細(xì)菌室日常工作

關(guān)于細(xì)菌室日常工作第一頁，共十九頁，編輯于2023年，星期三細(xì)菌室日常工作一、接收，接種細(xì)菌室標(biāo)本二、培養(yǎng)，分析，鑒定病原菌（致病菌）三、抗酸桿菌工作（略）四、培養(yǎng)基制備五、醫(yī)院感染，質(zhì)量控制

第二頁，共十九頁，編輯于2023年，星期三接收，接種標(biāo)本細(xì)菌室常見標(biāo)本：痰標(biāo)本、尿標(biāo)本、血培養(yǎng)標(biāo)本、糞便、咽拭子、胸腹水標(biāo)本、纖支刷片（抗酸）、腦脊液、分泌物、支原體藥敏第三頁，共十九頁，編輯于2023年，星期三注意事項(xiàng)標(biāo)本拒收的原則錯(cuò)誤標(biāo)簽標(biāo)本泄露，標(biāo)本明顯被污染拭子上的標(biāo)簽干掉或者標(biāo)本量不夠標(biāo)本不適合所要求的試驗(yàn)運(yùn)送標(biāo)本的時(shí)間過長(zhǎng)或所用運(yùn)送培養(yǎng)基不合適第四頁，共十九頁，編輯于2023年，星期三目前細(xì)菌室標(biāo)本質(zhì)量問題中段尿，痰污染問題標(biāo)本放置時(shí)間過長(zhǎng)問題（血培養(yǎng)）無價(jià)值的糞便、痰標(biāo)本第五頁，共十九頁，編輯于2023年，星期三標(biāo)本污染（尿液）盡量避免或減少尿道口正常菌群干擾。清潔中段尿、導(dǎo)尿?qū)Ч苣颉⒔?jīng)恥骨上皮膚穿刺采集膀胱內(nèi)尿液，送檢標(biāo)本以晨起第一次尿液為佳尿量不宜太多，試管塞子與尿液不應(yīng)直接接觸留取導(dǎo)尿管尿要排空導(dǎo)尿管內(nèi)陳舊尿液，倘留置尿管超過三天應(yīng)避免采用。標(biāo)本采集后立即送檢，不能立即送檢者，可暫存4℃冰箱，但保存不超過8h第六頁，共十九頁，編輯于2023年，星期三血培養(yǎng)瓶放置時(shí)間過長(zhǎng)的影響

全自動(dòng)血液細(xì)菌培養(yǎng)儀檢測(cè)原理：全自動(dòng)連續(xù)檢測(cè)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)微生物代謝引起的CO2濃度變化，而CO2濃度的改變可直接激活培養(yǎng)瓶底部包埋的對(duì)CO2濃度變化高度敏感的熒光物質(zhì)，在二極管的激發(fā)下熒光物質(zhì)釋放熒光，熒光強(qiáng)度變化可直接反應(yīng)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)CO2濃度變化。以判定是否有微生物生長(zhǎng)繁殖，儀器每十分鐘自動(dòng)進(jìn)行質(zhì)控校正，由電腦分析判斷細(xì)菌培養(yǎng)陰陽性，陽性者發(fā)出警報(bào)。培養(yǎng)瓶有標(biāo)準(zhǔn)及含樹脂（有吸附抗生素作用）的需氧、厭氧瓶、兒童瓶。

簡(jiǎn)單點(diǎn)來說就是培養(yǎng)瓶底部的熒光傳感器受細(xì)菌產(chǎn)生的代謝物質(zhì)激發(fā)產(chǎn)生熒光，熒光強(qiáng)度隨著細(xì)菌數(shù)量的增加而不斷增強(qiáng)。系統(tǒng)根據(jù)熒光變化趨勢(shì)判斷有無微生物生長(zhǎng)。第七頁，共十九頁，編輯于2023年，星期三血培養(yǎng)瓶放置時(shí)間過長(zhǎng)的影響細(xì)菌生長(zhǎng)曲線（Bacterialgrowthcurve）是專指單細(xì)胞微生物的。它是將少量的單細(xì)胞微生物接種純種到一定容積的液體培養(yǎng)基后，在適宜的條件下培養(yǎng)，定時(shí)取樣測(cè)定細(xì)胞數(shù)量。以細(xì)胞增長(zhǎng)數(shù)目的對(duì)數(shù)做縱坐標(biāo)，以培養(yǎng)時(shí)間做橫坐標(biāo)，繪制一條如圖所示的曲線，我們稱這條曲線為細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線第八頁，共十九頁，編輯于2023年，星期三血培養(yǎng)瓶放置時(shí)間過長(zhǎng)的影響如圖，細(xì)菌在穩(wěn)定期和衰亡期細(xì)菌的數(shù)目增長(zhǎng)減慢趨于平緩甚至在衰亡期時(shí)反而會(huì)降低，此時(shí)培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)儀會(huì)出現(xiàn)假陰性！第九頁，共十九頁，編輯于2023年，星期三無價(jià)值的糞便、痰標(biāo)本應(yīng)在發(fā)病早期并且盡量在用抗生素治療前采集，稀便不少于1ml，固體便不少于1克，無便患者可用直腸拭子采集標(biāo)本。要挑取含膿、黏液、血等病理改變或水樣糞便送檢。直腸拭子采樣量要足夠，拭子上肉眼應(yīng)可見糞便。注意事項(xiàng)：（1）雖然糞便標(biāo)本本身含很多細(xì)菌但也要用無菌容器。（2）注意挑取膿血便或粘液便做培養(yǎng)（3）要進(jìn)行分區(qū)劃線。外觀為膿痰、粘液、血，涂片鏡檢<10個(gè)上皮細(xì)胞/LP、>25個(gè)WBC/LP為合格標(biāo)本。第十頁，共十九頁，編輯于2023年，星期三常用的培養(yǎng)基種類和用途血平板—普通細(xì)菌用巧克力平板—含V、X因子，主要培養(yǎng)嗜血桿菌、腦膜炎球菌和淋球菌用麥康凱平板—G-桿菌用沙保羅平板—真菌培養(yǎng)用SS平板—沙門氏菌和志賀氏菌用M-H平板—細(xì)菌藥敏用TCBS平板—弧菌科細(xì)菌用真菌顯色平板—真菌培養(yǎng)用羅氏培養(yǎng)基—分枝桿菌用第十一頁，共十九頁，編輯于2023年，星期三標(biāo)本接種以及相應(yīng)平板標(biāo)本類型培養(yǎng)基

痰血平板、麥康凱平板、沙保羅平板中段尿血平板、麥康凱平板腦脊液血平板、巧克力平板、麥康凱平板穿刺液血平板、麥康凱平板、巧克力平板咽拭子血平板、巧克力平板、麥康凱平板血培養(yǎng)陽性血平板、麥康凱平板糞便標(biāo)本SS平板、血平板病灶分泌物血平板、巧克力平板、麥康凱平板第十二頁，共十九頁，編輯于2023年，星期三注意事項(xiàng)接種環(huán)使用前后均應(yīng)滅菌，以免造成環(huán)境污染及交叉污染。生理鹽水和棉簽均應(yīng)滅菌處理防止污染標(biāo)本。接種標(biāo)本時(shí)應(yīng)待接種環(huán)冷卻后進(jìn)行，以免將細(xì)菌燙死從而造成假陰性結(jié)果。四區(qū)劃線時(shí)應(yīng)輕柔，不破壞平板；線條應(yīng)疏密合適，從而更好分離出單個(gè)菌落。基本原則：無菌操作和盡量減少中間環(huán)節(jié)。、第十三頁，共十九頁，編輯于2023年，星期三細(xì)菌鑒定的基本步驟標(biāo)本的分離培養(yǎng)（這關(guān)系到整個(gè)結(jié)果的可靠性）培養(yǎng)結(jié)果的觀察（致病菌的選擇）細(xì)菌的分純、鑒定（MicroScan自動(dòng)微生物鑒定及藥敏分析系統(tǒng)）第十四頁，共十九頁，編輯于2023年，星期三細(xì)菌鑒定的基本步驟觀察培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的菌落特點(diǎn)：

菌落的大小，是否光滑，菌落邊緣是否整齊，菌落的顏色——如無色似水滴狀、白色、灰色、黃色、以及色澤的深淺，是否透光及透光的強(qiáng)弱，菌落產(chǎn)生光澤，等等；菌落產(chǎn)生的溶血環(huán)的情況——α溶血、β溶血、水溶性溶血、脂溶性溶血和其他的溶血特點(diǎn)；細(xì)菌產(chǎn)生的氣味——如銅綠假單胞菌的“生姜”味，酵母菌的酵母味，芳香黃桿菌的水果糖芳香味等等。第十五頁，共十九頁，編輯于2023年，星期三細(xì)菌鑒定的基本步驟培養(yǎng)結(jié)果的觀察（致病菌的選擇）觀察培養(yǎng)基上是否有細(xì)菌生長(zhǎng)觀察生長(zhǎng)情況（是單一種細(xì)菌還是多種細(xì)菌）觀察生長(zhǎng)的細(xì)菌是否具有某些典型特征排除污染細(xì)菌對(duì)于無菌部位所采集的標(biāo)本（CSF、胸水、腹水、關(guān)節(jié)液、血液、骨髓、各器官穿刺液等等），只要培養(yǎng)出細(xì)菌（排除污染）一律都視為致病菌。對(duì)于有菌部位或易被正常菌群污染的標(biāo)本，培養(yǎng)出細(xì)菌后，要根據(jù)標(biāo)本的不同，排除正常菌群后，再挑選致病菌第十六頁，共十九頁，編輯于2023年，星期三細(xì)菌鑒定的基本步驟涂片染色(革蘭染色）革蘭染色：革蘭染色可以反映微生物種類和類別，方便描述物種的形態(tài)或結(jié)構(gòu)。用此染色法可將絕大部分細(xì)菌分為兩大類,這樣可將致病菌的范圍縮小,然后再進(jìn)一步鑒定。如:

金黃色葡萄球菌、綠色溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉?xiàng)U菌、炭疽桿菌等屬革蘭氏染色陽性菌。

百日咳桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、流行性腦膜炎雙球菌、淋病雙球菌等屬革蘭氏陰性。第十七頁，共十九頁，編輯于202