動物細(xì)胞融合與單克隆抗體講課

關(guān)于動物細(xì)胞融合與單克隆抗體講課第一頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合雜合的原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁雜種細(xì)胞細(xì)胞分裂分化發(fā)育愈傷組織雜種植株溫故知新:植物體細(xì)胞雜交過程第二頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日材料1:1970年，有兩位科學(xué)家做了一個人—鼠細(xì)胞融合的實驗，以證明細(xì)胞膜的流動性。那么，如何實現(xiàn)人—鼠細(xì)胞的融合，動物細(xì)胞融合后還有什么用途呢？人-鼠(想像圖)第三頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日一、動物細(xì)胞融合1.概念：動物細(xì)胞融合（cellfusion）也成細(xì)胞雜交，是指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程。融合和形成的具有原來兩個或多個細(xì)胞遺傳物質(zhì)的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。2、原理：細(xì)胞膜的流動性第四頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日3.融合過程：誘導(dǎo)融合的方法？第五頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日誘導(dǎo)方法：物理方法：化學(xué)法：生物法：滅活的病毒電激等聚乙二醇（PEG)第六頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日為什么滅活的病毒能作誘導(dǎo)劑？3.融合過程：第七頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。P52生物技術(shù)資料卡第八頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日植物細(xì)胞雜交與動物細(xì)胞融合的比較比較項目植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合原理融合前處理使用的酶誘導(dǎo)方法主要用途細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動性纖維素酶、果膠酶胰蛋白酶物理方法（離心、振蕩、電激）化學(xué)方法（PEG）物理、化學(xué)方法滅活的病毒獲得雜種植株制備單克隆抗體去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合第九頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日4.意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。5.應(yīng)用：最重要的用途是制備單克隆抗體第十頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日動物細(xì)胞融合物理法：化學(xué)法：生物法：誘導(dǎo)融合的方法原理：細(xì)胞膜的流動性過程：離心、震動、電激聚乙二醇（PEG)滅活的病毒動、植物細(xì)胞融合的主要區(qū)別用途：最重要的用途是制備單克隆抗體第十一頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日思考？1.抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生？2.抗體的化學(xué)本質(zhì)是什么？與抗原作用的特點？主要分布在哪里？3.用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？(三)單克隆抗體第十二頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日第十三頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日思考？1.抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生？2.抗體的化學(xué)本質(zhì)是什么？與抗原作用的特點？主要分布在哪里？3.用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？(三)單克隆抗體第十四頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從血清中分離抗體該法制備抗體的特點：

產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。多種效應(yīng)B細(xì)胞動物體內(nèi)多種抗體抗原第十五頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日單克隆抗體的制備單克隆抗體:單個細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一特異性強(qiáng)的抗體利用效應(yīng)B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得雜交瘤細(xì)胞利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞設(shè)計方案：第十六頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日1、過程

注射抗原已免疫的B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體第十七頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日單克隆抗體的制備第十八頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日骨髓瘤細(xì)胞免疫小鼠單克隆抗體篩選克隆、篩選體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)B淋巴細(xì)胞（選擇培養(yǎng)基）（抗體檢測）細(xì)胞融合雜交細(xì)胞第十九頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日1、（只考慮兩兩融合）融合細(xì)胞幾種類型？2、本過程中進(jìn)行了兩次篩選，目的分別是什么？第1次篩選要淘汰哪些細(xì)胞？3、雜交瘤細(xì)胞有何特點？4、本過程利用的哪些技術(shù)？思考以下問題：第二十頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日2、單克隆抗體的優(yōu)點特異性強(qiáng)、靈敏度高第二十一頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日3、單克隆抗體的應(yīng)用（1）作為診斷試劑——最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡易、快速（如同位素標(biāo)記單克隆抗體，可診斷腫瘤、心血管畸形等）第二十二頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日（2）運載藥物生物導(dǎo)彈=單克隆抗體+藥物，治療腫瘤）(“生物導(dǎo)彈”—單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭)第二十三頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日

看書上53頁圖，分組討論，單抗制備過程分哪幾步？請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？

第二十四頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日有夢想，才會有創(chuàng)造！已成功的動物細(xì)胞融合實例有很多，如人—小鼠、人—兔、人—雞、鼠—兔、雞—鼠等上百種融合細(xì)胞。甚至已成功完成了酵母菌—雞、人—胡蘿卜等細(xì)胞的融合。想了解更多信息，可通過網(wǎng)絡(luò)、電視、雜志等途徑關(guān)注細(xì)胞融合和單克隆抗體的最新信息。生物種間雜交想像圖第二十五頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（）A.經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞B.沒經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞

C.經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞D.沒經(jīng)過免疫的Ｂ淋巴細(xì)胞A鞏固練習(xí)2.動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）誘導(dǎo)融合的方法完全相同B.所用的技術(shù)手段基本相同C.操作步驟基本相同D.都能形成雜種細(xì)胞D第二十六頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日3.單克隆抗體制備過程中培育的雜交細(xì)胞是（）A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞融合B.由小鼠一個B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成C.由小鼠一個B淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成D.由小鼠一個B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成D4.只能使動物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法是（）

A．PEGB．滅活的病毒C．電刺激D．離心B第二十七頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日5.單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（）①淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞A.②④B.①③⑤C.①②③④D.②③C6.“生物導(dǎo)彈”是指 （）A.單克隆抗體B.雜交瘤細(xì)胞C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物

D第二十八頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日A、B細(xì)胞為動物細(xì)胞,請據(jù)圖回答問題:A細(xì)胞B細(xì)胞C細(xì)胞D細(xì)胞(1)若A細(xì)胞為骨髓瘤細(xì)胞B細(xì)胞為淋巴細(xì)胞,那么D細(xì)胞稱為

細(xì)胞,D細(xì)胞具有兩個親本細(xì)胞的特征,一方面因具有骨髓瘤細(xì)胞的

性質(zhì),通過

方式產(chǎn)生大量細(xì)胞,我們稱之為

過程;另一方面能分泌大量的抗體,我們把該過程分泌的抗體稱

.雜交瘤連續(xù)分裂有絲分裂單克隆單克隆抗體練一練第二十九頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期日(2)D細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體其化學(xué)本質(zhì)是

,合成該物質(zhì)的場所是

,它是由

控制合成的,合成過程包括