腫瘤個(gè)體化分子病理檢測(cè)和臨床應(yīng)用

腫瘤個(gè)體化分子病理檢測(cè)和臨床應(yīng)用第1頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二腫瘤個(gè)體化分子病理檢測(cè)及臨床應(yīng)用一、開展腫瘤個(gè)體化分子病理檢測(cè)的意義二、分子病理檢測(cè)的標(biāo)本選擇三、分子病理檢測(cè)的方法四、分子病理檢測(cè)的項(xiàng)目第2頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二一.開展腫瘤個(gè)體化分子檢測(cè)的意義--個(gè)體化分子診斷是個(gè)體化治療的基石。--靶向治療是為攻擊特異性靶分子而設(shè)計(jì)，所以用藥前，必需檢測(cè)患者是否存在對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)，才能發(fā)揮其療效。第3頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二衛(wèi)生部原發(fā)性肺癌診療規(guī)范(2011)-------IV期肺癌在開始治療前，建議先獲取腫瘤組織進(jìn)行表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)是否突變的檢測(cè)，根據(jù)EGFR突變狀況制定相應(yīng)的治療策略。第4頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二中國(guó)腫瘤界正在致力于推動(dòng)腫瘤個(gè)體化分子病理診斷的規(guī)范化，同時(shí)也希望臨床能夠與病理科緊密配合，共同實(shí)現(xiàn)規(guī)范化診斷、規(guī)范化治療的目標(biāo)，以造?；颊?。第5頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二外科手術(shù)標(biāo)本(石蠟切片）

10umX2

切片活檢標(biāo)本（石蠟切片）

10umX4

切片穿刺標(biāo)本（新鮮組織）至少芝麻粒大小胸腹水標(biāo)本不少于10mL。二.分子病理檢測(cè)的標(biāo)本選擇第6頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二--盡量避開腫瘤間質(zhì)、出血灶、壞死物質(zhì)等--腫瘤細(xì)胞所占的比例也是必須要考慮的因素。--目前尚不清楚滿足分子學(xué)檢測(cè)需要的最低限度腫瘤細(xì)胞的數(shù)量。第7頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二--獲得質(zhì)、量俱佳的腫瘤標(biāo)本是EGFR檢測(cè)的重要前提條件，涉及到從臨床標(biāo)本采集到完成最終檢測(cè)實(shí)驗(yàn)等多個(gè)環(huán)節(jié)。--離體后及時(shí)（30分鐘內(nèi)）固定于10%中性緩沖福爾馬林液中。--固定時(shí)間：小標(biāo)本6-12h，大標(biāo)本6-48h。第8頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二腫瘤組織標(biāo)本病理學(xué)評(píng)估組織切片非小細(xì)胞性肺癌診斷及病理類型足夠的腫瘤細(xì)胞比例：測(cè)序法，至少50%腫瘤細(xì)胞；ARMS法，至少2%的腫瘤細(xì)胞(不考慮遺傳異質(zhì)性)足夠多的腫瘤細(xì)胞總數(shù)：>200個(gè)腫瘤細(xì)胞標(biāo)識(shí)腫瘤豐富的區(qū)域富集腫瘤細(xì)胞取一張切片H&E染色用于病理評(píng)估其余白片用于提取DNA建議切片數(shù)量：

—手術(shù)標(biāo)本，5μm×5

—小活檢標(biāo)本，5μm×10固定包埋組織手術(shù)標(biāo)本：可得足量腫瘤DNA，但DNA片段化小活檢標(biāo)本：可得腫瘤DNA量少且片段化新鮮/冰凍組織手術(shù)標(biāo)本：最好標(biāo)本，可得高質(zhì)量腫瘤DNA小活檢標(biāo)本：量少，但腫瘤DNA質(zhì)量仍好腫瘤組織樣本的采集及病理評(píng)估PirkerR,etal.JThoracOncol2010;5(10):1706-1713.第9頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二1.Dataonfile.2.KimuraH,etal.BritishJournalofCancer2006;95(10):1390-1395.3.ZhangX,etal.LungCancer2008;60(2):175-182.4.SohJ,etal.IntJCancer2006;119(10):2353-2358.胸水標(biāo)本處理流程收集胸水50-500ml室溫1000轉(zhuǎn)離心10分鐘，吸去上清沉淀物-80℃保存沉淀物均勻涂玻片室溫晾干涂片涂片區(qū)域滴加75%酒精室溫晾干涂片常溫運(yùn)輸涂片沉淀物用棉絮紙包裹0.1%水性伊紅漂染1秒10%中性福爾馬林固定24-48小時(shí)后續(xù)處理與組織標(biāo)本相同低溫保存酒精固定涂片福爾馬林固定切片第10頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二三.分子病理檢測(cè)的方法基因試劑盒價(jià)格適中、靈敏度，特異性高、所需時(shí)間短。PCR通用設(shè)備平臺(tái)基因芯片特定設(shè)備，價(jià)格高測(cè)序法檢測(cè)

PCR通用設(shè)備平臺(tái)，靈敏度，特異性低、所需時(shí)間長(zhǎng)。價(jià)格便宜第11頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

（一）技術(shù)簡(jiǎn)介腫瘤個(gè)體化治療是指實(shí)施治療前根據(jù)患者的個(gè)體差異（基因差異），“量體裁衣”（基因檢測(cè)）地制定某個(gè)患者的治療方案，即檢查某種靶向藥物對(duì)患者是否有效或是在多種化療藥物中篩選最有效的藥物?；焸€(gè)體化可顯著提高治療效果，有效緩解疾病，避免藥物的毒副作用，提高患者的生活質(zhì)量，避免因反復(fù)嘗試不同藥物帶來(lái)的身體損害、錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)間以及浪費(fèi)金錢。使用靶向藥物前必須基因檢測(cè)，從而判斷該藥是否適用該患者。

第12頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二熒光定量PCR與基因測(cè)序法檢測(cè)基因突變的比較

第13頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二熒光定量PCR與基因測(cè)序法檢測(cè)基因突變的比較

熒光定量PCR檢測(cè)

DNA測(cè)序法技術(shù)原理特異雙環(huán)引物探針Sanger雙脫氧鏈終止法靈敏度、特異性可準(zhǔn)確檢測(cè)出含量<1%的突變DNA，特異性高突變DNA含量低于20%易產(chǎn)生誤差成功率成功率高達(dá)100%對(duì)石蠟樣本檢測(cè)成功率為70-75%擴(kuò)增片段長(zhǎng)度～100bp≧200bp所需時(shí)間模板完成后僅需要90分鐘至少1個(gè)工作日結(jié)果判讀簡(jiǎn)單，只需觀察擴(kuò)增曲線即可需要通過(guò)DNA序列分析軟件第14頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二基因檢測(cè)過(guò)程示意圖第15頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二標(biāo)本采集與運(yùn)輸要求檢驗(yàn)標(biāo)本標(biāo)本采集與保存標(biāo)本運(yùn)輸全血5ml,EDTA抗凝管（紫蓋），充分混勻，保存低溫運(yùn)輸，24小時(shí)送達(dá)

血漿新鮮全血5ml,EDTA抗凝管（紫蓋），室溫直立靜置30分鐘，8000rpm離心5分鐘，取上清于無(wú)菌EP管中，凍存低溫運(yùn)輸，24小時(shí)送達(dá)石蠟包埋組織蠟塊或5-10張白片，厚度在5-10um;加同一蠟塊HE染色片1張常溫運(yùn)輸（20）新鮮組織組織切除后用生理鹽水沖洗，無(wú)菌管中凍存低溫運(yùn)輸，24小時(shí)送達(dá)新鮮組織組織切除后用生理鹽水沖洗，放入福爾馬林固定保存常溫運(yùn)輸（20）體液腦脊液3-5ml,無(wú)菌管保存；胸腹水10ml,注入含106mmol/L酸鈉抗凝劑的無(wú)菌管（淺藍(lán)色蓋），抗凝劑與標(biāo)本比例1:9低溫運(yùn)輸，24小時(shí)送達(dá)骨髓3-5ml骨髓，EDTA抗凝管（紫蓋）低溫運(yùn)輸，48小時(shí)送達(dá)第16頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二基因突變檢測(cè)方法

----國(guó)際肺癌協(xié)會(huì)共識(shí)第17頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二測(cè)序法與ARMS法比較測(cè)序法ARMS敏感度20-30%1%FFPE標(biāo)本成功率低高檢測(cè)流程復(fù)雜慢長(zhǎng)簡(jiǎn)單快速數(shù)據(jù)分析要求高低假陽(yáng)性機(jī)會(huì)(交叉污染)多少假陰性機(jī)會(huì)多少儀器成本高低商用試劑盒無(wú)有試劑成本低略高第18頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二測(cè)序法和ARMS法在不同標(biāo)本類型中突變率的比較

ARMS法更適合用于小標(biāo)本檢測(cè)第19頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二四.分子病理檢測(cè)的項(xiàng)目分子靶向治療基因檢測(cè)：●藥物敏感基因檢測(cè)：□ERCC1基因表達(dá)EGFR（29種、4種）□P53基因突變（6種突變）KRAS（7種突變）□BRCA1基因表達(dá)BRAF基因突變（V600E突變）□RRM1基因表達(dá)Jak2基因突變（V617F突變）□TYMS基因表達(dá)PIK3CA基因突變（5種熱點(diǎn)突變）□DPD基因表達(dá)C-KIT基因突變（D816V突變）□STMN1基因表達(dá)RET基因突變（M918T突變）□TYMP基因表達(dá)PDGFRA基因突變（D842V突變）□BRCA1基因表達(dá)BCR-ABL基因突變（T315I突變）□TOP2A基因表達(dá)EML4-ALK融合基因（RT-PCR法)□TUBB3基因表達(dá)

第20頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（一）分子靶向藥物作用靶點(diǎn)基因檢測(cè)臨床應(yīng)用

癌癥種類靶向藥物（主要基于NCCN2010版）檢測(cè)基因檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)靶點(diǎn)非小細(xì)胞肺癌易瑞沙、特羅凱EGFRKRASBRAF突變型野生型野生型DNA突變結(jié)直腸癌西妥昔單抗、帕尼單抗KRASBRAFEGFR野生型野生型突變型DNA突變胰腺癌厄羅替尼EGFRKRAS突變性野生型DNA突變頭頸部癌西妥西單抗KRASBRAF野生型野生型DNA突變黑色素瘤PLX4032,PLX4720BRAF突變型DNA突變胃腸道間質(zhì)瘤伊馬替尼（格列衛(wèi)）C-kit突變型DNA突變二、分子靶向藥物作用靶點(diǎn)檢測(cè)和耐藥基因檢測(cè)臨床應(yīng)用第21頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（二）化療藥物對(duì)應(yīng)的基因檢測(cè)項(xiàng)目臨床應(yīng)用

癌癥種類化療藥物（主要基NCCN2010版）檢測(cè)基因檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)靶點(diǎn)結(jié)直腸癌氟類藥（如5-氟尿嘧啶、卡培他濱等）TYMSDPD低表達(dá)低表達(dá)mRNA表達(dá)水平鉑類藥物（如奧沙利鉑）ERCC1BRCA1RAP80低表達(dá)低表達(dá)低表達(dá)伊利替康EGFR高表達(dá)肝癌鉑類藥物（如順鉑、奧沙利鉑）ERCC1BRCA1低表達(dá)低表達(dá)mRNA表達(dá)水平吉西他濱RRM1低表達(dá)氟類藥（如5-氟尿嘧啶、卡培他濱等）TYMSDPD低表達(dá)低表達(dá)蒽環(huán)類（如多柔比星）TOP2A高表達(dá)mRNA表達(dá)水平膽管\膽囊癌鉑類藥物（如順鉑、奧沙利鉑）ERCC1BRCA1低表達(dá)低表達(dá)mRNA表達(dá)水平氟類藥（如5-氟尿嘧啶）TYMSDPD低表達(dá)低表達(dá)吉西他濱RRM1低表達(dá)第22頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

癌癥種類化療藥物（主要基NCCN2010版）檢測(cè)基因檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)靶點(diǎn)胰腺癌鉑類藥物（如順鉑、奧沙利鉑）ERCC1BRCA1低表達(dá)低表達(dá)mRNA表達(dá)水平氟類藥（如5-氟尿嘧啶、卡培他濱等）TYMS低表達(dá)吉西他濱RRM1低表達(dá)腎癌吉西他濱RRM1低表達(dá)mRNA表達(dá)水平氟類藥（如5-氟尿嘧啶、卡培他濱等）TYMS低表達(dá)蒽環(huán)類（如多柔比星）TOP2A高表達(dá)mRNA表達(dá)水平前列腺癌鉑類藥物（如順鉑、卡鉑）ERCC1BRCA1低表達(dá)低表達(dá)mRNA表達(dá)水平抗微管類如多西紫杉醇）TUBB3BRCA1低表達(dá)高表達(dá)依托泊苷TOP2A高表達(dá)第23頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

癌癥種類化療藥物（主要基NCCN2010版）檢測(cè)基因檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)靶點(diǎn)膀胱癌鉑類藥物（如順鉑、卡鉑）ERCC1BRCA1低表達(dá)低表達(dá)mRNA表達(dá)水平吉西他濱RRM1低表達(dá)抗微管類（如紫杉醇、多西紫杉醇、長(zhǎng)春花堿等）TUBB3BRCA1低表達(dá)高表達(dá)氟類藥（如5-氟尿嘧啶等）、培美曲塞TYMS低表達(dá)蒽環(huán)類（如多柔比星）TOP2A高表達(dá)mRNA表達(dá)水平乳腺癌鉑類藥物（如順鉑、卡鉑）ERCC1BRCA1低表達(dá)低表達(dá)mRNA表達(dá)水平抗微管類（如紫杉醇、多西紫杉醇、長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春瑞濱等）TUBB3BRCA1低表達(dá)高表達(dá)氟類藥（如5-氟尿嘧啶等）TYMSDPD低表達(dá)低表達(dá)吉西他濱RRM1低表達(dá)依托泊苷TOP2A高表達(dá)蒽環(huán)類（如多柔比星、表柔比星）TOP2A高表達(dá)mRNA表達(dá)水平第24頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

癌癥種類化療藥物（主要基NCCN2010版）檢測(cè)基因檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)靶點(diǎn)宮頸癌鉑類藥物（如順鉑、卡鉑）ERCC1BRCA1低表達(dá)低表達(dá)mRNA表達(dá)水平抗微管類（如紫杉醇、多西紫杉醇、長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春瑞濱等）TUBB3BRCA1低表達(dá)高表達(dá)吉西他濱RRM1低表達(dá)氟類藥（如5-氟尿嘧啶等）TYMSDPD低表達(dá)低表達(dá)蒽環(huán)類（如多柔比星、表柔比星）TOP2A高表達(dá)mRNA表達(dá)水平卵巢癌鉑類藥物（如順鉑、卡鉑）ERCC1BRCA1低表達(dá)低表達(dá)mRNA表達(dá)水平抗微管類（如紫杉醇、多西紫杉醇、長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春瑞濱等）TUBB3BRCA1低表達(dá)高表達(dá)吉西他濱RRM1低表達(dá)卡培他濱、培美曲塞TYMS低表達(dá)依托泊苷TOP2A高表達(dá)蒽環(huán)類（如多柔比星）TOP2A高表達(dá)mRNA表達(dá)水平第25頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

癌癥種類化療藥物（主要基NCCN2010版）檢測(cè)基因檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)靶點(diǎn)頭頸部癌鉑類藥物（如順鉑、卡鉑）ERCC1BRCA1低表達(dá)低表達(dá)mRNA表達(dá)水平抗微管類（如紫杉醇、多西紫杉醇等）TUBB3BRCA1低表達(dá)高表達(dá)氟類藥（如5-氟尿嘧啶等）TYMSDPD低表達(dá)低表達(dá)吉西他濱RRM1低表達(dá)黑色素瘤鉑類藥物（如順鉑、卡鉑）ERCC1BRCA1低表達(dá)低表達(dá)mRNA表達(dá)水平抗微管類（如紫杉醇、長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春瑞濱）TUBB3BRCA1低表達(dá)低表達(dá)吉西他濱