DB32T 4367-2022飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測定 時間分辨熒光免疫層析定量法

ICS65.120CCSB46江蘇省地32方標(biāo)準(zhǔn)的測定rminationofdeoxynivalenolinfeedsvedfluorescenceimmunochromatographyquantitativemethod 前言請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。并歸口。起草單位：江蘇省家禽科學(xué)研究所、上海雄圖生物科技有限公司。飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測定時間分辨熒光免疫層析定量法本文件規(guī)定了飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇測定的原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、樣品制備、樣本文件適用于飼料原料、濃縮飼料、配合飼料、精料補充料等試樣中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測定。范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適件。GBT682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T14699.1飼料采樣GBT0195動物飼料試樣的制備定義imeresolvedfluorescentmicrosphere形狀為球形，直徑在幾納米至幾十微米之間，微球表面或內(nèi)部負(fù)載有熒光物質(zhì)，在受到一定的能量激發(fā)時能夠發(fā)出熒光的微粒，比普通熒光半衰期長。微球表面修飾有合適密度的羧基或其它功能基ntitativemethod4原理試樣中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇與時間分辨熒光微球標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合后，抑制了層析過程中標(biāo)線結(jié)合的熒光標(biāo)記物濃度與樣品中玉米赤霉烯酮的濃度無關(guān)。層析結(jié)束后，通過儀器檢測計算試紙條試劑和材料5.2磷酸二氫鉀(KH2PO4)。5.3氯化鉀(KCl)。5.4氯化鈉(NaCl)。5.5鹽酸(HCl)。5.6甲醇(CH3OH)。5.7蔗糖(C12H22O11)。5.8牛血清白蛋白(BSA)：純度≥98%。O5.12稀釋液：在1L磷酸鹽緩沖溶液(5.10)中分別加入2.5g蔗糖(5.7)、1.0g牛血清白蛋白g，用于樣品上清的稀釋。5.14脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液：取脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標(biāo)準(zhǔn)溶液(5.13)1mL于2mL容量制備成濃度為100mg/L的儲備液。：辨熒光免疫層析定量試紙條結(jié)構(gòu)示意圖T腐鐮刀菌烯醇封閉抗原，C線包被二5.17陰性樣本：玉米基質(zhì)空白樣本，嘔吐毒素含量＜25μg/kg。和設(shè)備6.2渦旋振蕩器：0r/min~2500r/min。機：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。6.4微量可調(diào)移液器：20μL~200μL，0.1mL~1mL。6.5干式恒溫孵育器：37.0℃±2.0℃(不帶鼓風(fēng))。試紙條的熒光信號并自動計算定量的檢測結(jié)果。樣品前處理8.1稱取1.0g±0.02g樣品于10mL離心管中，用移液器(6.4)加入5mL提取液(5.11)，用渦旋振蕩器(6.2)振蕩提取5min，用離心機(6.3)4000r/min離心1min，上清備用；如果樣品濃度過高，用提取液(5.11)稀釋。L品提取液(8.1)，加入到600μL稀釋液(5.12)，混勻后待點樣檢測。9標(biāo)準(zhǔn)曲線制定mL振蕩器(6.2)振蕩提取5min，用離心機(6.3)4000r/min離心1min，上清備用。9.2分別吸取脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液(5.14)0.000mL、0.004mL、0.010mL、0.020mL、mLmL、0.200mL、0.300mL、0.400mL于5mL容量瓶中，用空白基質(zhì)溶液(9.1)定ngmLngmLngmLngmL300ng/mL、600ng/mL、1000ng/mL、9.3取100μL標(biāo)準(zhǔn)工作液(9.2)分別加入600μL稀釋液(5.12)，混勻后由低濃度到高濃度進行檢測(10)。儀器軟件可根據(jù)T線信號值與C線信號值的比值(T/C)和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度的自然對數(shù)值(Inc)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。D10.2時間分辨熒光免疫定量分析儀(6.6)預(yù)熱5min后，插入試紙條所對應(yīng)的ID卡(5.15)。10.3從鋁箔袋中取出脫氧雪腐鐮刀菌烯醇熒光免疫定量檢測試紙條(5.16)，水平放置于干式恒溫孵育器(6.5)。10.4用移液器(6.4)吸取100μL經(jīng)過前處理的待測樣品(8.2)加入試紙條的加樣孔中，蓋上孵(5.16)插入熒光免疫定量分析儀(6.6)的試紙條插槽中，點擊讀數(shù)。樣品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)X計，數(shù)值以微克每千克(μg/kg)