彎曲乳桿菌蛋白酶分離純化技術(shù)規(guī)范編制說明

《彎曲乳桿菌蛋白酶分離純化技術(shù)規(guī)范》編制說明團(tuán)標(biāo)制定工作組二零二三年三月(一)任務(wù)來源根據(jù)2022年全國標(biāo)準(zhǔn)化工作要點(diǎn)，大力推動(dòng)實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)化戰(zhàn)略，持續(xù)深化標(biāo)準(zhǔn)化工作改革，加強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)體系建設(shè)，提升引領(lǐng)高質(zhì)量發(fā)展的能力。依據(jù)《中華人民共和國標(biāo)準(zhǔn)化法》，以及《團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)管理規(guī)定》相關(guān)規(guī)定，中國中小商業(yè)企業(yè)協(xié)會(huì)決定立項(xiàng)并聯(lián)合東北農(nóng)業(yè)大學(xué)等相關(guān)單位共同制定《彎曲乳桿菌蛋白酶分離純化技術(shù)規(guī)范》團(tuán)體標(biāo)菌蛋白酶分離純化技術(shù)規(guī)范》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)立項(xiàng)通知，正式立項(xiàng)。為響應(yīng)市場(chǎng)需求，需要制定完善的彎曲乳桿菌蛋白酶分離純化技術(shù)規(guī)范，對(duì)分離純化技術(shù)進(jìn)行管理，滿足市場(chǎng)質(zhì)量提升需要。(二)編制背景及目的發(fā)酵作為一種便捷的食品加工及貯藏方式具有改善食品風(fēng)味、提高營養(yǎng)品質(zhì)、增強(qiáng)感官特性及延長(zhǎng)食品保質(zhì)期等優(yōu)點(diǎn)。近年來，隨著發(fā)酵肉制品消費(fèi)量的不斷增長(zhǎng)，肉制品用功能性發(fā)酵劑的開發(fā)已經(jīng)成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。乳酸菌是發(fā)酵肉制品中的優(yōu)勢(shì)菌群，在發(fā)酵過程中可以作為發(fā)酵菌株與糖類發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生乳酸和乙酸等物質(zhì)，并使蛋白質(zhì)發(fā)生降解，產(chǎn)生豐富的氨基酸，使產(chǎn)品具有獨(dú)特的風(fēng)味、顏色和質(zhì)地。同時(shí)，乳酸菌可以降低發(fā)酵過程中產(chǎn)生的有害化學(xué)物質(zhì) (如亞硝酸鹽、生物胺等)的含量。乳酸菌對(duì)腐敗菌和致病菌的生長(zhǎng)繁殖也具有抑制作用，從而提高產(chǎn)品的安全性和穩(wěn)定性，延長(zhǎng)產(chǎn)品貨乳酸菌作為公認(rèn)的安全生物，已成為醫(yī)藥和食品生產(chǎn)中使用最廣泛的益生菌。自然環(huán)境、哺乳動(dòng)物的腸道和發(fā)酵食品(發(fā)酵肉制品、發(fā)酵乳和奶酪)都是乳酸菌的良好來源，但是從肉制品中分離的乳酸菌更加適用于發(fā)酵肉制品的生產(chǎn)，其發(fā)酵性能和風(fēng)味也要優(yōu)于其他來源的菌株。國家衛(wèi)生健康委關(guān)于彎曲乳桿菌等24種“三新食品”的公告(2019年第2號(hào))將彎曲乳桿菌列為食品原料，彎曲乳桿菌 (Lactobacilluscurvatus)屬于乳桿菌屬，從傳統(tǒng)發(fā)酵肉制品中分離得到。該菌種已列入歐洲食品安全局資格認(rèn)定(QPS)名單的推薦生物制劑列表中，并列入國際乳品聯(lián)合會(huì)公報(bào)(BulletinoftheIDF455/2012)的“在發(fā)酵食品中有技術(shù)必要性的微生物品種目錄”中，在丹麥列入“用于食品的微生物列表”，用于肉制品、乳制品和魚類制品的加工。鑒于彎曲乳桿菌在嬰幼兒人群的食用安全性資料不足，從風(fēng)險(xiǎn)預(yù)防原則考慮，嬰幼兒不宜食用，使用彎曲乳桿菌的食品標(biāo)簽及說明書中應(yīng)當(dāng)標(biāo)注不適宜人群。(三)編制過程1、項(xiàng)目立項(xiàng)階段食品工業(yè)用酶制劑是由動(dòng)物或植物的可食或非可食部分直接提取,或由傳統(tǒng)或通過基因修飾的微生物(包括但不限于細(xì)菌、放線菌、真菌菌種)發(fā)酵、提取制得,用于食品加工,具有特殊催化功能的生物制品。東北農(nóng)業(yè)大學(xué)對(duì)從哈爾濱風(fēng)干香腸中分離的彎曲乳桿菌蛋白酶進(jìn)行研究，結(jié)果證明彎曲乳桿菌蛋白酶能保持穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)并與肉蛋白相互作用，為彎曲乳桿菌蛋白酶的酶學(xué)特性及其在發(fā)酵肉制品中的應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)。在研究過程中使用的彎曲乳桿菌蛋白酶分離純化技術(shù)無相關(guān)國家、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。為了提供一種分離純化方法簡(jiǎn)單高效、制得的蛋白酶酶活力高的技術(shù)，東北農(nóng)業(yè)大學(xué)向中國中小商業(yè)企業(yè)協(xié)會(huì)提交了《彎曲乳桿菌蛋白酶分離純化技術(shù)規(guī)范》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的制訂申請(qǐng)?！稄澢闂U菌蛋白酶分離純化技術(shù)規(guī)范》標(biāo)準(zhǔn)的編制實(shí)施將完善彎曲乳桿菌蛋白酶分離純化技術(shù)規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)體系。2、理論研究階段標(biāo)準(zhǔn)起草組成立伊始就彎曲乳桿菌蛋白酶分離純化技術(shù)進(jìn)行了深入的調(diào)查研究，同時(shí)廣泛搜集相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和國外技術(shù)資料，進(jìn)行了大量的研究分析、資料查證工作，確定了標(biāo)準(zhǔn)的制定原則，結(jié)合現(xiàn)有實(shí)際應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，為標(biāo)準(zhǔn)的起草奠定了基礎(chǔ)。標(biāo)準(zhǔn)起草組進(jìn)一步研究了彎曲乳桿菌蛋白酶分離純化的主要技術(shù)方法，為標(biāo)準(zhǔn)的具體起草指明方向。3、標(biāo)準(zhǔn)起草階段在理論研究基礎(chǔ)上，起草組在標(biāo)準(zhǔn)編制過程中充分借鑒已有的理論研究和實(shí)踐成果，經(jīng)過數(shù)次修改，形成了《彎曲乳桿菌蛋白酶分離純化技術(shù)規(guī)范》標(biāo)準(zhǔn)草案稿。4、標(biāo)準(zhǔn)征求意見階段架、標(biāo)準(zhǔn)起草等角度廣泛征求多方意見，從理論完善和實(shí)踐應(yīng)用方面提升標(biāo)準(zhǔn)的適用性和實(shí)用性。經(jīng)過理論研究和方法驗(yàn)證，明確和規(guī)范彎曲乳桿菌蛋白酶分離純化技術(shù)加工的技術(shù)要求。起草組形成了《彎曲乳桿菌蛋白酶分離純化技術(shù)規(guī)范》(征求意見稿)。(四)主要起草單位及起草人所做的工作主要起草單位：中國中小商業(yè)企業(yè)協(xié)會(huì)、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)等多家單位的專家成立了規(guī)范起草小組，開展標(biāo)準(zhǔn)的編制工作。經(jīng)工作組的不在廣泛調(diào)研、查閱和研究國際標(biāo)準(zhǔn)、國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)之上，形成本標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿。本標(biāo)準(zhǔn)的制定引用的標(biāo)準(zhǔn)如下：GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法編制原則和主要內(nèi)容(一)標(biāo)準(zhǔn)制定原則本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)準(zhǔn)編制遵循“前瞻性、實(shí)用性、統(tǒng)一性、規(guī)范性”的原則，注重標(biāo)準(zhǔn)的可操作性，嚴(yán)格按照GB/T1.1最新版本的要求進(jìn)行編寫。(二)標(biāo)準(zhǔn)主要技術(shù)內(nèi)容本標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿包括8個(gè)部分，主要內(nèi)容如下：介紹本文件的主要內(nèi)容以及本文件所適用的領(lǐng)域。2、規(guī)范性引用文件列出了本文件引用的標(biāo)準(zhǔn)文件。3、術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4、材料與試劑給出了操作過程所需的材料及實(shí)際，包括純度及濃度。5、儀器與設(shè)備給出了操作過程所需的儀器與設(shè)備，包括基本參數(shù)。6、鹽析給出了鹽析的操作步驟。7、陰離子交換層析包括填料預(yù)處理、裝柱、平衡、加樣、洗脫、酶活力分析。8、純化包括凝膠制備、裝柱、平衡、過濾、酶活力分析和凍干。(三)主要試驗(yàn)(或驗(yàn)證)情況分析無。無(四)標(biāo)準(zhǔn)中涉及專利的情況不涉及。(五)預(yù)期達(dá)到的效益(經(jīng)濟(jì)、效益、生態(tài)等)，對(duì)產(chǎn)業(yè)發(fā)展的作用的情況保障彎曲乳桿菌蛋白酶分離純化技術(shù)的規(guī)范性、統(tǒng)一性，提高彎曲桿菌蛋白酶的質(zhì)量。(六)在標(biāo)準(zhǔn)體系中的位置，與現(xiàn)行相關(guān)法律、法規(guī)、規(guī)章及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，特別是強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的協(xié)調(diào)性符合現(xiàn)行相關(guān)法律、法規(guī)、規(guī)章及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，與強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)一致