)胞時(shí)