自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座

本身抗體檢測及意義自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第1頁本身免疫(autoimmunity)

免疫系統(tǒng)針對本身成份發(fā)生免疫應(yīng)答反應(yīng)出現(xiàn)本身抗體或致敏淋巴細(xì)胞現(xiàn)象本身抗體(autoantibody)針對本身組織、器官、細(xì)胞及其成份抗體。本身免疫性疾病(autoimmunedisease，AID)本身免疫反應(yīng)造成組織器官損傷或功效障礙所致疾病。免疫系統(tǒng)紊亂

幾個(gè)概念自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第2頁

本身抗體本身免疫性疾病主要標(biāo)志高滴度存在于本身免疫性疾病患者與疾病活動(dòng)性相關(guān)性參加免疫病理性改變損傷自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第3頁慣用檢測方法間接免疫熒光法（IIF）ELISA免疫印跡法（Western-blot）酶免疫斑點(diǎn)法自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第4頁常檢測本身抗體類風(fēng)濕因子（RF）抗核抗體（ANA）抗可提取性核抗原抗體（ENA）抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）抗環(huán)瓜氨酸抗體（CCP）抗心磷脂抗體（ACA）自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第5頁類風(fēng)濕因子

（RHEUMATOIDFACTOR,RF）

抗變性IgGFc本身抗體，主要類型是IgM型

檢測方法：

1.膠乳顆粒凝集試驗(yàn)定性、半定量，敏感性和特異性不高，測定IgM-RF

2.速率散射比濁法（ARRAY、IMAGE）定量、準(zhǔn)確、快速，測定IgM-RF

3.ELISA定量、準(zhǔn)確，可測定不一樣類型RF自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第6頁臨床應(yīng)用：

（1）RF在各種本身免疫性疾病患者中均可被檢出。疾病陽性率%RA79SLE30SS95Sclerosis80PM80MCTD25（2）RF滴度與RA患者臨床表現(xiàn)呈正相關(guān)，IgM-RF效價(jià)>80IU/ml并伴有嚴(yán)重關(guān)節(jié)功效障礙時(shí)通常提醒患者預(yù)后不良。自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第7頁抗核抗體

（ANTINUCLEARANTIBODY，ANA）真核細(xì)胞（如HEp-2細(xì)胞、肝細(xì)胞）各種細(xì)胞核成份為靶抗原檢測本身抗體總稱。自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第8頁ANA概念指抗細(xì)胞核成份（DNA，RNA，蛋白質(zhì)和酶）抗體。廣義：抗核酸（Nucleicacid）和核蛋白（Nucleoprotein）抗體總稱一些核抗原成份在核仁和胞漿內(nèi)比核質(zhì)內(nèi)更豐富自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第9頁ANA中性粒細(xì)胞DNP(DNA-Histone)+抗DNP+補(bǔ)體均質(zhì)體LE細(xì)胞LE細(xì)胞：并非SLE特有，PM、SD、RA、SS等結(jié)締組織病，藥品過敏，慢活肝等亦可陽性?？笵NP取代LE細(xì)胞檢測+自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第10頁間接免疫熒光法++抗原HEp-2細(xì)胞肝組織切片待檢抗體（血清）抗原—抗體第二抗體自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第11頁間接免疫熒光法HEp-2細(xì)胞肝組織切片熒光標(biāo)識(shí)抗體病人血清（待檢抗體）自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第12頁分類和命名以首先檢出該抗體患者名字命名，如抗Sm、抗Sa抗體等；以相關(guān)疾病命名，如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B抗體等；以抗原部位命名，如抗核仁抗體、抗線粒體抗體、抗核膜抗體、抗細(xì)胞漿抗體等；以抗原化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分類命名，如抗DNA、抗RNP、抗組蛋白抗體等。自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第13頁抗核抗體檢測方法間接免疫熒光法（indirectimmunofluorescence,IIF）酶免疫斑點(diǎn)法ELISA免疫印跡法

（Western-blot）

自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第14頁ANA譜條法ENA斑點(diǎn)法自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第15頁

細(xì)胞核細(xì)胞漿細(xì)胞骨架細(xì)胞周期

均質(zhì)型核糖體型肌蛋白型中心體型斑點(diǎn)型線粒體型波形纖維蛋白型紡綞體型核仁型高爾基體型細(xì)胞角蛋白型紡綞絲型著絲點(diǎn)型溶酶體型原肌球蛋白型中間體型周圍型顆粒型紐帶蛋白型PCNA型核點(diǎn)型(dots)結(jié)蛋白(橋粒)型

IIF檢測ANA熒光染色模型自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第16頁斑點(diǎn)型（nRNP/Sm）

高滴度抗U1-nRNP為MCTD特征。抗Sm抗體對SLE含有高度特異性。斑點(diǎn)型（SSA/SSB）

抗SSA最常出現(xiàn)于SS及新生兒紅斑狼瘡（100%）?？筍SB抗體幾乎僅見于女性，可出現(xiàn)于SS和SLE。自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第17頁均質(zhì)型

抗dsDNA抗體抗組蛋白抗體(histone)抗ssDNA抗體抗核小體抗體(nucleosome)自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第18頁

抗dsDNA抗體SLE特異性抗體，與病情活動(dòng)度相關(guān)。自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第19頁周圍型

可見于膠原病、PBC、CAH等患者

自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第20頁核點(diǎn)型（DOTS）

見于SLE、SS、PBC、風(fēng)濕病。

抗著絲點(diǎn)型

PSS局限型標(biāo)志抗體。自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第21頁抗PM-Scl（PM-1）抗體

見于重合綜合征（多發(fā)性肌炎PM/皮肌炎DM/彌漫性PSS）

自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第22頁抗核糖體P蛋白（rib-P）抗體抗線粒體抗體（AMA）SLE標(biāo)志抗體原發(fā)性膽汁性肝硬化標(biāo)志抗體自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第23頁抗Jo-1抗體抗高爾基體抗體多發(fā)性肌炎（PM）標(biāo)志抗體偶見于SLE和SS自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第24頁抗肌動(dòng)蛋白抗體見于本身免疫性慢性活動(dòng)型肝炎

自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第25頁

抗ENA抗體譜ENA(extractablenuclearantigen)：可提取核抗原總稱臨床常檢測抗ENA抗體譜主要包含：抗Sm抗U1-RNP抗SSA抗SSB抗Jo-1抗Scl-70抗rib-P蛋白自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第26頁

檢測方法

雙向免疫擴(kuò)散（ID）對流免疫電泳（CIE）免疫印跡法（Western-blot）

ELISA酶免疫斑點(diǎn)法

自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第27頁免疫印跡法

SDS電泳轉(zhuǎn)移電泳酶免疫檢測自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第28頁是一組以人中性粒細(xì)胞胞漿成份為靶抗原，與臨床各種小血管炎性疾病親密相關(guān)本身抗體，對系統(tǒng)性血管炎、炎癥性腸病等疾病診療與判別診療含有主要意義。

抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（anti-neutrophilcytoplasmicautoantibodies,ANCA）自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第29頁

熒光染色型

靶抗原

胞漿型(cANCA)

蛋白酶3（PR3）殺菌/通透性增高蛋白（BPI）

核周型(pANCA)

髓過氧化物酶（MPO）組織蛋白酶G（Cath-G）乳鐵蛋白（LF）白細(xì)胞彈性蛋白酶（HLE）

非經(jīng)典型(aANCA)兼有兩種特征

ANCA熒光染色型與靶抗原自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第30頁周圍型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（pANCA）主要見于炎癥性腸病（潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩?。┳陨砜贵w檢測和應(yīng)用專家講座第31頁胞漿型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cANCA)主要見于Wegener’s肉芽腫及微小多動(dòng)脈炎自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第32頁

ANCA臨床應(yīng)用

髓過氧化物酶（MPO）與顯微鏡下多血管炎、壞死性新月體型腎小球腎炎、過敏性肉芽腫性血管炎相關(guān)、殺菌/通透性增高蛋白（BPI）主要見于肺部炎癥性疾病并與長期慢性綠膿桿菌感染有一定關(guān)系

蛋白酶3（PR3）與Wegener’s肉芽腫（WG）親密相關(guān)。僅cANCA診療WG特異性大于90%，聯(lián)合PR3可超出95%，活動(dòng)期幾乎100%陽性。

組織蛋白酶G(Cath-G)白細(xì)胞彈性蛋白酶(HLE)乳鐵蛋白(LF)可見于SLE、IBD、PBC、PSC等自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第33頁

AKA主要見于RA，陽性率36%~59%，特異性95%~99%，其出現(xiàn)能夠先于臨床表現(xiàn)；高滴度可預(yù)示較嚴(yán)重RA類型?？菇堑鞍卓贵w（AKA）自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第34頁

一組針對含有磷脂結(jié)構(gòu)抗原物質(zhì)本身抗體，主要包含抗心磷脂抗體、抗磷脂酸抗體和抗磷脂酰絲氨酸抗體。類型：IgG、A、M型，IgG型最常見，其次是IgM型，IgA型與本身免疫性疾病關(guān)系較小?？沽字贵w（anti-phospholipidantibody,APLA）自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第35頁檢測方法：

慣用ELISA臨床應(yīng)用：在SLE中總陽性檢出率達(dá)70%~80%，與病情活動(dòng)顯著相關(guān)；ACA陽性者發(fā)生血管炎、溶血性貧血、心臟及中樞神經(jīng)精神系統(tǒng)損傷幾率顯著。在RA患者陽性率為33%~49%。ACA陽性是腦出血及腦梗塞危險(xiǎn)原因。與重復(fù)自然流產(chǎn)和胎兒發(fā)育遲緩有一定相關(guān)性自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第36頁

部分本身免疫性疾病中本身抗體檢出率自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第37頁本身免疫性疾病ANA陽性率（%）SLE80~100MCTD95~100RA20~40PSS85~95PM/DM30~50SS70~80潰瘍性結(jié)腸炎26慢性活動(dòng)性肝炎30~40其它風(fēng)濕病20~50ANA在本身免疫性疾病中檢出率

自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第38頁疾病類型

抗原類型陽性率%SLE

dsDNA

30~90

U1-nRNP15~40

Sm5~30

SSA20~60

SSB10~20PCNA3

核糖體（rib）5~20

心磷脂20~40

新生兒LE

SSA

100藥品誘導(dǎo)LE

組蛋白

95

單鏈DNA80系統(tǒng)性紅斑狼瘡

(SLE)自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第39頁抗原類型陽性率（%)

U1-nRNP

95~100

單鏈DNA

20~50混合性結(jié)締組織?。∕CTD）

自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第40頁抗原類型

陽性率（%）

IgM-RF

65~90抗角蛋白抗體（AKA）

36~59

單鏈DNA

8

組蛋白

少見類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第41頁抗原類型陽性率（%）

SSA

40~95SSB40~95

ssDNA

30~60

唾液腺流出道

40~60

RF

60~80原發(fā)性干燥綜合征（SS）自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第42頁P(yáng)SS類型相對應(yīng)抗原

陽性率（%）彌漫型原纖維蛋白

5~10PM-Scl（PM-1）3Scl-7025~75RNA多聚酶Ⅰ4局限型

著絲點(diǎn)

80~95進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥（PSS）自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第43頁

抗原類型陽性率（%）

PM-Scl（PM-1）

8

Jo-1

25~35

Mi-1

10

Mi-2

5

Ku（重合綜合征）

30~55

單鏈DNA

40~50

PL-7

4

PL-12

3多發(fā)性肌炎/皮肌炎(PM/DM)自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第44頁本身免疫性慢性活動(dòng)性肝炎(AIH)抗原類型陽性率（%）肌動(dòng)蛋白（Actin）40~90ANA(板層素，SSA等)

30~40

肝腎微粒體（LKM-1）

7可溶性肝抗原（SLA）

100線粒體2型（AMA-M2）

5~10

線粒體9型（AMA-M9）

10自身抗體檢測和應(yīng)用專家講座第45頁原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)抗原類型陽性率（%）線粒體2型（M2）