腫瘤生物學(xué)資料單酰甘油脂肪酶(MAGL)調(diào)節(jié)脂肪酸網(wǎng)絡(luò)促進(jìn)癌癥病理性課件

MAGL）調(diào)節(jié)脂肪酸網(wǎng)絡(luò)促進(jìn)癌癥病理性單酰甘油脂肪酶（惡性腫瘤中FFA水平高惡性腫瘤中MAGL水平高前期研究?FAS抑制劑處理癌細(xì)胞：細(xì)胞增殖減少，F(xiàn)FA水平無明顯下降→替代途徑生成FFA?MAGL水解單酰甘油(MAG)，生成甘油和FFA，從而提高FFA水平?因此，高水平的MAGL會提高FFA水平?MAGL促進(jìn)癌細(xì)胞體外轉(zhuǎn)移、侵襲、存活和增殖基于活動的蛋白質(zhì)組學(xué)分析人類癌細(xì)胞中的水解酶?黑色素瘤、卵巢癌、乳腺癌(惡性，良性)?惡性腫瘤體外：高轉(zhuǎn)移；體內(nèi)：高增殖率?絲氨酸水解酶，數(shù)量和種類最多,功能與腫瘤有關(guān)(水解蛋白質(zhì)、轉(zhuǎn)導(dǎo)、脂質(zhì)代謝)?其中MAGL在惡性腫瘤中檢測到高表達(dá)藍(lán)色，良性紅色，惡性惡性腫瘤中MAGL表達(dá)量高JZL184特異性抑制MAGL抑制MAGL對MAG水解的影響惡性腫瘤中，抑制MAGL會升高M(jìn)AG水平，降低FFA水平惡性腫瘤中FFA水平高M(jìn)AGL水平與FFA水平有關(guān)惡性腫瘤中MAGL水平高單酰甘油脂肪酶(MAGL)調(diào)節(jié)惡性腫瘤中的游離脂肪酸水平?降解組織中的內(nèi)源大麻素2-AG，和其它單酰甘油酯?在不同惡性腫瘤(黑色素瘤，卵巢癌)中，JZL184抑制MAGL，發(fā)現(xiàn)MAG水平顯著上升，包括2-AG。同時會減少FFA水平。?而在正常細(xì)胞，MAGL不控制FFA水平。?JZL184不影響良性腫瘤的MAG和FFA水平?RNAi敲除MAGL基因，降低了惡性腫瘤中性，而其他的絲氨酸類水解酶不受影響。能升高降低FFA水平。短期都能提高M(jìn)AG和降低?惡性腫瘤有更高的調(diào)節(jié)這兩個水平，顯示了性調(diào)節(jié)作用。)的或者長期和更低的MAGMAGL在惡性腫瘤中對70-80%的MAG活MAG水平，(RNAi)的阻斷MAGL。通過控制MAGL可以FFA的關(guān)鍵(藥物FFAFFA惡性腫瘤中FFA水平高M(jìn)AGL水平與FFA水平有關(guān)惡性腫瘤中MAGL水平高M(jìn)AGL調(diào)節(jié)FFA水平阻斷MAGL的表達(dá)與活性損傷腫瘤的惡性?長期處理：沉默了MAGL后三種惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移、侵染和存活能力都有所下降?短期處理：藥物干擾MAGL的腫瘤只有轉(zhuǎn)移能力下降，存活能力無影響。?可能影響腫瘤惡性需要持續(xù)影響。?shRNA處理的黑色素瘤和卵巢癌細(xì)胞，在裸鼠身上做的皮下異種移植實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)增殖的減少。?JZL184也能達(dá)到同樣的效果?體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，MAGL阻斷降低惡性腫瘤的FFA水平MAGL過表達(dá)增加了FFA水平和腫瘤惡性?良性細(xì)胞中FFA水平提高會否增強(qiáng)惡性??在良性腫瘤中，利用逆轉(zhuǎn)錄病毒過表達(dá)MAGL?MAGL水平相比于對照增強(qiáng)了10倍，MAG水平明顯下降，F(xiàn)FA水平明顯上升。?轉(zhuǎn)移、侵襲、存活能力提高。?并且，需要有活性的MAGL才有效果。顯示了MAGL對良性腫瘤的確有調(diào)控作用。?體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，增強(qiáng)了增殖能力，接近于惡性腫瘤惡性腫瘤中FFA水平高M(jìn)AGL水平與FFA水平有關(guān)惡性腫瘤中MAGL水平高M(jìn)AGL調(diào)節(jié)FFA水平阻斷/過表達(dá)MAGLMAGL對惡性腫瘤病理性有影響MAGL阻斷的腫瘤細(xì)胞對受損的致病性的代謝拯救途徑?內(nèi)源大麻素系統(tǒng)和腫瘤有關(guān)。?MAGL通過降解MAG等底物，提高FFA水平來支持腫瘤惡性。?在MAG中，最重要的信號分子2-AG（2-花生四烯甘油），它能激活MAGLCB1和↑CB2——2-AG受體?！狢B1、CB2↓受體——惡性↑?通過上調(diào)2-AG，可能能夠產(chǎn)生跟阻斷MAGL一樣的抑制轉(zhuǎn)移效應(yīng)。?在腫瘤細(xì)胞中，MAGL調(diào)節(jié)腫瘤惡性與內(nèi)源大麻素系統(tǒng)無關(guān)CB1和CB2拮抗劑不能拯救shMAGL阻斷的腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移性缺陷。同時，也不影響MAG和FFA的水平。并且，惡性腫瘤中CB1和CB2受體低表達(dá)，顯示MAGL不是影響CB1和CB2途徑來影響腫瘤活性。惡性腫瘤中FFA水平高M(jìn)AGL水平與FFA水平有關(guān)惡性腫瘤中MAGL水平高M(jìn)AGL調(diào)節(jié)FFA水平阻斷/過表達(dá)MAGLMAGL對惡性腫瘤病理性有影響與內(nèi)源大麻素系統(tǒng)無關(guān)外源脂肪可恢復(fù)缺陷的惡性，與脂肪有關(guān)，證實(shí)通過FFA水平影響腫瘤惡性如果MAGL介導(dǎo)的原癌反應(yīng)是由FFA引起的，那么shMAGL的腫瘤細(xì)胞的病理性的缺陷可以被外源的脂肪酸拯救。把棕櫚酸、硬脂酸(在惡性腫瘤內(nèi)受MAGL調(diào)節(jié))加入shMAGL和JZL184處理的MAGE過表達(dá)腫瘤細(xì)胞中，恢復(fù)了它們的轉(zhuǎn)移能力??C16:0和C18:0的FFA也能調(diào)節(jié)良性腫瘤的轉(zhuǎn)移能力。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，對裸鼠進(jìn)行皮下異種移植，同時給其高脂飲食，發(fā)現(xiàn)shMAGL的裸鼠的增值能力缺陷基本完全得到拯救。高脂飲食與升高FFA水平相關(guān)。所以，MAGL通過提高FFA水平支持腫瘤惡性。然后猜想，MAGL是否影響脂質(zhì)代謝網(wǎng)絡(luò)。?????MAGL調(diào)節(jié)脂肪酸網(wǎng)絡(luò)增強(qiáng)了原癌基因信號?問題：MAGL-FFA途徑可能通過脂肪酰甘油酯或者FFA循環(huán)，再生NAD+，從而支撐糖酵解。這個假設(shè)解釋了上調(diào)中性脂質(zhì)水解酶在腫瘤中活性升高的現(xiàn)象。?NAD+/NADH比率，丙酮酸和乳酸水平，在shMAGL和過表達(dá)MAGL細(xì)胞中都不變?脂肪分解的另一個原因可能是產(chǎn)生FFA底物，然后發(fā)生β氧化，從而供能。能量途徑-?抑制用以催化β-氧化限速步驟的肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1(CPT1)，不影響癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移活性(對照、shMAGL和過表達(dá))。同時也不影響FFA水平(除了對照組的C20：4MAG)?惡性腫瘤中的CPT1水平較低。?因此，β-氧化不是MAGL-FFA的下游調(diào)節(jié)因子猜想：FFA作為膜結(jié)構(gòu)基本成分、信號因子，MAGL對它的影響可能涉及幾個脂質(zhì)生化網(wǎng)絡(luò)。方法：液相層析質(zhì)譜分析等方法細(xì)胞裂解物中的脂質(zhì)。結(jié)果：MAGL調(diào)節(jié)一個常見的脂肪代謝信號???MAGL-FFA網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)了大部分脂質(zhì)，包括溶血磷脂(LPC,LPA,LPE)，醚酯(MAGE,烷基LPE)，磷脂酸(PA)和前列腺素E2(PGE)。在MAGL過表達(dá)細(xì)胞中上調(diào)，shMAGL細(xì)胞中下調(diào)。而MAG的水平相反。脂質(zhì)沉積信號也出現(xiàn)在惡性腫瘤中。以上證明MAGL調(diào)節(jié)惡性腫瘤中的脂質(zhì)網(wǎng)絡(luò)，包括MAG和FFA，還有許多次級脂質(zhì)代謝。JZL184抑制MAGL后，產(chǎn)生了明顯的次級脂質(zhì)沉積信號shMAGL細(xì)胞和MAGL高表達(dá)細(xì)胞中，JZL184處理后，降低了LPA和PGE2的水平(下一頁)。LPC和LPE水平上升。?????結(jié)果顯示，長期的或者是短期的阻斷MAGL都會對癌細(xì)胞產(chǎn)生明顯的代謝效應(yīng)。磷脂酰膽堿，磷脂酰乙醇胺，神經(jīng)酰胺，鞘氨醇，膽固醇，甘油二酯和甘油三酯不受MAGL活性變化影響。代謝標(biāo)記顯示，MAG和FFA可以代謝為LPA和PGE，而JZL184可以阻止MAG的這種轉(zhuǎn)變。LPA或者PGE2處理能夠拯救shMAGL癌細(xì)胞損傷的轉(zhuǎn)移活性，而對照組無影響。MAGL過表達(dá)的轉(zhuǎn)移效應(yīng)相當(dāng)于用LPA處理的最大效果。證實(shí)了確實(shí)通過LPA等因子影響。G蛋白偶聯(lián)受體活動中，具有生物活性脂質(zhì)的產(chǎn)物，從而促進(jìn)高的轉(zhuǎn)移活性。?????惡性腫瘤中FFA水平高M(jìn)AGL水平與FFA水平有關(guān)惡性腫瘤中MAGL水平高M(jìn)AGL調(diào)節(jié)FFA水平阻斷/過表達(dá)MAGLMAGL對惡性腫瘤病理性有影響與內(nèi)源大麻素系統(tǒng)無關(guān)MAGL調(diào)節(jié)脂肪酸網(wǎng)絡(luò)增外源脂肪可恢復(fù)缺陷的惡強(qiáng)了原癌基因信號性，與脂肪有關(guān)，證實(shí)通過FFA水平影響腫瘤惡性單酰甘油脂肪酶（MAGL）與其他脂質(zhì)?此外，MAGL還有對次級脂質(zhì)代謝網(wǎng)絡(luò)的調(diào)節(jié)作用。?溶血磷脂（LPC,LPA,LPE）?磷脂酸（PA）?前列