實(shí)驗(yàn)三霉菌、放線菌及土壤中微生物的分離純化課件

實(shí)驗(yàn)三放線菌、霉菌的形態(tài)觀察

及微生物的分離純化

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察放線菌、霉菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征學(xué)習(xí)掌握霉菌染色的基本方法

基本掌握細(xì)菌、放線菌、酵母菌、霉菌菌落形態(tài)特征實(shí)驗(yàn)（一）放線菌、霉菌的形態(tài)觀察二、實(shí)驗(yàn)原理

1、放線菌：放線菌是介于細(xì)菌與絲狀真菌之間而又接近于細(xì)菌的一類絲狀原核生物，因菌落呈放射狀而得名。放線菌的菌落在培養(yǎng)基上著生牢固，不易被接種針挑取，由于孢子的存在，常使菌落表面呈粉末狀。它和細(xì)菌單染色一樣，可用石炭酸復(fù)紅和呂氏美藍(lán)等染料著色后，在顯微鏡下觀察它們的形態(tài)。放線菌是由不同長短的纖細(xì)的菌絲所組成的單細(xì)胞菌絲體，菌絲內(nèi)無隔膜，菌絲體分為兩部分，即潛入培養(yǎng)基中的營養(yǎng)菌絲（基內(nèi)菌絲）和有營養(yǎng)菌絲向上生長的氣生菌絲，有些氣生菌絲分化成各種孢子絲，呈螺旋狀、波浪形或分枝狀等，著生形式有叢生、互生和輪生三種。孢子的表面光滑或粗糙，圓或橢圓和干形。孢子有各種顏色。這些形態(tài)特點(diǎn)都是鑒別放線菌的重要依據(jù)。2、霉菌：

霉菌是一些“絲狀真菌”的統(tǒng)稱，不是分類學(xué)上的名詞。凡是在基質(zhì)上長成毛狀、棉絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀的絲狀真菌統(tǒng)稱霉菌。霉菌形態(tài)比細(xì)菌、放線菌復(fù)雜，個體比較大，具有分枝的菌絲體和分化的繁殖器官。因此，在觀察是要注意菌絲的直徑大小，菌絲體有無隔膜，營養(yǎng)菌絲有無假根，無性繁殖或有性繁殖時形成的孢子是哪一種，孢子是怎樣著生的。由于霉菌的菌絲較粗大，而且孢子容易飛散，如將菌體置于水中容易變形，故觀察時狀不用水浸法制片，而將菌體置于乳酸石炭酸棉蘭染液中，使細(xì)胞不易干燥，并有殺菌作用。

根霉三、實(shí)驗(yàn)材料放線菌和真菌培養(yǎng)物

1.放線菌培養(yǎng)物：鏈霉菌四天插片培養(yǎng)物。2.黑曲霉培養(yǎng)物。

3.各種真菌示范片。顯微鏡、載玻片、接種環(huán)、解剖針、解剖刀、酒精燈、鑷子等。乳酸石炭酸棉蘭染液、碘液、酒精、蒸餾水等四、實(shí)驗(yàn)步驟觀察放線菌氣生菌絲和基內(nèi)菌絲的區(qū)別

取插片一片，直接在顯微鏡下進(jìn)行觀察，注意分界面兩側(cè)菌絲形態(tài)的差異插片法培養(yǎng)放線菌觀察黑曲霉菌絲分隔情況和分生孢子著生情況（著重辨認(rèn)分生孢子梗、足細(xì)胞和分生孢子）：觀察根霉菌絲情況和子囊孢子情況（著重辨認(rèn)孢子囊、包囊梗、假根）：五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄所觀察到的放線菌基內(nèi)菌絲和氣生菌絲的差別繪制青霉（40x）、黑曲霉（40x）的形態(tài)，注明各部分名稱。1.為何要用乳酸石炭酸棉蘭染液對霉菌進(jìn)行染色?

從土壤中稀釋分離微生物的方法如下：（一）土壤懸液制備準(zhǔn)備1瓶土壤懸液：稱10克土壤放入帶玻璃珠的90ml瓶裝無菌水中，手搖振蕩(10-20min)，使土樣分散。三、實(shí)驗(yàn)步驟：（二）懸液稀釋：方法見下圖：（三）倒固體瓊脂培養(yǎng)基平板：分離細(xì)菌的同學(xué)取一瓶牛肉膏培養(yǎng)基（200ml／瓶）熔化后加制霉菌素1ml后倒平板。分離真菌的同學(xué)取一瓶馬丁-孟加拉紅培養(yǎng)基（200ml／瓶）熔化后冷至50℃后加鏈霉素2ml倒平板。平板涂布簡單易行，但易造成機(jī)械損傷劃線分離方式結(jié)果分析:1.我所涂平板種類：

（牛肉膏或馬丁氏）

2.計(jì)數(shù)：牛肉膏平板取單菌落數(shù)目在30～300個左右的稀釋度來計(jì)數(shù)，馬丁氏平板取單菌落數(shù)目在10～100個左右的稀釋度來計(jì)數(shù)

3.我所計(jì)數(shù)的平板稀釋度是：

單菌落數(shù)目：

、

、

。

4.計(jì)算：活菌數(shù)目/每克土壤＝

（計(jì)算過程）＝

個/每