實驗5肝功能檢測課件

技術(shù)5-肝功能檢測技術(shù)

肝功能檢測目錄 TableofContents5.酶學檢測

4.膽汁酸代謝功能檢測

3.膽紅素代謝功能檢測

2.蛋白質(zhì)代謝功能檢測1.概述

一.解剖學特點雙重血液供應腹主動脈的分技肝動脈氧

門靜脈

營養(yǎng)

雙重輸出管道肝靜脈

代謝降解物

下腔靜脈

膽道系統(tǒng)脂溶性物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物體外

概述1---肝臟結(jié)構(gòu)排泄功能物質(zhì)代謝功能生物轉(zhuǎn)化重要生化功能概述2---肝臟的生物化學功能A.排泄功能主要排泄對象：膽汁酸、膽紅素、氨1.膽汁酸代謝膽汁功能膽汁的來源：肝膽汁膽囊膽汁十二指腸膽汁的成分：水/膽汁酸（鹽）、卵磷脂、蛋白質(zhì)、脂肪酸和膽固醇概述2---肝臟的生物化學功能膽汁酸生成及種類：初級膽汁酸（肝細胞）次級膽汁酸（腸道）初級游離膽汁酸初級結(jié)合膽汁酸（甘氨酸/牛磺酸）次級游離膽汁酸次級結(jié)合膽汁酸（甘氨酸/?；撬幔└攀?---肝臟的生物化學功能2.膽紅素代謝膽色素

尿膽素原

糞膽素原尿膽素糞膽素膽綠素膽紅素膽素原概述2---肝臟的生物化學功能3、血氨代謝藥物及體內(nèi)含氮物質(zhì)（如嘌呤、嘧啶等）來源去路相對平衡概述2---肝臟的生物化學功能部位——肝臟細胞鳥氨酸瓜氨酸瓜氨酸精氨酸代琥珀酸ATPAMP+PPi延胡索酸鳥氨酸精氨酸H2O尿素天門冬氨酸NH3CO2氨甲酰磷酸+H2O尿素循環(huán)概述2---肝臟的生物化學功能C.肝臟的生物轉(zhuǎn)化定義：非營養(yǎng)物質(zhì)，如物質(zhì)代謝過程所產(chǎn)生的終產(chǎn)物、生物活性物質(zhì)（如激素），外界進入機體的各種異物（如藥物及其它化學物質(zhì)）、毒物或從腸道吸收的腐

敗產(chǎn)物等在肝臟經(jīng)代謝轉(zhuǎn)變，使極性弱的脂溶性物質(zhì)

變?yōu)闃O性強的水溶性物質(zhì)，使易于經(jīng)尿液或膽汁排出

體外，此過程稱為肝臟的生物轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化對象：藥物。毒物、致癌物轉(zhuǎn)化過程：氧化、還原、水解、結(jié)合生理意義

概述2---肝臟的生物化學功能D.肝臟疾病的生化改變1.膽紅素代謝障礙（黃疸）定義:高膽紅素血癥？

黃疸？黃疸分類:

阻塞性黃疸

溶血性黃疸肝細胞性黃疸概述3---肝臟疾病的生物化學功能改變概述3---肝臟疾病的生物化學功能改變3.血漿酶異常肝臟合成酶類:膽堿脂酶、凝血因子、銅藍蛋白；肝細胞內(nèi)酶:

ALT、AST

肝臟阻塞性疾病酶活性改變：ALP、GGT肝硬化疾病酶活性改變：單胺氧化酶（MAO）

4.血漿蛋白異常概述3---肝臟疾病的生物化學功能改變血清總蛋白、白蛋白測定血清總蛋白(totalproteinTP)包括清蛋白（albuminA）（半衰期：15－19）和球蛋白（globulinlbG）。清蛋白由肝臟合成；球蛋白主要由單核－吞噬細胞系統(tǒng)(B淋巴細胞、漿細胞)合成和分泌。合成減少可出現(xiàn)腹水、出血傾向等。血清總蛋白和清蛋白檢測是反映肝功能狀態(tài)的重要指標參考值：T:60-80g/LA：40-55g/LA/G:1.5-2.5/1

肝功能檢測-------蛋白質(zhì)代謝功能檢測血清總蛋白檢測原理（雙縮脲法）：凡具有二個或二個以上肽腱單位的化合物，與堿性酒石酸鉀鈉銅鹽作用，均能產(chǎn)生特異的紫色的銅一鉀雙縮脲化合物。雙縮脲反應所呈紫色的強度與各種血清蛋白質(zhì)分子量或氨基酸成分無關(guān)，紫色絡(luò)合物的生成，引起在波長540-560nm范圍內(nèi)吸光度的上升，吸光度的變化與總蛋白含量成正比，且可用于自動化檢測。

肝功能檢測-------蛋白質(zhì)代謝功能檢測操作步驟：

分析類型：終點法

波長：540-560nm溫度：37℃

孵育時間10分鐘S：100ulR：5000ul注：R（雙縮脲試劑）：酒石酸鉀鈉、硫酸銅、碘化鉀、NaOHS(標準液)：白蛋白50g/L

肝功能檢測-------蛋白質(zhì)代謝功能檢測臨床意義：TP含量升高見于各種原因失水，在其它情況下，高值通常反映一種或多種球蛋白組分的增加；總蛋白含量下降與白蛋白濃度下降有關(guān)。肝功能檢測-------蛋白質(zhì)代謝功能檢測血清白蛋白檢測原理（溴甲酚綠法）：在PH4.2的緩沖液中，白蛋白分子帶正電荷，與帶負電荷的溴甲酚綠(BCG)生成藍綠色復合物，在波長630nm有吸收峰。復合物的吸光度與白蛋白濃度成正比，與同樣處理的白蛋白標準比較，可求得血清中白蛋白的濃度。白蛋白+溴甲酚綠（BCG）肝功能檢測-------蛋白質(zhì)代謝功能檢測PH4.2Brij-35白蛋白溴甲酚綠復合物操作步驟：

分析類型：終點法

波長：630nm溫度：37℃

孵育時間60秒S：10ulR：2000ul注：樣品與試劑量可按生化分析儀要求衡比例改變

肝功能檢測-------蛋白質(zhì)代謝功能檢測臨床意義：

低水平ABL含量與肝臟疾病、腎病綜合征、營養(yǎng)不良以及蛋白丟失有關(guān)，高水平白蛋白與失水有關(guān)。肝功能檢測-------蛋白質(zhì)代謝功能檢測操作步驟：

分析類型：終點法

波長：

450nm（主）、546nm（副）

溫度：37℃

孵育時間60秒

S：100ul

R1：2800ulR2:700ul注：R1：枸櫞酸鹽緩沖液（PH2.9）、表面活性劑R2：磷酸鹽緩沖液（PH7.0）、偏釩酸鹽

肝功能檢測-------膽紅素代謝功能檢測孵育時間5min臨床意義：DBIL含量的升高與膽管阻塞以及肝細胞疾病有關(guān)肝功能檢測-------膽紅素代謝功能檢測總膽汁酸（TBA）的測定原理（循環(huán)酶法）：膽汁酸+Thio-NAD3α-酮類固醇+Thio-NAD3α-酮類固醇+NADH膽汁酸+NAD血清中微量的膽汁酸在多次酶循環(huán)過程中被放大，同時可使生成的Thio-NADH擴增。在405nm處測定Thio-NADH吸光度變化值，即得血清中膽汁酸的含量。肝功能檢測-------膽汁酸代謝功能檢測3α-HSD3α-HSD試劑與器材：

標本：待檢人血清

試劑：上?？迫A總膽汁酸（TBA）測定試劑盒

器材:全自動生化分析儀，4℃冰箱、溫育箱，移液頭，離心機等肝功能檢測-------膽汁酸代謝功能檢測操作步驟：

分析類型：兩點速率法

溫度：37℃S（標準液）：膽汁酸50umol/L

S：4ulR2：90ulR1:270UL注：R1：Thio-NADN(β-硫煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型),Goods緩沖液R2：NADH，3α-HSD(3α-羥類固醇脫氫酶),Goods緩沖液，疊氮鈉

肝功能檢測-------膽汁酸代謝功能檢測孵育時間延遲時間讀數(shù)時間5分鐘30-60秒2-3分鐘波長：405nm（主）600nm（副）臨床意義：

血清總膽汁酸的測定可為檢測肝膽系統(tǒng)是否正常提供一個靈敏的指標。血清總膽汁酸升高見于急、慢性肝炎，肝硬化，原發(fā)性肝癌，膽汁郁積，酒精肝、中毒性肝膽疾病及一些胃腸疾病。肝功能檢測-------膽汁酸代謝功能檢測天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）的測定原理（速率法):在AST速率法測定中，酶偶聯(lián)反應式為：

L-門冬氨酸+α-酮戊二酸

草酰乙酸+L-谷氨酸

草酰乙酸+NADN+H+L-蘋果酸+NAD++H2ONADH的減少，引起在波長340nm處吸光度的下降，下降速率與AST活力成正比。

肝功能檢測-------酶代謝功能檢測ASTAST試劑與器材：

標本：待檢人血清

試劑：上?？迫A天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）測定試劑盒

器材:全自動生化分析儀，4℃冰箱、溫育箱，移液頭，離心機等肝功能檢測-------酶代謝功能檢測操作步驟：

分析類型：速率法

波長：340nm溫度：37℃理論K值：4180

毫摩爾消光系數(shù)：6.22（NADH，340nm）

注：R1：NADH,LDH,MDHR2:L-門冬氨酸，α-酮戊二酸肝功能檢測-------酶代謝功能檢測預孵育時間延遲時間讀數(shù)時間5分鐘1分鐘1-2分鐘S：60ulR1:1000ulR2:500ul臨床意義：AST（EC2.6.1.1）活力升高與心肌梗死有關(guān)，疼痛4-6小時后明顯升高，24-30小時后達到高峰。高水平酶活力也見于肝細胞損傷，肌營養(yǎng)不良以及皮膚炎。肝功能檢測-------酶代謝功能檢測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）的測定原理（速率法):在AST速率法測定中，酶偶聯(lián)反應式為：

L-丙氨酸+α-酮戊二酸

丙氨酸+L-谷氨酸

丙氨酸+NADN+H+L-乳酸+NAD++H2ONADH的減少，引起在波長340nm處吸光度的下降，下降速率與ALT活力成正比。

肝功能檢測-------酶代謝功能檢測ALTLDH試劑與器材：

標本：待檢人血清

試劑：上?？迫A丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）測定試劑盒

器材:全自動生化分析儀，4℃冰箱、溫育箱，移液頭，離心機等肝功能檢測-------酶代謝功能檢測操作步驟：

分析類型：速率法

波長：340nm溫度：37℃理論K值：4180

毫摩爾消光系數(shù)：6.22（NADH，340nm）