微生物的純培養(yǎng)與顯微技術(shù)

微生物的純培養(yǎng)與顯微技術(shù)第1頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四本章重點(diǎn)：1、微生物的分離2、純培養(yǎng)技術(shù)3、常用的菌種保藏方法

4、細(xì)菌、放線菌、霉菌、酵母菌等的形態(tài)特征

第2頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四第一節(jié)微生物的分離和純培養(yǎng)一、相關(guān)概念培養(yǎng)物（culture）：在微生物學(xué)中，指在人為規(guī)定的條件下培養(yǎng)、繁殖得到的微生物群體。純培養(yǎng)物（pureculture）：只有一種微生物的培養(yǎng)物。無菌技術(shù)（aseptictechnique）：指在分離、轉(zhuǎn)接及培養(yǎng)純培養(yǎng)物時(shí)防止其被其他微生物污染的技術(shù)。第3頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四二、無菌條件1、微生物培養(yǎng)用的常用器具

試管、玻璃三角燒瓶、平皿2、滅菌方式

高壓蒸汽滅菌、高溫干熱滅菌、化學(xué)試劑、紫外射線、微波、過濾等3、接種操作1）、對操作環(huán)境滅菌2）、對接種工具的滅菌3）、接種過程的無菌操作第4頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四高壓蒸汽滅菌鍋超凈工作臺第5頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四三、固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)（一）相關(guān)概念1、菌落（colony）：單個(gè)微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞生長群體。2、菌苔（lawn）：當(dāng)固體培養(yǎng)基表面眾多菌落連成一片時(shí)，便成為菌苔。第6頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四細(xì)菌菌落形態(tài)第7頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四第8頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四第9頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四第10頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四（二）微生物分離的手段1、稀釋倒平板法（pourplatemethod）

分離材料無菌水倍比稀釋取不同稀釋液少許

倒入45-50℃瓊脂培養(yǎng)基混合倒入培養(yǎng)皿培養(yǎng)第11頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四2、涂布平板法（spreadplatemethod）一定稀釋度的樣品滴加在平板表面

無菌玻璃涂棒涂布菌液均勻分散整個(gè)平板表面

第12頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四3、平板劃線法（streakplatemethod）第13頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四4、稀釋搖管法（dilutionshakeculturemethod）第14頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四四、液體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)1、原因不是所有的微生物都能在固體培養(yǎng)基上生長。例如：許多原生動(dòng)物、藻類、大細(xì)胞細(xì)菌等。2、方法

稀釋法（必須在同一個(gè)稀釋度的許多平行試管中，應(yīng)超過95%表現(xiàn)為不生長）第15頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四五、單細(xì)胞（孢子）分離直接采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個(gè)細(xì)胞或單個(gè)個(gè)體進(jìn)行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)。第16頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四六、選擇培養(yǎng)分離（一）原因：1、單一培養(yǎng)不能滿足所有微生物生長。2、微生物對培養(yǎng)條件的選擇。3、微生物對營養(yǎng)的竟?fàn)?。（二）分離方法1、利用選擇平板進(jìn)行直接分離

依據(jù)：利用微生物自身特點(diǎn)選擇分離條件，如耐高溫、產(chǎn)特殊酶類等。第17頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四2、富集培養(yǎng)

本質(zhì)：使要分離的目的微生物的數(shù)量大大增加。

富集條件：根據(jù)所需分離的微生物的特點(diǎn)進(jìn)行選擇，如溫度、pH、紫外線、高壓、光照、氧氣、營養(yǎng)等等許多方面。

第18頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四3、微生物的直接培養(yǎng)

方法：利用微生物自然生長條件下加入選擇條件。

原理：自然條件下微生物的多樣性，代謝的多樣性，微生物作用的協(xié)調(diào)性（分工合作）。第19頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四七、二元培養(yǎng)物（一）概念

二元培養(yǎng)物：培養(yǎng)物中只含有二種微生物，而且是有意識的保持二者之間的特定關(guān)系的培養(yǎng)物。（二）應(yīng)用方面

嚴(yán)格寄生物的分離、特殊共生關(guān)系的微生物的分離。第20頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四八、微生物的保藏技術(shù)1、意義2、菌種保藏機(jī)構(gòu)（P19）3、保藏方法1）傳代培養(yǎng)保藏注意：a、應(yīng)根據(jù)微生物不同特性選擇培養(yǎng)基。b、傳代時(shí)間

2）冷凍保藏

注意：a、冰晶形成對細(xì)胞傷害。b、要快速升降溫。c、加入保護(hù)劑第21頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四3）干燥保藏法

a、沙土管保存

適用于產(chǎn)孢子的微生物，如芽孢桿菌、放線菌等。

b、冷凍真空保藏

將有保護(hù)劑樣品先凍結(jié)，然后真空作用下除去水分，置真空或惰性氣體的密閉環(huán)境中低溫保存。4）其它方法紙片保藏、薄膜保藏、寄主保藏等第22頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四第二節(jié)顯微鏡下的微生物第23頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四一、細(xì)菌、放線菌和古生菌

原核微生物分為真細(xì)菌和古生菌，真細(xì)菌又分為細(xì)菌、放線菌。1、細(xì)菌的形態(tài)和排列

1）一般形態(tài)球狀、桿狀與螺旋狀三種

第24頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四第25頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四2)細(xì)菌的排列

許多細(xì)菌也常以成對、成鏈、成簇的形式生長。第26頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四第27頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四3）其它形態(tài)柄桿菌（prosthecatebacteria）細(xì)胞上有柄（stalk）、菌絲（hyphae）、附器（appendages）等細(xì)胞質(zhì)伸出物，細(xì)胞呈桿狀或梭狀，并有特征性的細(xì)柄。第28頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四fivecellsareatachedbytheirstalks.第29頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四

Anelectronmicrographofametal-shadowedpreparationofPlanctomycesmaris.Asinglecellisabout1-1.5umlong.Notethefibrillarnatureofthestalk.Piliarealsoabundant.Notealsotheflagella(curlyappendages)oneachcellandthebudthatisdevelopingfromthenonstalkedpoleofonecell.第30頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四PhotomicrographsofcellsofHyphomicrobium.Byphasecontrast,showingtypicalfields.Noticethelonghyphaeandtheoccasionalbuddingcell第31頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四

球衣菌（Sphaerotilus），能形成衣鞘（sheath），桿狀的細(xì)胞呈鏈狀排列在衣鞘內(nèi)而成為絲狀.第32頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四細(xì)胞呈星形和方形的細(xì)菌

第33頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四支原體（Mycoplasma）由于只有細(xì)胞膜，沒有細(xì)胞壁，故細(xì)胞柔軟，形態(tài)多變，具有高度多形性。第34頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四第35頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四Donotproducecellwalls

Haveagramnegative-likemembranestructure第36頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四4）繁殖方式：無性繁殖：裂殖

第37頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四有性繁殖：細(xì)菌結(jié)合conjugation第38頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四2、放線菌1）菌絲形態(tài)：營養(yǎng)菌絲、氣生菌絲和孢子絲（鑒定指標(biāo)）第39頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四ChainofconidiosporesAgarsurfaceSubstratemyceliumAerialhyphae第40頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四孢子絲不同形態(tài)第41頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四3、古生菌

古生菌與細(xì)菌具有類似的個(gè)體形態(tài)，但它們多生活于一些生存條件十分惡劣的極端環(huán)境中，例如高溫、高鹽、高酸等。隱蔽熱網(wǎng)菌（Pyrodictiumoccultum）是迄今所發(fā)現(xiàn)的最耐熱的生物之一，它的最適生長溫度為105℃

第42頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四從熱泉中分離出的火山熱原體（Thermoplasmavolcanium）細(xì)胞電鏡照片熱原體（Thermoplasma）沒有細(xì)胞壁，其形態(tài)也象細(xì)菌中的支原體一樣呈多形性。第43頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四4、原核生物的細(xì)胞大小1）隨種類不同而變化2）影響細(xì)菌形態(tài)變化的因素

第44頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四二、真菌

1、特點(diǎn)：

種類繁多，形態(tài)各異、大小懸殊，細(xì)胞結(jié)構(gòu)多樣。2、霉菌（mold）

霉菌菌體均由分枝或不分枝的菌絲（hypha）構(gòu)成。許多菌絲交織在一起，稱為菌絲體（mycelium）。Filamentousfungi第45頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四1）無隔膜菌絲(nonseptatehypha)

整個(gè)菌絲為長管狀單細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有多個(gè)核。其生長過程只表現(xiàn)為菌絲的延長和細(xì)胞核的裂殖增多以及細(xì)胞質(zhì)的增加。如根霉、毛霉、犁頭霉等。第46頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四2）有隔膜菌絲(septatehypha)

菌絲由橫隔膜分隔成成串多細(xì)胞，每個(gè)細(xì)胞內(nèi)含有一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞核。第47頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四3）相關(guān)概念營養(yǎng)菌絲：在固體培養(yǎng)基上，部分菌絲伸入培養(yǎng)基內(nèi)吸收養(yǎng)料的菌絲。氣生菌絲：向空中生長的菌絲。繁殖菌絲：由氣生菌絲發(fā)育到一定階段，分化而成的。第48頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四4）繁殖方式無性生殖：菌絲斷裂、產(chǎn)生孢子

厚垣孢子第49頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四分節(jié)孢子

第50頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四分生孢子第51頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四有性生殖：準(zhǔn)性生殖第52頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四第53頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四3、酵母菌1）繁殖方式無性生殖：芽殖或裂殖

第54頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四有性繁殖：產(chǎn)生子囊孢子新型隱球酵母（Cryptococcusneoformans）第55頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四2）形態(tài)單細(xì)胞呈卵圓形、圓形、圓柱形或檸檬形第56頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四多細(xì)胞相連成為鏈狀：假絲酵母第57頁，共61頁，2023年，2月20日，星期四3）作用

a、有利面：在釀造、食品、醫(yī)藥、飼料方面應(yīng)用。

b、不利面：引起原料腐敗變質(zhì)：蜂蜜酵母（Saccharomycesmell