消毒滅菌技術(shù)

醫(yī)藥高等職業(yè)學(xué)校教 案

授課班級(jí) 授課地點(diǎn)授課時(shí)數(shù)學(xué)習(xí)工程1 滅菌消毒方法及設(shè)備生疏

實(shí)訓(xùn)室4學(xué)問目標(biāo)1．把握消毒、滅菌、無菌操作和防腐的概念。2．生疏常用物理和化學(xué)消毒滅菌法的原理、方法和指標(biāo)。教學(xué)目標(biāo) 3．了解影響消毒滅菌效果的有關(guān)因素。技能目標(biāo)：1.把握消毒、滅菌、防腐及無菌操作過程的方法和步驟。2.把握消毒與滅菌中所用儀器設(shè)備的操作技術(shù)。重點(diǎn)：1.消毒、滅菌、無菌操作和防腐常用方法。2.消毒、滅菌、防腐操作所用設(shè)備構(gòu)造及操作方法。重點(diǎn)和難點(diǎn)

難點(diǎn)：1.濕熱與干熱滅菌效果的比較。2.消毒、滅菌設(shè)備的構(gòu)造及滅菌原理教學(xué)方法 提問啟發(fā)式、多媒體課件、演示法、分組爭論教學(xué)儀器、設(shè)備多媒體、手提式高壓蒸汽滅菌鍋、鼓風(fēng)枯燥箱等設(shè)備【1】周德慶著：微生物學(xué)教程，高等教育出版社，1999。參考資料 【2】李榆梅主編：微生物學(xué)，中國醫(yī)藥科技出版社，1999?！?】李榆梅主編：藥學(xué)微生物有用技術(shù)，中國醫(yī)藥科技出版社，2023。作業(yè) 目標(biāo)測(cè)試題課后體會(huì) 學(xué)生對(duì)滅菌設(shè)備很感興趣，樂觀操作但對(duì)于滅菌方法的推斷還需學(xué)習(xí)。授課主要內(nèi)容或板書設(shè)計(jì)【引入】

學(xué)習(xí)工程1 消毒滅菌方法及設(shè)備的生疏設(shè)問以提高學(xué)生的興趣本章需要把握的根本技能是把握把握微生物生長的消毒、防腐與滅菌方法及所用設(shè)備。首先解決以下幾個(gè)問題：消毒、滅菌、防腐、化療、無菌、無菌技術(shù)等根本概念的含義是什么？物理消毒滅菌的常用方法及設(shè)備有那些？化學(xué)消毒、滅菌、防腐的常用方法有那些？要想到達(dá)好的把握微生物生長生殖的效果應(yīng)考慮那些影響因素？一、消毒、滅菌、防腐、無菌、無菌技術(shù)等根本概念的含義是什么？消毒：指殺死病原微生物，但不包括芽胞。滅菌：是指殺滅物體上全部微生物，包括生殖體和芽胞。防腐：是指防止或抑制微生物生長生殖。消毒劑：高濃度防腐劑：低濃度無菌：物品中沒有活的微生物存在。無菌操作所用的器具和材料，都必需先經(jīng)滅菌處理。二、物理消毒滅菌的常用方法有那些？熱力滅菌法：高溫、低溫、枯燥輻射殺菌法：電離、非電離物理方法 濾過除菌法超聲波殺菌法等離子體滲透壓〔一〕、熱力滅菌法分類：干熱滅菌法濕熱滅菌法干熱滅菌法A燃燒與燒灼：滅菌

重點(diǎn)生疏有關(guān)設(shè)備及操作方法。燃燒其作用范圍為污染紙張、垃圾等廢棄物及動(dòng)物尸體等；灼燒一般用于可直接加熱的儀器、器皿的滅菌，例如接種環(huán)、手術(shù)刀、鑷子等金屬器械及試管、三角瓶、小燒杯等。留意事項(xiàng)如下。灼燒時(shí)要用酒精等外焰加熱。灼燒接種環(huán)時(shí)，要不停捻動(dòng)接種環(huán)的棒部，以便受熱均勻，先燒環(huán)部，燒紅、燒透，再燒柄部。灼燒試管、三角瓶、小燒杯等玻璃器皿時(shí)，要用灼燒過的鑷子夾住儀器口壁，然后使器皿口朝上傾45o〔留意儀器內(nèi)不能有水存留管口、瓶口。紙片等易燃物品用灼燒法滅菌時(shí)，用無菌鑷子夾住紙片，快速在酒精燈外焰移動(dòng)，以殺死微生物〔留意紙的兩側(cè)應(yīng)均勻灼烤，切忌烤糊。B、干烤：滅菌160°～180℃，2h；利用熱輻射及干熱空氣進(jìn)展滅菌，常用儀器是恒溫枯燥箱和干熱滅菌箱。使用恒溫枯燥箱的留意事項(xiàng)對(duì)玻璃器皿、瓷器、金屬等耐熱物品滅菌時(shí)，首先要洗干凈、控干水，不能沾有油脂等有機(jī)物。按要求包扎好后，放人恒溫枯燥箱內(nèi)，排列不行過密、不行緊靠枯燥箱壁，且忌用油紙160～170℃2h170℃。一般狀況下對(duì)注射器、安瓿等滅菌時(shí)，180℃45minl80℃2h250℃45min除去熱原質(zhì)。對(duì)紙張、棉花等物品及凡士林、局部粉劑等藥品滅菌可用140℃，持續(xù)3h。，不行緊靠枯燥箱壁，以防著火。60℃左右再開啟箱門，以免高溫度的玻璃因驟冷而裂開?？菰锵鋬?nèi)有焦糊味應(yīng)馬上關(guān)閉電源，報(bào)告教師。取出滅菌物品時(shí)，留神不要碰破電熱枯燥箱頂部放置的溫度計(jì)。水銀溫度計(jì)打破后，馬上報(bào)告教師，確定準(zhǔn)時(shí)處理，防止水銀蒸發(fā)中毒?？上扔昧蚧卿伻鲈谖廴镜牡孛婧蛢x器上，然后用吸管去除水銀。C、紅外線滅菌：濕熱滅菌法A巴氏消毒法：61.1-62.8℃，30min；71.7℃，15-30secB煮沸消毒法：100℃，5min-10minC流通蒸氣消毒法：100℃，15-30minD間歇蒸汽滅菌法：100℃，15-30min，37℃過夜〔3〕E高壓蒸氣滅菌法:高壓蒸汽滅菌法是徹底而快速的滅菌法。

演示法適用范圍：①耐高溫存潮濕的物品，如培育基、衣物、敷料、玻璃器材、傳染性污染物等；②接種及培育后的培育基，經(jīng)高壓蒸汽滅菌后，再棄去，然后洗滌相應(yīng)容器。高壓蒸汽滅菌法需要的設(shè)備為：高壓蒸汽滅菌器。高壓蒸汽滅菌器的工作原理：常壓下，水的沸點(diǎn)是l00℃，隨著容器里的壓力上升，水的沸點(diǎn)也將上升，因此可以提高蒸汽的溫度，人為使容器內(nèi)的壓力持續(xù)確定的時(shí)間，可到達(dá)徹底滅菌的目的。使用高壓蒸汽滅菌器要按要求操作，特別留意安全事項(xiàng)。1.使用高壓蒸汽滅菌器留意事項(xiàng)加水使用高壓蒸汽滅菌器應(yīng)留意儀器內(nèi)水量充分，加水到達(dá)標(biāo)識(shí)線。加料把滅菌物品疏松排列在高壓蒸汽滅菌器內(nèi)，保證空氣暢通。被滅菌的容器外表必需干凈且不污染有機(jī)物質(zhì)，并用確定方法包扎，防止脫落。盛裝液體制劑的容器要耐高溫、高壓，并且保證器皿蓋上有通氣孔，使容器內(nèi)外相通，如：滅菌生理鹽水時(shí)，在瓶蓋上插一注射器針頭可達(dá)容器內(nèi)外氣體相通的目的，保證容器不會(huì)因高壓而損壞。加蓋蓋好滅菌器蓋，擰緊加壓裝置，檢查放氣閥和安全閥，全自動(dòng)儀器要設(shè)置好壓力、溫度、時(shí)間。，關(guān)上放氣閥〔全自動(dòng)裝置可無視此環(huán)節(jié)。滅菌試驗(yàn)室中常用的方法是：I21.3℃，持續(xù)20min，可到達(dá)較好的滅菌效果。不l21℃116℃，40min126.5℃，15min開蓋取物高壓蒸汽滅菌完畢時(shí)不要急于翻開鍋的壓力閥〔壓力表將為零時(shí)〕再翻開壓力閥，以免鍋內(nèi)液體噴濺傷人及滅菌器皿裂開。防止高壓鍋超過耐壓范圍時(shí)爆炸傷人。思考：濕熱比干熱滅菌好的緣由：細(xì)菌蛋白質(zhì)在有水的狀況下易于凝固變性濕熱穿透力強(qiáng)〔3〕濕熱蒸氣有潛熱存在，水蒸氣凝固成水釋放潛熱，快速提高被滅菌物體的溫度〔二〕、光線與射線的消毒作用日光與紫外線機(jī)理：損壞DNA特點(diǎn)：穿透力弱電離輻射：包括X射線和γ射線

讓學(xué)生進(jìn)入生物培育室，介紹凈化臺(tái)和無菌室的滅菌機(jī)制：干擾DNA的合成；破壞細(xì)胞膜；產(chǎn)生過氧化氫等特點(diǎn)：穿透力強(qiáng)，不上升溫度〔三〕、濾過除菌法用濾菌器除去液體及空氣中的細(xì)菌用于不耐熱的血清、毒素、抗生素〔四〕、超聲波的消毒作用可裂解細(xì)菌，尤其對(duì)G+更敏感主要用于粉碎細(xì)胞，提取細(xì)胞組分或制備抗原等〔五〕等離子體法對(duì)微生物有良好的殺滅作用。但不適用于紡織品和液體。三、化學(xué)消毒滅菌的常用方法有那些？消毒劑防腐劑化學(xué)方法 化學(xué)治療劑〔一〕化學(xué)消毒滅菌的機(jī)制①使菌體蛋白質(zhì)變性或凝固②破壞或轉(zhuǎn)變蛋白質(zhì)與核酸功能基團(tuán)③轉(zhuǎn)變細(xì)胞壁的通透性〔二〕常用消毒劑的主要種類、濃度及用途酚類：作用：菌體蛋白凝固；損傷細(xì)胞膜；

，組間相互提問滅活酶類 濃度：石炭酸為3%-5%、來蘇兒為2%用途：地面、器具外表和皮膚的消毒醇類：作用機(jī)制：使菌體蛋白變性與凝固；干擾細(xì)菌代謝濃度：乙醇70%-75% 用途：用于皮膚的消毒和體溫計(jì)等的浸泡重金屬鹽類：使細(xì)菌發(fā)生變性和沉淀；酶活性喪失〔1〕2%紅汞：皮膚、粘膜和小創(chuàng)傷〔2〕0.05-0.01%升汞：非金屬器皿氧化劑：氧化作用；使蛋白質(zhì)變性〔1〕0.1%高錳酸鉀：皮膚、尿道、水果〔2〕3%過氧化氫：創(chuàng)傷、皮膚粘膜〔3〕2%-2.5%碘酒：皮膚消毒〔4〕0.2ppm-0.5ppm〔5〕10%-20%漂白粉：地面、廁所等外表活性劑：損傷細(xì)胞膜；滅活氧化酶等酶的活性；蛋白質(zhì)沉淀〔1〕0.05%-0.1%潔爾滅：皮膚粘膜、手術(shù)器械〔2〕0.05%-0.1%杜滅芬：傷口沖洗，金屬器械、塑料、橡皮類烷化劑：使菌體蛋白和核酸的烷基化〔1〕10%甲醛：物品外表、空氣〔2〕2%戊二醛：周密儀器、內(nèi)窺鏡等 缺點(diǎn)：有確定的毒性〔三〕日常消毒劑的應(yīng)用20%漂白粉、522皮膚：2.5%碘酒、70%酒精、2%紅汞粘膜：1%硝酸銀、3%過氧化氫、0.1%高錳酸鉀等飲水:氯氣、漂白粉廁所：生石灰空氣：甲醛熏蒸手：2%來蘇兒、2%碘酊、70%酒精〔四〕常用防腐劑1.概念：可抑制霉腐微生物的生長生殖，防止食品等發(fā)生霉變的措施，此時(shí)，微生物并沒有被殺滅，而只是受到抑制。而添加防腐劑也是一種常用的防腐措施。被殺滅，而只是受到抑制。而添加防腐劑也是一種常用的防腐措施。2.常見防腐劑：乳酸鏈球菌肽，又稱乳酸鏈球菌素，苯甲酸和苯甲酸鈉；硝酸鹽和亞硝酸鹽等。四、影響消毒滅菌的因素a.消毒劑的性質(zhì)、濃度與作用時(shí)間b.微生物的種類與數(shù)量c.溫度d.酸堿度分組教學(xué)法，體驗(yàn)合作的重要性。e.有機(jī)物五、分組爭論推斷以下物品承受何種消毒滅菌方法較為適宜？這些消毒滅菌方法分別需要什么設(shè)備或試劑？如何操作?接種環(huán)、牛奶、酶制劑、試驗(yàn)服、無菌室、培育皿、飲水、皮膚、一般培育基醫(yī)藥高等職業(yè)學(xué)校教 案教師姓名教師姓名授課班級(jí)授課地點(diǎn)授課日期授課時(shí)數(shù)室2學(xué)習(xí)工程微生物試驗(yàn)器具的根本清洗包扎技術(shù)技能目標(biāo)1．能安全配制出符合要求的洗滌劑并正確使用教學(xué)目標(biāo)2．能嫻熟、快速地包扎好各種玻璃器皿重點(diǎn)：具體的操作及留意事項(xiàng)重點(diǎn)和難點(diǎn)難點(diǎn)：包扎的正確操作教學(xué)方法演示法、分組爭論和分組實(shí)訓(xùn)法教學(xué)儀器、設(shè)備移液管、培育皿等儀器參考資料微生物實(shí)訓(xùn)手冊(cè)作業(yè)實(shí)訓(xùn)報(bào)告課后體會(huì)對(duì)于玻璃儀器的包扎需要反復(fù)練習(xí)，個(gè)別同學(xué)承受力氣欠缺，需要加強(qiáng)聯(lián)系。授課主要內(nèi)容或板書設(shè)計(jì)學(xué)習(xí)工程2 微生物試驗(yàn)器具的根本清洗包扎技術(shù)那么如何進(jìn)展清洗包扎就是本次學(xué)習(xí)的主要任務(wù)。一、常用洗滌液及其配制方法〔一〕配制洗滌劑的常用試劑重鉻酸鉀(工業(yè)用)、濃硫酸、氫氧化鈉溶液(0.1mol/L)、碳酸鈉水溶液〔蘇打水)、氨水、〔9％(0.(0.1mol/L鹽酸溶液(10％，0.1mol/L)。1．鉻酸洗滌液的配制與使用〔1〕配方

留意安全濃配方：重鉻酸鉀(工業(yè)用)40g稀配方：重鉻酸鉀(工業(yè)用)50g濃硫酸(粗)500mL濃硫酸(粗)lOOmL自來水160mL自來水850mL〔2〕配制與使用方法將重鉻酸鉀溶解在自來水中，漸漸參與濃硫酸，邊加邊攪拌，配好后，貯存于廣口的玻璃瓶內(nèi)，蓋緊塞子備用。應(yīng)用此液時(shí)，器皿必需枯燥，同時(shí)切忌把大量復(fù)原物質(zhì)帶入，這樣就可應(yīng)用屢次，直到溶液呈青褐色為止。在使用時(shí)，為增加去污作用，稀的鉻酸洗滌液可以煮沸使用。2．酸和堿的配制及使用405～10min，有時(shí)需數(shù)小時(shí)。3．肥皂和其他洗滌劑的使用肥皂水是很好的去污劑，加熱后去污力更強(qiáng)。油脂太多的器皿，先用吸水紙將油擦去后，再l0干凈。二、玻璃器皿的預(yù)備與清洗購置的器皿對(duì)于購置的玻璃器皿最好的清洗方法是用l0在肥皂水中l(wèi)h，再用清水洗凈。一般器皿 演示法一般器皿如試管、燒杯、培育皿等，假設(shè)沾有有害微生物，先用高壓滅菌鍋滅菌或用漂白粉溶液消毒后，再用水洗。用肥皂水洗時(shí)，可以加熱煮沸，洗過之后用清水沖洗幾次，最終用少量蒸餾水洗一次，器皿枯燥后就會(huì)更加干凈、光亮。10min，滴定管、吸管和移液管則要1～2h。洗液處理后的玻璃器皿，要用水充分沖洗，將洗液完全洗去，最終用少量蒸餾水再洗一次。載玻片與蓋玻片5水洗后在鉻酸洗滌液中浸數(shù)小時(shí)后再用水洗幾次。假設(shè)載玻片和蓋玻片上沾有油脂等物質(zhì)，可先用肥皂水煮過后再洗。95干或?qū)⒕凭珶?。滴定管、吸管和移液管帶菌的滴定管、吸管和移液管等，?yīng)馬上投入5％苯酚溶液中過夜，先進(jìn)展滅菌。然后用自來水沖洗，再用蒸餾水沖凈。不帶菌的可直接清洗。特別清潔法周密的試驗(yàn)，只將玻璃外表附著物洗去還不夠，玻璃中的可溶性雜質(zhì)也影響試驗(yàn)驗(yàn)結(jié)果。這0.1mol/L0.lmol/L1h，洗過后再在0.1mol/L0.1mol/L1h。然后再用蒸餾水洗幾次，再在蒸餾水中浸幾小時(shí)后枯燥。三、玻璃器皿的枯燥溫度一般在80～100℃為宜。壓縮空氣吹干比較快，但壓縮空氣不太干凈，需要很干凈的器皿時(shí)不宜用。假設(shè)需快速枯燥，可將洗凈的玻璃器皿先用少許無水酒精潤濕，倒去后再加少許乙醚，任其枯燥。四、玻璃器皿的包扎洗凈的玻璃器皿，有些還需在電烤箱中進(jìn)展枯燥，滅菌前需要包扎。1.培育皿培育皿可單獨(dú)用紙包裝，也可幾套培育皿一起用紙包裝。培育皿可單獨(dú)用