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文檔簡介

實(shí)驗(yàn)一

植物組織中總糖及還原糖的測定

—3,5-二硝基水楊酸比色法

學(xué)時：31、掌握還原糖和總糖測定的基本原理。2、掌握比色法測定還原糖的操作方法。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、還原糖：指含有游離的半縮醛(酮)基糖。單糖都是還原糖；某些二糖是還原糖（如麥芽糖、乳糖等）；多糖為非還原糖。2、總糖的提取及雙、多糖的酸水解。利用糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來，對沒有還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進(jìn)行測定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量（還原糖以葡萄糖含量計(jì)）。

二、實(shí)驗(yàn)原理:

3、在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)(3-氨基-5-硝基水楊酸)顏色的深淺成正比關(guān)系，利用分光光度計(jì)，在540nm波長下測定光密度值，查對標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，便可求出樣品中還原糖的含量。

由于多糖水解為單糖時，每斷裂一個糖苷鍵需加入一分子水，所以在計(jì)算多糖含量時應(yīng)乘以0.9。

1、實(shí)驗(yàn)材料：蘋果（約0.5g）2、儀器：水浴鍋；可見分光光度計(jì)等。3、試劑：（1）1mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（2）3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑(堿性)（3）6MHCl和6MNaOH

三、實(shí)驗(yàn)材料、儀器和試劑：

四、實(shí)驗(yàn)步驟：

1、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制2、還原糖的提取3、樣品含糖量的測定:2、還原糖的提取取0.5g樣品于研缽中，加水2-3ml，充分研磨。用2-3ml蒸餾水分三次沖洗研缽(總體積小于10ml)，轉(zhuǎn)入試管中。在50℃水浴中恒溫20分鐘，冷卻后于3000轉(zhuǎn)離心5分鐘。取上清轉(zhuǎn)入試管中，用蒸餾水定容20毫升，待測。3、樣品含糖量的測定:

取提取液1.0ml，按上表操作。還原糖含量(μg/g)=五、計(jì)算：

還原糖含量χ1(μg)×樣液總體積測定用樣品液體積×樣品鮮重(g)總糖含量(μg/g)=水解后還原糖含量

(μg)×樣液總體

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