課題申書實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)示例

填報(bào)說申請(qǐng)書各項(xiàng)內(nèi)容應(yīng)實(shí)事求條認(rèn)真填寫達(dá)要明確嚴(yán)謹(jǐn)，字跡清晰易辨。外來語要同時(shí)用原文和中文表達(dá)。第一次出現(xiàn)的縮寫詞，二、申請(qǐng)書統(tǒng)一采用A4紙型版面設(shè)計(jì)，無須打印。標(biāo)書請(qǐng)?jiān)?1月7日前發(fā)到：keyan 由學(xué)術(shù)部統(tǒng)一集中打印，過期三、封面右上角“順序號(hào)”由中山大學(xué)北校區(qū)學(xué)生會(huì)學(xué)術(shù)部填寫（詞應(yīng)反映研究?jī)?nèi)容，詞數(shù)量不多于三個(gè)，各詞之間以逗號(hào)分隔）二、立論依請(qǐng)請(qǐng)按以下提綱填寫1、研究意義（基礎(chǔ)研究，著重結(jié)合科學(xué)發(fā)展趨勢(shì)，論述項(xiàng)目的科學(xué)意義應(yīng)用基礎(chǔ)研究結(jié)合學(xué)科前沿、圍繞國(guó)民經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展中的重要科技問題，論述其應(yīng)用前景）2、國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀3、本項(xiàng)目的構(gòu)思或設(shè)計(jì)思路4、本項(xiàng)目的創(chuàng)新之處5、主要參考文獻(xiàn)及出處（格式： ——作者．題目．名．年份．卷(期)．頁碼／專著——作者．書名．者．年份）研究背景與意血吸蟲的確診需要從糞便中檢出蟲卵,但由于血吸蟲生活史的特點(diǎn),在同一時(shí)間段內(nèi)所獲得的糞便中的蟲卵數(shù)不相同,或者沒有蟲卵,所以糞便檢測(cè)的隨機(jī)性很大,不能正確反映情況。尤其當(dāng)度較低時(shí),糞便檢測(cè)方法的敏感性較低,不適用于低度流行病區(qū)血吸蟲的檢測(cè)以及療效考核,而且,在成蟲未產(chǎn)卵以前,即處于潛伏 。目前,已有環(huán)卵沉淀試驗(yàn)(COPT)、間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)(IHA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和循環(huán)抗原檢測(cè)等血吸蟲病免疫診斷方法?？贵w檢測(cè)雖 快,可用于確定診斷和(或)療效考核,但由于血吸蟲成蟲外膜具有不斷更新的特點(diǎn), 技術(shù)，即PCR方法檢測(cè)血吸蟲的 DNA進(jìn)行擴(kuò)增，并證明有較高的敏感性。不過目前利用PCR方法檢測(cè)可疑患者的方法具有侵入性，且當(dāng)需要重復(fù)取樣 的縱向監(jiān)測(cè)的潛力。2009年JInfectDis Nwakanma等用PCR方法檢測(cè)來自 386例患者的唾液中 DNA數(shù)量，結(jié)果顯示唾液中PCR的測(cè)定結(jié)果與顯微鏡檢查法所測(cè)的數(shù)量具有顯著的相關(guān) DNA是如何釋放到唾液中的機(jī)制目前還不明確。由此我們得到啟示，通過PCR方法檢測(cè) 血吸蟲患者唾液中血吸蟲DNA片段，評(píng)價(jià)用PCR方法檢測(cè)血吸蟲患者唾液中血吸蟲DNA片段的可行性，為探索唾液檢測(cè)這一低侵入性的檢測(cè)方法提供新的思路和依據(jù)。國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn) 設(shè)計(jì)特異性引物，采用PCR方法對(duì) 標(biāo)本中的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果表明聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè) 血吸蟲DNA有較高的敏感性， 性釘螺PCR方法，靶 是18S小亞基單位核糖體核酸 易感人群、控制血吸蟲病流行具有一定意義。Driscoll等 血吸蟲尾蚴的PCR方法選擇的靶 釋放劑）在反應(yīng)管中直接提取尾蚴DNA，然后結(jié)合環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（loop-mediatedisothermalamplification，簡(jiǎn)稱LAMP技術(shù)）擴(kuò)增尾蚴DNA，建立了檢測(cè)尾蚴的方法。此法具有快速、非靶序列的污染少及提取過程中無擴(kuò)增靶序列的丟失，操作簡(jiǎn)便，敏感性高（可檢測(cè)到1條尾蚴），可在1．5h內(nèi)完成，若再設(shè)計(jì)2條環(huán)引物，可再節(jié)約0．5h，但成本較高，在試劑 周立等運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)血吸蟲，根據(jù)血吸蟲18S（18SrRNA）基PCR增出1450bp列TA隆后轉(zhuǎn)入大腸DH5α為模板制作熒光定量PCRPCR法檢測(cè)血吸蟲DNA度約為6pg，已經(jīng)初步應(yīng)用于血吸蟲病患者糞便標(biāo)本檢測(cè)，準(zhǔn)確性和特異性較好。本項(xiàng)目的構(gòu)思本項(xiàng)目通過從湖南血吸蟲疫區(qū)收集30份 血吸蟲患者唾液樣本，并在中山大學(xué)北校區(qū)在校大學(xué)生收集50份唾液樣本作為正常對(duì)照。提取唾液中的DNA，利用設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行PCR特異性擴(kuò)增后在經(jīng)2%的瓊脂糖電泳檢測(cè)，紫外觀 本項(xiàng)目的創(chuàng)新之處目前血吸蟲的技術(shù)，即PCR蟲的片段，在血吸蟲的診斷中已經(jīng)得到了很大的發(fā)展，已經(jīng)成功從血吸蟲患者和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的肝組織、糞便、外周標(biāo)本中的DNA但這些方法具有侵入性，且當(dāng)需要重復(fù)取樣測(cè)定時(shí)該方法具有很差的順應(yīng)性。2009年JInfectDisNwakanmaPCR門診患有疑似瘧疾的386液中DNA唾液PCR測(cè)定結(jié)果與顯微鏡檢查法所測(cè)的數(shù)量具有顯著的相關(guān)性，證明對(duì)于檢測(cè)瘧疾來說，唾液取樣是一種很有前途的低1 中 學(xué) 2005年10月第23卷第期2、，等。血吸蟲病免疫診斷方法的研究進(jìn)展國(guó)際醫(yī)學(xué) 3、,。血吸蟲病的免疫診斷現(xiàn)狀與研究進(jìn)展ThestatusquoandprogressofstudyontheimmunodiagnosisofSchistosomiasisjaponicum<<疾病控制>>19993024、牛血吸蟲病5種學(xué)診斷技術(shù)比較ComparisononfivekindsofserologicaldiagnoseassaysofSchistosomiasisjaponicuminfarmcattle<<湖南學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)>>200733第015 澄用ELISA法比 血吸蟲抗原特異性和敏感性湖南醫(yī)學(xué)1994。6、 ，等循環(huán)抗原 醫(yī)學(xué)大學(xué)學(xué)報(bào)7 88910 研究專項(xiàng)課題3年評(píng)估報(bào)告.中國(guó)血吸蟲病防11、吳忠道,等.血吸蟲病再研究I化療后人群再的流行病學(xué)特征.中國(guó)血吸蟲病防治12、RashikaER,etal.Immunizationofmicewithultraviolet-attenuatedcercariaeofmansonitransientlyreducesthefecundityofchallengeworms.InternationalJournalforParasitology,1997,27(5):581-586.1314166-、17;年第期 卷專我國(guó)血吸蟲病現(xiàn)狀及治療藥物《畜牧獸 》2007年01; 性疾病6(2):105-18 病200762519、NwakanmaDC;Gomez-EscobarN;WaltherMetal. tativeDetectionof smodiumfalciparumDNAinSaliva,Blood,andUrine.JInfectDis，2009，Jun199(11):1567-74三、研究方.研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問題（一）本項(xiàng)目通過對(duì)疫區(qū)血吸蟲病患者的唾液樣本進(jìn)行PCR特異性擴(kuò)增后電泳檢測(cè)，觀察是否有特異性條帶產(chǎn)生并通過 檢測(cè)方法的陽性率，以及對(duì)照組假陽性率，并與其他檢測(cè)方法進(jìn)行比較，評(píng)價(jià)唾液PCR法檢測(cè)血吸蟲DNA在血吸蟲 對(duì)患者的唾液樣品進(jìn)行DNA條 （三）疫區(qū)患者唾液中DNA提 .擬采取的研究方法、技術(shù)路線、實(shí)驗(yàn)方案（包括流程圖）及可行性分析研究方學(xué)生中獲取30樣DNA除去蛋白質(zhì)：蛋白酶K氯仿提、分離蛋白質(zhì)；析出DNA：乙醇沉淀使DNA引物15′→3′TCTAATGCTATTGGTTTGAGT引物2:5′→3′TTCCTTATTTTCACAAGGTGA工程技 提PCR.試劑Taq、10×buffer、Mgcl2、dNTP、100bpDNAMarKer、蛋白酶K工程(大連)有限公.引物由 引物1:5′→3′TCTAATGCTATTGGTTTGAGT引物 PCR2%瓊脂糖凝膠電泳溴乙錠含量0.5μg/ml,電泳緩沖液為1×TBE100bpDNA樣品加樣量為10μl,加2μl電壓80V60min,電泳后凝膠置于紫外透射反射儀上觀察結(jié)果。 利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)算出本檢測(cè)方法的陽性率，以及對(duì)照組假陽技術(shù)路線加入特異性引加入特異性引物進(jìn)行PCR增可行