動物實驗操作要領

動物實驗操作要領第1頁/共76頁1.常見實驗動物介紹2.實驗動物的捉拿與固定3.實驗動物的麻醉4.供試品的給予方法5.實驗動物的安死術6.動物實驗中的安全防護第2頁/共76頁實驗動物實驗動物（Laboratoryanimals）是專門培育供實驗用的動物，主要指作為醫(yī)學、藥學、生物學、獸醫(yī)學等的科研、教學、醫(yī)療、鑒定、診斷、生物制品制造等需要為目的而馴養(yǎng)、繁殖、育成的動物。例如小鼠和大鼠是首先按實驗要求，嚴格進行培育的實驗動物，其次如地鼠類、豚鼠、其它嚙齒類、鵪鶉等亦已實驗動物化。第3頁/共76頁實驗動物分類普通動物用于研究所獲得的實驗結果的反應性差，故主要用于生物醫(yī)學示教或為某項研究進行探索方法的預試驗。清潔動物是目前國內(nèi)科研工作主要要求的標準實驗動物，適用于大多數(shù)科研實驗。無特定病原體動物（SPF）是理想的健康動物，用它來研究，可排除疾病或病原的干擾，適用于所有科研實驗、生物制品生產(chǎn)及檢定，是國際公認的標準實驗動物。涉及具有國際交流意義的重大課題，最好選用無特定病原體動物。無菌動物是一種非常規(guī)動物，僅適用于特殊研究目的，如微生物與宿主、微生物間的相互作用，免疫發(fā)生發(fā)展機制，放射醫(yī)學等方面的研究。由于無菌動物體內(nèi)無任何可檢出的微生物，使實驗簡潔明確，給課題研究帶來極大方便。第4頁/共76頁第一部分常用實驗動物小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠（倉鼠）、兔、犬、猴、貓、豬、雞、魚、等。第5頁/共76頁嚙齒動物包括嚙齒目和兔型目大鼠小鼠、豚鼠均屬于——動物界脊索動物門哺乳綱嚙齒目；兔類屬于兔型目，包括兔科和鼠兔科。嚙齒動物的主要特點是：上頜和下頜各兩顆會持續(xù)生長的門牙，嚙齒目動物必須通過啃咬來不斷磨短這兩對門牙。哺乳動物中百分之四十的物種都屬于嚙齒目，而且在除了南極洲的其他所有大陸上都可以找到其大量的蹤跡。第6頁/共76頁小鼠的生物學特性及選擇應用一、生物學特性1.對外界環(huán)境反應敏感，適應性差，強光或噪聲刺激時，可能導致哺乳母鼠神經(jīng)紊亂，發(fā)生食仔現(xiàn)象。溫度過高或多低時，生殖能力下降，嚴重時會發(fā)生死亡；2.對多種毒素和病原體易感，百萬分之一的破傷風毒素能使小鼠死亡；3.對致癌物敏感，自發(fā)性腫瘤多。第7頁/共76頁在生物醫(yī)學中的選擇應用

在生物醫(yī)學領域中，小鼠因其自身的特點，是用途最廣泛、使用量最大的哺乳類實驗動物。1.小鼠廣泛用于藥品的毒性試驗及三致(致畸、致癌、致突變)試驗。2.小鼠常用于藥物對疾病療效篩選試驗,如抗腫瘤藥物,抗結核藥物,抗瘧疾藥物等的篩選；第8頁/共76頁大鼠的生物學特性及選擇應用生物學特征一般特性1.對營養(yǎng)缺乏非常敏感，特別是維生素A和氨基酸供應不足時，可發(fā)生典型的缺乏癥狀。2.大鼠不能嘔吐。第9頁/共76頁3.對外部環(huán)境反應敏感

喜靜環(huán)境，夜間活動，噪音和不適光照對繁殖影響很大。對飼養(yǎng)環(huán)境中的粉塵、氨氣和硫化氫等極為敏感，如果飼養(yǎng)室內(nèi)空氣衛(wèi)生條件較差，在長期慢性刺激下，可引起肺部大面積的炎癥。對飼養(yǎng)環(huán)境中濕度極為敏感，相對濕度低于40％時，易患環(huán)尾病，還會引起哺乳母鼠食仔現(xiàn)象發(fā)生，一般飼養(yǎng)室濕度應保持在50~65％之間。第10頁/共76頁營養(yǎng)學研究

大鼠對營養(yǎng)缺乏比較敏感，可發(fā)生典型的癥狀，是研究營養(yǎng)學的首選動物。常用于蛋白質缺乏、氨基酸、維生素和無機離子代謝等研究；用于營養(yǎng)不良和饑餓對身體發(fā)育所產(chǎn)生不利影響的研究；第11頁/共76頁用于代謝性疾病的研究自發(fā)高血壓肥胖大鼠SHR/N-CP用于研究Ⅱ型糖尿??；自發(fā)糖尿病大鼠“BB”Wistar用于研究Ⅰ型糖尿病；鹽敏感大鼠Ds用于高鹽對生理因素的影響。第12頁/共76頁藥物學研究

大鼠由于繁殖力強、易飼養(yǎng)、體型大小合適、給藥容易、采樣方便、畸胎發(fā)生率低、行為多樣化，被廣泛用于藥物毒力、藥效評價、新藥篩選等研究。大鼠廣泛應用在各種藥物的毒理學研究中，如急性、亞急性和慢性毒性試驗、生殖毒性試驗和藥物依賴試驗等;

大鼠也經(jīng)常用于“三致”試驗研究。第13頁/共76頁藥物藥效研究

1.神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物藥效評價。特別對影響副交感神經(jīng)效應器接點的藥物研究時，首選大鼠。

2.心血管疾病藥物的藥效評價，大鼠的血管阻力和血壓對藥物的反應均很敏感，與人類或大動物的反應均較一致。例如SHR大鼠是研究高血壓藥物的極好的動物模型。

3.治療炎癥藥物藥效評價，大鼠踝關節(jié)對炎癥反應敏感，用于抗關節(jié)炎藥物的研究。

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豚鼠的生物學特性及選擇應用

生物學特性1.豚鼠為草食性動物，喜食纖維素多的飼料；2.豚鼠對外界刺激極為敏感。

聽覺發(fā)達、易驚-----怕噪音；短被毛緊貼皮膚----怕高溫、高濕；

喜活動、愛群居----不宜單籠飼養(yǎng)。第15頁/共76頁3.身體短粗，尾巴只有殘跡，胃壁簿，盲腸發(fā)達；4.晚成動物，孕期比大、小鼠長，產(chǎn)仔少，所以品系少；5.自身不能合成維生素C；6.自動調節(jié)體溫能力較差，飼養(yǎng)最適溫度為18~22℃；7.易引起變態(tài)反應，產(chǎn)生大量補體。染色體為32對.第16頁/共76頁第17頁/共76頁在生物醫(yī)學中的選擇應用免疫學研究豚鼠血清中含有豐富的補體，是所有實驗動物中補體含量最多的一種動物,其補體非常穩(wěn)定，免疫學實驗中所用補體多來源于豚鼠。豚鼠是過敏性休克和變態(tài)反應研究的首選動物，特別是遲發(fā)型超敏反應與人相似。第18頁/共76頁

兔的生物學特性及選擇應用生物學特性1.草食性動物，性情溫順，群居性差。2.家兔喜干怕熱，適宜的環(huán)境溫度因年齡而異，初生仔兔窩內(nèi)溫度30~32℃，成年兔20±2℃。3.有食糞特性：軟糞在晚上排出，含有較豐富的粗蛋白和維生素，家兔直接由肛門吞食軟糞。第19頁/共76頁皮膚反應試驗

兔對刺激反應敏感，反應近似于人，常用兔作為毒物、藥物、化妝品等對皮膚局部作用的研究。膽固醇代謝和動脈粥樣硬化癥研究

兔對致病膽固醇的敏感性高，造型時間短，成型快。家兔模型的病變與人類基本相似。在生物醫(yī)學中的選擇應用第20頁/共76頁第二部分動物實驗前的準備一、動物實驗室的選擇二、實驗動物的購買三、實驗動物編號與標記

第21頁/共76頁動物實驗室的選擇1.根據(jù)實驗目的選擇合適的實驗室及飼養(yǎng)室。2.動物實驗室要與實驗動物同等級別。3.飼養(yǎng)室應符合實驗動物的生活習性及國家實驗動物設施各項標準。

第22頁/共76頁實驗動物的購買

1.應購買有實驗動物生產(chǎn)供應許可證的單位所生產(chǎn)繁殖的實驗動物，并應索取相應實驗動物的質量合格證明。2.如果從外地購買的動物，應考慮運輸中的各種因素對實驗動物的影響，并應查閱運輸檢疫證明。3.購買的動物需要經(jīng)過3-7天的隔離檢疫、觀察。第23頁/共76頁實驗動物編號與標記方法

（一）染色法：

1、單色涂染法：在每組動物不超過l0只或一個實驗不超過40只的情況下適用。實驗動物：大鼠、小鼠。

常用染色劑：3-5％苦味酸溶液，可染成黃色。第24頁/共76頁

方法步驟：

(1)涂染原則：從左到右、從上到下。

(2)左前肢為l號、左側腹部2號、左后肢3號。

(3)兩耳后部4號、背中部5號、后肢背部6號。

(4)右前肢7號、右側腹部8號、右后肢9號。

(5)尾巴根為10號。（6）額部為20號第25頁/共76頁

2、雙色涂染法：

在每組動物不超過100只的情況下適用。實驗動物：大鼠、小鼠。

常用染色劑：

(1)3-5％苦味酸溶液，可染成黃色

——作為“個”位數(shù)。

(2)0.5%中性紅或品紅溶液，可染成紅色——作為“十”位數(shù)。

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方法步驟：

(1)用兩種顏色同時進行染色標記。

(2)用苦味酸(黃色)染色標記作為個位數(shù)，個位數(shù)的染色標記方法同單色涂染法。(3)用品紅(紅色)染色標記作為十位數(shù)，第27頁/共76頁第三部分實驗動物的捉拿與固定大小鼠的捉拿與固定豚鼠的捉拿與固定兔的捉拿與固定第28頁/共76頁

一、小鼠的抓?。?/p>

器材：小鼠飼養(yǎng)盒+面罩1套。

方法步驟：

1、用右手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部將小鼠提起，放在飼養(yǎng)盒的面罩上。

2、用左手拇指和食指迅速、準確地捏住小鼠的兩耳后及頸背部的皮膚，將小鼠提起。第29頁/共76頁

3、翻轉左手掌，以左手掌心和中指夾小鼠背部的皮膚，使小鼠整個呈一條直線。

4、用左手無名指壓住小鼠背部的皮膚，小指壓住小鼠的尾巴根部。

5、松開捏住小鼠尾巴的右手拇指和食指。

此法適用于肌注、腹腔注射、灌胃等

第30頁/共76頁1243第31頁/共76頁大鼠的抓取大鼠的抓取保定：器材：大鼠飼養(yǎng)盒+面罩1套。方法步驟：4-5周內(nèi)的大鼠，方法同小鼠。周齡較大的，則：1、首先戴好防護手套。2、用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部將大鼠提起，放在大鼠飼養(yǎng)盒的面罩上。3、左手順勢按、卡在大鼠軀干背部，稍加壓力向頭頸部滑行。4、以左手拇指和食指捏住大鼠兩耳后部的頭頸皮膚，其余三指和手掌握住大鼠背部皮膚，完成抓取保定。

第32頁/共76頁1243第33頁/共76頁豚鼠的抓取器材：大鼠飼養(yǎng)盒+帶面罩l套。

方法步驟：

1、先用左手輕輕扣、按住豚鼠背部。2、順勢抓緊其肩胛上方皮膚，拇指和食指環(huán)箍其頸部。

3、用右手輕輕托住其臀部，即可將豚鼠抓取保定。第34頁/共76頁1243第35頁/共76頁567第36頁/共76頁注意：1.豚鼠較為膽小易驚，不宜強烈刺激和受驚，所以在抓取時，必須穩(wěn)、準和迅速；2.抓豚鼠時，也不能單純抓取背腹部，否則易造成肝破裂而引起死亡。第37頁/共76頁

步驟：1、用右手抓住兔頸部的被毛和皮膚，輕輕把兔提起。

2、用左手托住兔的臀部。

兔的抓取第38頁/共76頁1243第39頁/共76頁注意：不能單純抓雙耳或抓提背腹部的毛皮。盒式固定，適用于兔耳采血、耳血管注射等情況。

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實驗動物的麻醉

動物麻醉是消除動物手術疼痛，便于實驗操作，保證動物安全，為手術創(chuàng)造良好的條件。動物全身麻醉分四期：1.第一期：隨意興奮期，出現(xiàn)運動與運動失調；2.第二期：不隨意興奮期，由意識完全喪失至規(guī)則的自動呼吸開始時止。3.第三期：外科麻醉期，4.第四期：延髓麻醉期，進入此期，麻醉已嚴重過量。第41頁/共76頁麻醉方法與麻醉藥麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通過吸入、注射（靜脈、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌胃等方法使動物麻醉。常用麻醉藥物：乙醚（吸入），戊巴比妥鈉、硫賁妥鈉、氯胺酮（靜脈），普魯卡因、利多卡因（局麻）。第42頁/共76頁麻醉藥物應用原則：依據(jù)動物體重計算麻醉藥物的劑量；依據(jù)動物生命體征變化控制給藥速度；掌握寧少勿多、分階段給藥的方式。針對不同的動物，選擇不同的麻醉藥物、實施不同的麻醉方法。第43頁/共76頁常用麻醉藥的劑量及注射途徑種類戊巴比妥硫賁妥鈉鹽酸氯胺酮水合氯醛烏拉坦mg/kg途徑mg/kg途徑mg/kg途徑mg/kg途徑mg/kg小鼠3550IVIP2550I.V.IP22-44IM400IP--大鼠2550IVIP2040IVIP22-44IM300IP0.75IP豚鼠3040IVIP2055IVIP22-44IM200-300IP1.5IP家兔3040IVIP20IV22-441.0IVIP狗30IV25IV125IV1.0IV豬<45kg>45kg30-2015IVIV10-95IVIV10-1510-15IMIM第44頁/共76頁麻醉注意事項

麻醉前應禁食8h以上麻醉前應準確稱體重注意麻醉劑量麻醉過程中注意觀察動物的反應情況注意保溫靜脈注射時必須緩慢，在寒冷冬季，麻醉劑在注射前應加熱至動物體溫水平第45頁/共76頁第四部分供試品給予方法

實驗動物常用的給藥方法有口服、注射、吸入等一、經(jīng)口給藥1.自動口服給藥：2.灌胃給藥:是借器械將藥物直接灌入動物胃內(nèi)的方法。此法可以準確控制給藥量，但如果操作不當易造成動物死亡。第46頁/共76頁

方法步驟：1、將灌胃針連接在注射器上，吸入一定量的藥液。2.操作前，大致量一下從口到胃的距離，估計灌胃針頭插入的深度。3.左手捉持動物，使頭部向上。3、右手持針，把灌胃針頭的前端放進動物的口腔，順著上腭部插入咽部，順咽后壁輕輕往下推，灌胃針會順著食管滑入動物的胃內(nèi)，此時沒有抵觸感。4、用右手食指將針栓慢慢往下壓，將注射器中的藥液灌入動物的胃中。（1）大小鼠灌胃：第47頁/共76頁劑量：小鼠約0.1-0.5mL/10g體重。最大體積為1.0mL/只大鼠約1-2mL／100g體重，最大體積為4.0mL/只注意：在灌胃過程中，避免誤插入氣管。第48頁/共76頁1243第49頁/共76頁（二）注射給藥

1.皮下注射給藥

原理：將藥液注入皮下結締組織，經(jīng)毛細血管、淋巴管吸收進入血液循環(huán)。器材：1mL注射器1支、生理鹽水、燒杯、酒精、碘酒、棉球。

第50頁/共76頁

方法步驟：

(1)注射部位：頸背部、腋下、腹側和后肢的皮下

(2)常規(guī)消毒注射部位的皮膚，用注射針頭取一銳角角度刺入皮下.

(3)將針頭輕輕向左右擺動，易擺動則表示已刺入皮下，再輕輕抽吸，如無回血，可緩慢地將藥物注入皮下。

注射量：0.1mL-0.3mL/10g體重。第51頁/共76頁2.皮內(nèi)注射此法用于觀察皮膚血管通透性變化或皮膚反應。注射部位：動物背部脫毛，用針頭平直進入皮內(nèi)注射藥液后，皮膚表面鼓起小泡，停片刻拔出針頭。第52頁/共76頁3.肌肉注射給藥

原理：將藥液注入動物的肌肉組織，經(jīng)毛細血管吸收進入血液循環(huán)。

器材：1mL注射器1支、生理鹽水、燒杯、酒精、碘酒、棉球。

注射部位：一般選擇肌肉豐富而無大血管通過的臀部或大腿外測，回抽無血即可注射。第53頁/共76頁4.腹腔注射原理：將藥液注入小鼠的腹腔。器材：注射器1支、生理鹽水、燒杯、酒精、碘酒、棉球。

方法步驟：(1)用左手將小鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠頭略低于尾部。(2)右手持注射器將針頭在下腹部靠近腹白線的兩側進行穿刺。

第54頁/共76頁5.靜脈注射給藥

(1)大小鼠尾靜脈注射原理：將藥液注入小鼠的尾靜脈。器材：1m1注射器1支、生理鹽水、燒杯、金屬籠或大小鼠器、酒精、碘酒、棉球。

第55頁/共76頁

方法步驟：

(1)將大小鼠放在金屬籠或小鼠固定器中，通過金屬籠或大小鼠固定器的孔拉出鼠尾巴。

(2)用左手捏住鼠尾巴中下部，用75％酒精棉球反復擦拭尾部。

第56頁/共76頁(3)注射時，以左手拇指和中指捏住鼠尾兩側，用食指從下面托起尾巴，以無名指夾住尾巴的末梢。(4)右手持4號針頭的注射器，使針頭與靜脈平行（小于30度角）。

第57頁/共76頁(5)從鼠尾巴下1/4處進針，仔細觀察，如果無阻力，無白色皮丘出現(xiàn)，說明已刺入血管，即可注入藥物。(6)拔出針頭后，用干棉球壓住注射部位約l、2min，防止出血。

注射量：小鼠

0.05m1-0.1m1/10g體重。

大鼠1.0-2.0m1/100g體重第58頁/共76頁（2）兔耳緣靜脈給藥原理：穿刺兔的耳緣靜脈器材：兔保定架、注射器1支、生理鹽水、燒杯、酒精、碘酒、棉球。

方法步驟：

(1)將兔放在保定架內(nèi)保定。(2)酒精消毒并揉搓血管，使兔的耳緣靜脈充盈。

第59頁/共76頁(3)用左手食指和中指夾住兔的耳緣靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠端，無名指和小指放在耳廓下作墊。

(4)右手拿注射器，針尖的斜面朝上，將針頭從遠心端插入血管，放松對靜脈近心端的壓迫，回抽有血即可注射，拔針后用棉球止血。

第60頁/共76頁第五部分實驗動物的安死術

實驗動物的處死必須遵循實驗動物的倫理要求和動物福利法按照人道主義原則處死實驗動物。一、“安死術”的概念：即安樂死術，是指以人道的方法處死動物過程。在處死動物的過程中盡量減少動物的驚慌、焦慮，使其安靜地、無痛苦地死亡。二、采用安死術必須符合的標準。第61頁/共76頁安死術的常用方法頸椎脫位法是將實驗動物的頸椎脫臼，斷離脊髓致死，為大、小鼠最常用的處死方法。空氣栓塞法處死兔、貓、犬常用此法，兔、貓為20-40ml,犬為80-150ml.過量麻醉處死此法多用于處死大鼠、豚鼠和家兔,吸入乙醚或腹腔注射巴比妥鈉。二氧化碳吸入法讓實驗動物吸入大量C02等氣體而中毒死亡。斷頭處死法、擊打頭蓋骨處死法第62頁/共76頁第六部分動物實驗中的安全防護

主要是指在實驗過程中可能對實驗人員造成的危害和對公共環(huán)境造成的污染等各種不安全因素進行的防護。包括防火、防毒、防爆、防觸電、防輻射、防外傷、防動物咬傷、防動物傳染。

實驗人員的安全管理人員安全教育實驗人員的健康管理以外損傷的防護第63頁/共76頁動物實驗常用手術器械第64頁/共76頁

粗剪用于蛙類實驗中的剪骨、肌肉和皮膚等粗硬組織以及家兔等實驗動物的剪毛。剪毛時，剪毛剪自然落下逆毛方向一次次將毛剪下即可，加力下壓或一手提起被毛，均易剪破皮膚。剪下的毛應集中放入加有清水的污物盒內(nèi)，避免到處飛揚。第65