生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識

生物化學(xué)檢驗實驗室基本知識第1頁/共90頁2本章內(nèi)容概要：第一節(jié)實驗用純水第二節(jié)實驗用玻璃儀器第三節(jié)實驗方法的選擇第四節(jié)實驗方法的評價第五節(jié)實驗的診斷性能評價第2頁/共90頁3教學(xué)目的和要求：1、掌握實驗用純水的三級標(biāo)準(zhǔn)；實驗方法的分級、標(biāo)準(zhǔn)品分級及相互之間的聯(lián)系；實驗誤差的定義、分類和表示方法；方法評價實驗尤其是回收實驗和干擾實驗的原理和操作；診斷性能評價的指標(biāo)。2、熟悉純水的制備方法；實驗方法選擇的的原則和步驟；方法評價的基本內(nèi)容和步驟；方法評價的指標(biāo)；參考值和醫(yī)學(xué)決定水平的概念。3、了解水的純度檢查；方法性能判斷的指標(biāo)；受試者工作曲線的應(yīng)用和用途。第3頁/共90頁4第一節(jié)實驗用純水天然水自來水實驗用純水經(jīng)簡單的物理、化學(xué)方法處理，除去懸浮物質(zhì)和部分無機鹽經(jīng)蒸餾、電滲析等處理，除去雜質(zhì)(懸浮物,膠體物質(zhì),溶解物質(zhì))第4頁/共90頁5一、純水的制備方法蒸餾法:優(yōu)點:設(shè)備簡單缺點:1、揮發(fā)性物質(zhì)難以去除；2、耗能大，耗能水多；3、需注意管道清潔

純度：25℃時1×105Ω·cm如何安裝：第5頁/共90頁6離子交換法：氫型強酸性陽離子交換樹脂

(R—SO3H，R為母體)

，其中的H+與Ca2+、Na+等金屬離子發(fā)生交換反應(yīng)，而將鈣、鎂離子除去

氫氧型強堿性陰離子交換樹脂(R′—NOH，R′為母體)，其中的OH-與水中的CL-、碳酸根等陰離子發(fā)生交換反應(yīng)，而將它們除去：

第6頁/共90頁7優(yōu)點:除了可去除雜質(zhì)離子以外兼具吸附電中性雜質(zhì)和過濾顆粒雜質(zhì)的作用。缺點:

純度：25℃時5×106Ω·cm2、由于離于交換為可逆反應(yīng)，故去離子水并非絕對不含離子

1、設(shè)備較復(fù)雜，成本較高；第7頁/共90頁8電滲透法

在電場作用下水中各種陽離子趨向陰極，各種陰離子趨向陽極．但陽離子只能透過陽膜而被相鄰的陰膜所阻，陰離子與此相反．這樣，在一些隔間內(nèi)集中了陽離子和陰離子，即形成含鹽多的濃水，在另一些隔間內(nèi)由于陰、陽離子的遷出降低了含鹽量形成淡水

第8頁/共90頁91、不需要消耗化學(xué)藥品，設(shè)備簡單，操作方便。消耗電能，當(dāng)原水中鹽濃度過低時，溶液電阻大，用電滲析也不經(jīng)濟

純度:25℃時104～105Ω·cm2、對于含鹽量高的海水等用此法比用離子交換法更為經(jīng)濟．優(yōu)點:缺點:第9頁/共90頁10炭吸附法:活性炭是一種非常優(yōu)良的吸附劑，它是利用木炭、各種果殼和優(yōu)質(zhì)煤等作為原料，通過物理和化學(xué)方法對原料進行破碎、過篩、催化劑活化、漂洗、烘干和篩選等一系列工序加工制造而成。第10頁/共90頁111、設(shè)備簡單，操作方便。純水制備效率低.,僅作為各種制備純水配套的一種措施.

2、它具有物理吸附和化學(xué)吸附的雙重特性,可以有選擇的吸附氣相、液相中的各種有機物質(zhì).優(yōu)點:缺點:第11頁/共90頁12超濾膜法特點:僅能除去膠體細(xì)菌等大分子物質(zhì)和懸浮物,所得水還需進一步純化.也是作為各種制備純水配套的一種措施.第12頁/共90頁13混合純化系統(tǒng)醫(yī)用超純水設(shè)備實驗室純水系統(tǒng)櫥下式全自動逆滲透純水機特點:多種方法混合純化,可獲得純度很高的二級甚至一級純水.第13頁/共90頁14二、水的純度檢查

用電導(dǎo)儀或兆歐表測定其電導(dǎo)率或電阻率用特定試劑檢測水中殘留的Ca2+、Mg2+、CI-、SO42-

、硅酸鹽等成分的含量微生物含量檢測單位：電導(dǎo)：西門子（s）電導(dǎo)率：s·cm-1電阻：Ω電阻率：Ω·cm第14頁/共90頁15CAP:美國病理學(xué)家學(xué)會實驗用純水標(biāo)準(zhǔn)第15頁/共90頁16NCCLS:美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會第16頁/共90頁17Ⅱ級水:臨床實驗室用水,一般實驗檢驗;Ⅰ級水:特殊實驗如酶活性測定、電解質(zhì)分析等;Ⅲ級水:用做儀器、器皿的自來水清潔后沖洗.實驗用純水的用途第17頁/共90頁18實驗用純水的貯存、運輸和使用:一般選用聚乙烯或聚丙烯桶（瓶）貯存，貯存時間不宜太長，使用時應(yīng)避免一切可能的污染，切勿用手接觸純水或容器內(nèi)壁.盛裝藥品,試劑第18頁/共90頁19第二節(jié)實驗用玻璃儀器(了解)

第19頁/共90頁20第三節(jié)實驗方法的選擇

選擇準(zhǔn)確可靠的實驗方法為臨床提供準(zhǔn)確可靠的信息臨床生化檢驗分析實驗方法選擇的目的實驗方法的分級標(biāo)準(zhǔn)試劑的分級保證第20頁/共90頁21一、實驗方法選擇的目的根本目的：①各實驗室按照方法選擇的原則結(jié)合自身條件，確定合適的某項目的檢測方法。②保證擬使用的檢測方法在正式應(yīng)用于臨床分析病人標(biāo)本之前，對方法性能及可能引入的誤差進行了解，作出初步評估。第21頁/共90頁22二、實驗方法的分級分級依據(jù)：IFCC根據(jù)分析方法的準(zhǔn)確性與精密度的不同。決定性方法參考方法常規(guī)方法分為三級：第22頁/共90頁23（一）決定性方法definitivemethod定義：

是指準(zhǔn)確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過詳細(xì)的研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些方面不夠明確的方法，其測定結(jié)果與真值最為接近。主要方法：重量分析法、中子活化法、同位素稀釋-質(zhì)譜分析法（ID-MS）第23頁/共90頁24應(yīng)用：

由于技術(shù)要求太高，費用昂貴，這類方法不直接用于鑒定常規(guī)方法的準(zhǔn)確性，只用于評價參考方法與一級標(biāo)準(zhǔn)品。儲氫重量分析儀(北京英格海德分析技術(shù)有限公司)

第24頁/共90頁25（二）參考方法referencemethod定義：

是指準(zhǔn)確度與精密度已經(jīng)被充分證實，且經(jīng)公認(rèn)的權(quán)威機構(gòu)（國家主管部門、相關(guān)學(xué)術(shù)團體和國際性組織等）頒布的方法。這類方法干擾因素少，系統(tǒng)誤差很小，有適當(dāng)?shù)撵`敏度、特異度、較寬的分析范圍并且線性良好，重復(fù)測定中的隨機誤差可以忽略不計。主要方法：

原子吸收分光光度法、火焰光度法、免疫化學(xué)法，離子交換層析法等第25頁/共90頁26應(yīng)用：

能在條件優(yōu)越的實驗室作常規(guī)分析，主要用于鑒定常規(guī)方法，評價其誤差大小、干擾因素并決定是否可以被接受；用于鑒定二級標(biāo)準(zhǔn)品和為質(zhì)控血清定值；用于商品試劑盒的質(zhì)量評價。第26頁/共90頁27（三）常規(guī)方法（routinemethod）定義：

應(yīng)具有足夠的精密度、準(zhǔn)確度和特異度，有適當(dāng)?shù)姆治龇秶?，?jīng)濟實用，其性能指標(biāo)符合臨床或其它目的的需要。主要方法：

溴甲酚綠法、雙縮脲法、J-G法等。應(yīng)用：

臨床常規(guī)檢驗使用，常規(guī)方法在作出評定以后，經(jīng)有關(guān)學(xué)術(shù)組織認(rèn)可，可以作為推薦方法（recommendedmethod

）

。偏差已知方法偏離未知方法第27頁/共90頁28項目決定性方法參考方法鈣ID-MS原子吸收分光光度法氯電量滴定法、中子活化法電流滴定法鎂ID-MS原子吸收分光光度法磷ID-MS鉀ID-MS、中子活化法火焰光度法鈉重量分析法、中子活化法火焰光度法白蛋白免疫化學(xué)法總蛋白雙縮脲法肌酐ID-MS、離子交換層析法離子交換層析法尿素ID-MS尿素酶法尿酸ID-MS尿酸酶法（紫外法）膽紅素——重氮反應(yīng)法葡萄糖ID-MS己糖激酶法膽固醇ID-MSAbell-Kendall法，膽固醇氧化酶法甘油三酯ID-MS酶法AST（GOT）

——MDH-NADH法ALT（GPT）——LDH-NADH法轉(zhuǎn)肽酶（r-GT）——連續(xù)監(jiān)測產(chǎn)物生成法肌酸激酶

——NAD+偶聯(lián)法第28頁/共90頁29三、標(biāo)準(zhǔn)試劑的分級標(biāo)準(zhǔn)試劑（標(biāo)準(zhǔn)品）的定義：

國際標(biāo)準(zhǔn)化委員會將標(biāo)準(zhǔn)品（參考物，referencematerial）的定義暫定為：它的一種或幾種物理或化學(xué)性質(zhì)已經(jīng)充分確定；被用于校正儀器或用于評價一種測定方法的物質(zhì)，并將其分成三級。標(biāo)準(zhǔn)品的應(yīng)用：方法評價、儀器校正、常規(guī)分析的質(zhì)量控制第29頁/共90頁30標(biāo)準(zhǔn)品的分級：一級標(biāo)準(zhǔn)品二級標(biāo)準(zhǔn)品控制物第30頁/共90頁31（一）一級標(biāo)準(zhǔn)品（原級參考物）定義：

是已經(jīng)確定的穩(wěn)定而均一的物質(zhì)，其數(shù)值已由決定性方法確定或由高度準(zhǔn)確的若干方法確定，所含雜質(zhì)已經(jīng)定量。應(yīng)用：

用于校正決定性方法，評價和校正參考方法以及為“二級標(biāo)準(zhǔn)品”定值。第31頁/共90頁32（二）二級標(biāo)準(zhǔn)品（次級參考物）定義：

這類標(biāo)準(zhǔn)品可以是純?nèi)芤海ㄋ蛴袡C溶劑的溶液），也可以存在于相似基質(zhì)中。可由實驗室自己配制或為商品，其中有關(guān)物質(zhì)的量由參考方法定值或用一級標(biāo)準(zhǔn)品比較而確定。應(yīng)用：

主要用于常規(guī)方法的標(biāo)化和控制物的定值。第32頁/共90頁33（三）控制物（質(zhì)控物）用二級標(biāo)準(zhǔn)品和常規(guī)方法測定，用于常規(guī)質(zhì)量控制，以控制病人標(biāo)本的測定誤差。控制物不能用于標(biāo)定儀器或方法。

定值血清：在發(fā)生問題時查找原因

未定值血清：一般情況下使用另：用二級標(biāo)準(zhǔn)品和常規(guī)方法測定，然后定值經(jīng)過修正后得到校準(zhǔn)品。第33頁/共90頁34決定性方法一級標(biāo)準(zhǔn)品參考方法二級標(biāo)準(zhǔn)品常規(guī)方法控制物第34頁/共90頁35四、實驗方法選擇的原則總原則：

從實際出發(fā)，根據(jù)實驗室的條件和檢測要求確定適當(dāng)?shù)姆椒?。條件優(yōu)越的實驗室：參考方法一般臨床化學(xué)實驗室實驗室：常規(guī)方法或使用方便的參考方法第35頁/共90頁36

盡量選用國內(nèi)外通用方法或推薦方法，便于方法的規(guī)范化和質(zhì)量控制，重點考慮實用性和可靠性。常規(guī)方法選擇時的原則：第36頁/共90頁37（一）實用性微量快速、方法簡便、安全可靠、成本低廉（二）可靠性

所選方法具有較高的精密度、準(zhǔn)確度和較大的檢測能力，保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性能滿足方法允許誤差限度的要求。標(biāo)本μl、試劑ml第37頁/共90頁38五、實驗方法選擇的步驟（一）廣泛查閱文獻：（二）選定侯選方法：全面認(rèn)識該法。（三）侯選方法的初步試驗：根據(jù)方法選擇的要求，比較各種方法第38頁/共90頁39初步試驗包括：簡單

標(biāo)準(zhǔn)曲線和重復(fù)性質(zhì)控血清和新鮮標(biāo)本的重復(fù)實驗析濃度不同的標(biāo)本，并與公認(rèn)的參考方法的結(jié)果對比.初步試驗?zāi)康?

使工作者熟悉有關(guān)技術(shù),掌握各分析步驟要點,判斷能否適合本室條件要求.根據(jù)所獲得的資料確定是否有必要作進一步研究。初步試驗第39頁/共90頁40第四節(jié)實驗方法的評價

初步試驗判斷符合實驗要求系統(tǒng)評價決定該方法是否可接受分析評價試驗測得結(jié)果和比較方法性能判斷的標(biāo)準(zhǔn)實驗方法系統(tǒng)評價的過程:對實驗誤差的測定第40頁/共90頁41一、實驗誤差定義:指量值的給出值與其客觀真值之差.(一)實驗誤差的分類:依據(jù)來源性質(zhì)實驗誤差系統(tǒng)誤差SE隨機誤差RE恒定系統(tǒng)誤差CE比例系統(tǒng)誤差PE廣泛性不可求另：粗大誤差第41頁/共90頁42系統(tǒng)誤差（systematicerror，SE）

定義:指一系列測定值對真值存在同一傾向的偏差。特點:①具有單向性，而沒有隨機性，常有一定的大小和方向；

②一般由恒定的因素引起，并在一定條件下多次測定中重復(fù)出現(xiàn)；③當(dāng)找到引起誤差的原因，采取一定措施即可糾正，消除系統(tǒng)誤差能提高測定的準(zhǔn)確度。第42頁/共90頁43分類:

CE：指由干擾物引起的使測定值與真值存在恒定大小的誤差，誤差大小與被測物濃度無關(guān)，而與干擾物濃度相關(guān)。

PE：指相對于被測物濃度有相同的百分比誤差，誤差的絕對量與被測物濃度成正比。

引起誤差的原因：

①方法誤差：最嚴(yán)重，最難避免；②儀器和試劑誤差：可以采取措施避免。第43頁/共90頁44隨機誤差（randomerror，RE）

特點:①誤差沒有一定的大小和方向，可正可負(fù)，數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布；

②具有不可預(yù)測性，不可避兔，但可控制在一定范圍內(nèi)；

③當(dāng)分析步驟越多，造成種誤差的機會越多；

④隨測定次數(shù)增加，其算術(shù)均數(shù)就越接近于真值。定義:指在實際工作中，多次重復(fù)測定某一物質(zhì)時引起的誤差。第44頁/共90頁45

由測定儀器、試劑、環(huán)境等實驗條件的改變以及分析人員操作習(xí)慣等因素的變化而引起。系統(tǒng)誤差隨機誤差引起誤差的原因引起誤差的原因：第45頁/共90頁46(二)實驗誤差的表示方法：平均誤差：算術(shù)平均偏差，用dm表示標(biāo)準(zhǔn)偏差（標(biāo)準(zhǔn)差）：表示精密度的較好的指標(biāo)。絕對誤差和絕對偏差：dm=Σ｜di｜/n=Σ｜X-｜/nΣdi2=N-1絕對誤差=X-T絕對偏差=X-X第46頁/共90頁47相對誤差和相對偏差：變異系數(shù)（coefficientofvariation，CV）相對誤差=X-TT×100%相對偏差=X-XX×100%CV=SX×100比較各組數(shù)據(jù)間的變異情況CV離散度精密度第47頁/共90頁48第48頁/共90頁49二、方法評價的基本內(nèi)容和步驟(一)方法評價的基本內(nèi)容基本內(nèi)容:通過實驗途徑，測定并評價方法的精密度和準(zhǔn)確度。評價試驗的過程:就是對誤差的測定。精密度和準(zhǔn)確度誤差方法評價指標(biāo)不可直接測定

實際測定可直接測定方法評價試驗第49頁/共90頁50(二)方法評價步驟評價前實驗:研究候選方法的最適條件。

初步評價:批內(nèi)和日內(nèi)重復(fù)性試驗、回收試驗、干擾試驗

最后評價:依順序作日間重復(fù)性試驗，方法比較試驗和總體判斷方法是否可接受

。評價后實驗:如方法可接受，則進行臨床相關(guān)研究.方法應(yīng)用:建立質(zhì)控系統(tǒng)，培訓(xùn)操作者，引人常規(guī)工作等。

隨機誤差系統(tǒng)誤差方法性能判斷診斷學(xué)評價第50頁/共90頁51三、方法評價指標(biāo)

精密度、準(zhǔn)確度、特異度和干擾以及檢測能力等（一）精密度（Precision）定義:表示測定結(jié)果中隨機誤差大小程度的指標(biāo)。它表示同一標(biāo)本在一定條件下多次重復(fù)測定所得到的一系列單次測定值的符合程度。表示方法:自身無量度指標(biāo)，常用標(biāo)準(zhǔn)差（S）或變異系數(shù)（CV％）表示。（n，X）（n，X）第51頁/共90頁52分類：連續(xù)測定的精密度重復(fù)性精密度（了解）再現(xiàn)性精密度（了解）第52頁/共90頁53連續(xù)測定的精密度：在相同條件下，對同一標(biāo)本連續(xù)進行n次重復(fù)測定結(jié)果的符合程度。在有限次測定情況下，一般用（總體標(biāo)準(zhǔn)差）的估計值S（樣本標(biāo)準(zhǔn)差）來表達這種精密度。定義：第53頁/共90頁54重復(fù)性精密度：

又稱室（批）內(nèi)精密度，指在相同條件下（同樣方法、同一種試劑和標(biāo)準(zhǔn)品、同樣儀器、在同一實驗室由同一人操作，并要保持實驗期間準(zhǔn)確性不變）對同一標(biāo)本在盡可能短的時間內(nèi)進行m輪n次重復(fù)測定結(jié)果之間相互接近的程度。重復(fù)性（批內(nèi)）精密度（Sω）ΣSi2mSω=Si=Σ(xt-xt)2n-1CV=SωX×100定義：第54頁/共90頁55再現(xiàn)性精密度定義：又稱室（批）間精密度，指在不同條件下（不同操作者，用不同儀器，在不同實驗室和不同時間）采用同一方法對同一標(biāo)本所獲得的單次測定結(jié)果之間彼此符合程度。應(yīng)用：多用于實驗室間的質(zhì)量估計，其標(biāo)準(zhǔn)差常稱為室間標(biāo)準(zhǔn)差。室（批）間標(biāo)準(zhǔn)差，是在對室（批）間重復(fù)性試驗結(jié)果進行單因素完全隨機設(shè)計方差分析后進行計算。第55頁/共90頁56（二）準(zhǔn)確度：定義:

指測定結(jié)果與真值接近的程度，一般用偏差和偏差系數(shù)表示。表示方法:

偏差為重復(fù)測定均值（X）與真值之差。

偏差系數(shù)（CB）=×100

。｜真值-X｜真值定量的標(biāo)準(zhǔn)品確認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)方法或第56頁/共90頁57影響因素：

系統(tǒng)誤差、隨機誤差（了解）Σ表示已定系統(tǒng)誤差的綜合。A=Σ+Δα（不確定度）

不確定度（uncertainty）是表達測定結(jié)果的一個組成部分，它表明被測標(biāo)本中真值存在的范圍第57頁/共90頁58（三）特異度和干擾即專一性，是指在特定實驗條件下分析試劑只對待測物質(zhì)起反應(yīng)，而不與其它結(jié)構(gòu)相似的非被測物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。分析方法特異度越高，則測定結(jié)果越準(zhǔn)確。特異度（specificity）是指標(biāo)本中某些非被測物質(zhì)本身不與分析試劑反應(yīng)但以其它形式使待測物測定值偏高或偏低，這些非被測物質(zhì)稱為干擾物。干擾（interference）特異度干擾方法的準(zhǔn)確性側(cè)面指標(biāo)正面指標(biāo)第58頁/共90頁59（四）檢測能力

定義：即檢測限度或檢出限（detectionlimit），是指能與適當(dāng)?shù)摹翱瞻住弊x數(shù)相區(qū)別的待測物的最小值?？瞻鬃x數(shù)：指由基質(zhì)、試劑所得的讀數(shù)和結(jié)果，以及由儀器或測定過程所產(chǎn)生的影響測定步驟的殘余偏差。試劑空白：試劑+D.W檢出限TTTB第59頁/共90頁60四、評價試驗

評價試驗包括重復(fù)性試驗回收試驗于擾試驗方法比較試驗

第60頁/共90頁61（一）重復(fù)性試驗試驗的目的:

試驗的方法:

對同一材料（標(biāo)準(zhǔn)液、質(zhì)控液、標(biāo)本等）分成數(shù)份試驗標(biāo)本進行多次分析測定，并計算其均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差與變異系數(shù)。檢測候選方法的隨機誤差（1）批內(nèi):標(biāo)準(zhǔn)液（2）日內(nèi):（3）日間:質(zhì)控液（4）平行雙份:試驗的形式:應(yīng)注意的問題:（1）分析標(biāo)本選擇（2）被測物濃度第61頁/共90頁62(二)回收試驗試驗的目的:

試驗的方法:

將被測物標(biāo)準(zhǔn)液加人病人標(biāo)本中，成為分析標(biāo)本；原病人標(biāo)本中加人等量的無被測物的溶劑作基礎(chǔ)標(biāo)本；然后用候選方法測定并得到各自濃度。檢測候選方法的比例系統(tǒng)誤差。回收:

指候選方法準(zhǔn)確測定加入常規(guī)分析標(biāo)本的純分析物的能力。第62頁/共90頁63回收濃度=分析標(biāo)本測得濃度-基礎(chǔ)標(biāo)本測得濃度（實際測得值）計算:加入濃度=標(biāo)準(zhǔn)液量病人樣品量（ml）＋標(biāo)準(zhǔn)液量（ml）

×標(biāo)準(zhǔn)液濃度（理論真實值）回收率（%）=回收濃度加入濃度

×100（理想值為１００％）比例系統(tǒng)誤差＝１－回收率＝＝真實值－測定值

真實值誤差值

真實值第63頁/共90頁64注意事項：吸量準(zhǔn)確；加入標(biāo)準(zhǔn)液后，其實驗樣品的被子測濃度最好達到醫(yī)學(xué)決定水平；總濃度必須在方法分析范圍內(nèi)；需加入高中低不同濃度回收試驗，計算平均回收率；加入標(biāo)準(zhǔn)液的體積一般在10%內(nèi)；重復(fù)2-3次。第64頁/共90頁65(三)干擾試驗試驗的目的:

用來檢測候選方法的恒定系統(tǒng)誤差。干擾物濃度不同，誤差大小也不同干擾:指標(biāo)本中某些非被測物質(zhì)本身不與分析試劑反應(yīng)但以其它形式使待測物測定值偏高或偏低。第65頁/共90頁66試驗的方法:

基本與回收試驗一樣，但在病人標(biāo)本中加人的是疑有干擾或非特異性反應(yīng)的物質(zhì)。將可能引起干擾的物質(zhì)配成一定濃度的溶液，加到病人標(biāo)本中成為干擾分析樣本；原病人標(biāo)本加人相同量的無干擾物質(zhì)的溶劑作為基礎(chǔ)樣本；然后用候選方法對此兩種樣本同時測定，兩者之差即表示該干擾物質(zhì)產(chǎn)生的干擾所引起的誤差，即干擾值干擾值=分析標(biāo)本測得濃度-基礎(chǔ)標(biāo)本測得濃度計算:第66頁/共90頁67注意事項被試驗的物質(zhì)：膽紅素、溶血、防腐劑、抗凝劑、藥物等可疑干擾物的濃度：干擾物濃度有可能達到病理標(biāo)本最高濃度值。本試驗檢測的誤差包括方法特異度不高和干擾物作用引起的誤差。消除干擾常用方法空白對照：試劑空白：常見標(biāo)本空白：內(nèi)空白法和外空白法物理、化學(xué)方法分離干擾物雙波長或多波長法檢測排除干擾誤差較大又無法消除，則改進或更換方法。（分析標(biāo)本就是模擬實際標(biāo)本）第67頁/共90頁68(四)方法比較試驗（對比試驗）（熟悉）試驗的目的:

試驗的方法:

對一組病人的標(biāo)本用候選方法和比較方法同時進行分析測定，觀察二者之間的差異。這是考驗候選方法是否可采用的重要措施。

用于檢測候選方法的系統(tǒng)分析誤差。對所得數(shù)據(jù)進行分析，可提供系統(tǒng)誤差的性質(zhì)（恒定或／和比例誤差）第68頁/共90頁69①在進行臨床化學(xué)常規(guī)方法的評價時，最好選擇參考方法作為比較方法②若采用已知偏差法，則有部分誤差來自比較方法（與已知偏差一致的那部分誤差），剩余的則屬于侯選方法。③若采用未知偏差法，分析誤差可能來源于二者之一或兩者都有，難以分析。比較方法的選擇：應(yīng)注意的問題:統(tǒng)計處理：配對t檢驗、相關(guān)和回歸分析。第69頁/共90頁70方法學(xué)評價實驗小結(jié)重復(fù)性試驗：測定候選方法的偶然誤差，衡量精密度?；厥赵囼灒簻y定比例系統(tǒng)誤差，衡量準(zhǔn)確度。干擾試驗：測定恒定系統(tǒng)誤差，衡量準(zhǔn)確度。方法對比試驗：檢測候選方法的系統(tǒng)分析誤差。第70頁/共90頁71五、方法性能判斷方法的選擇方法的評價實驗的診斷性能評價方法性能判斷建立質(zhì)控,引入常規(guī)檢驗實驗誤差某一確定的允許誤差某一確定的允許誤差方法性能標(biāo)準(zhǔn)(PS):運用統(tǒng)計方法制定出一系列醫(yī)學(xué)決定水平上的９５％標(biāo)本允許誤差限度第71頁/共90頁72（一）方法學(xué)性能指標(biāo)：１、允許分析誤差：依據(jù)Westgard制定的９５％標(biāo)本的允許誤差限度，或者９５％的病人標(biāo)本其誤差應(yīng)小于這個限度，用ＥＡ表示。ＥＡ是大量研究,運用統(tǒng)計學(xué)方法制定出的。２、醫(yī)學(xué)決定水平：對臨床病人的診療具有醫(yī)學(xué)判斷作用的臨界分析物濃度，用Ｘc表示。Ｘc代表一個閾值。每個檢測指標(biāo)有一個或多個閾值。性能指標(biāo):ＥＡ和Ｘc組成某方法的性能指標(biāo)。即某方法在一定XC下的ＥＡ值。第72頁/共90頁73

制定性能標(biāo)準(zhǔn)，要反映臨床應(yīng)用與解釋結(jié)果的要求（醫(yī)學(xué)效用限度），又要基本符合實驗室所能做到的技能狀態(tài)。方法學(xué)性能標(biāo)準(zhǔn)制定原則第73頁/共90頁74（二）方法性能判斷指標(biāo)：判斷標(biāo)準(zhǔn)：各種誤差值＜確定的允許誤差值ＥＡ

：

方法可以接受任何一項各種誤差值＞

確定的允許誤差值ＥＡ：

方法不能接受性能判斷指標(biāo)：兩套（了解）第一套：單值判斷指標(biāo)：簡單，用于初步估量第二套：可信區(qū)間判斷指標(biāo)：復(fù)雜，對方法性能評價更客觀，用于最后判斷第74頁/共90頁75１、單值判斷指標(biāo)

誤差類別判斷指標(biāo)備注隨機誤差（RE）1.96STM<EA

STM=重復(fù)試驗的標(biāo)準(zhǔn)差

比例誤差（PE）(|R-100|)(XC/100)<EAR=平均回收率恒定誤差(CE)

|偏差|<EA

由干擾試驗測出系統(tǒng)誤差(SE)

|(a+bXc)-Xc|<EA

對比試驗回歸方程總誤差(TE)

RE+SE<EA

包括偶然及系統(tǒng)誤差第75頁/共90頁76（１）９０％可信區(qū)間、９５％可信上限和可信下限：

統(tǒng)計學(xué)的規(guī)律說明，每種測定結(jié)果的可靠性與測定次數(shù)有關(guān)，次數(shù)愈多，結(jié)果反映真實性愈強；但實際上，不可能進行大量的測定。在統(tǒng)計學(xué)中為了估量分析誤差的不確定性，對于每一誤差可計算其可信區(qū)間，用可信上限與可信下限代替單值的估量，Ｅu為誤差的可信上限，Ｅl為誤差的可信下限。west-gard推薦用90％的可信區(qū)間，這樣，Ｅu將是誤差單側(cè)的95％上限，用此判斷候選方法的可接受性比較可靠。第76頁/共90頁77假如，Ｅu

＜EA

，則方法性能為可接受；假如Ｅl

＞EA，則方法必須改進，以減少誤差，否則排除。假如Ｅu

＞EA

，但Ｅl

＜EA

，說明僅有的數(shù)據(jù)不足以作出任何有關(guān)可接受性的結(jié)論，還需繼續(xù)實驗以收集更多的數(shù)據(jù)，以便對分析誤差作出較好的估量

第77頁/共90頁78２、可信區(qū)間判斷指標(biāo)計算公式：

誤差類別實驗接受指標(biāo)EU<EA

排除指標(biāo)EL>EA隨機誤差重復(fù)性1.96STMU<EA1.96STML>EA比例誤差回收|RU或L-100|U(XC/100)<EA|RU或L-100|L(XC/100)>EA*恒定誤差干擾|d|+t(sd)/√NU<EA|d|+t(sd)/√NL>EA**系統(tǒng)誤差對比|(a+bXc±W)-XC|U<EA|(a+bXc±W)-XC|L>EA***總誤差重復(fù)性和√(1.96STMU)2+W2√(1.96STML)2+W2

方法對比+|a+bXc)-XC|<EA+|a+

bXc)-XC|>EA#*特例:當(dāng)RU>100>RL,PEL=0**特例:當(dāng)t(sd)/√NL>/偏差/,CEL=0***特例:當(dāng)(a+bXc+W)>XC>(a+bXc-W),CEL=0#

特例:當(dāng)SEL=0,TEL=REL

第78頁/共90頁79內(nèi)容原理、試劑配制、所用器材、操作步驟等結(jié)論可接受或不被接受后期工作評價后實驗和應(yīng)用階段。（三）評價實驗書面報告第79頁/共90頁80第五節(jié)實驗的診斷性能評價

方法的選擇方法的評價實驗的診斷性能評價方法性能判斷建立質(zhì)控,引入常規(guī)檢驗方法學(xué)評價診斷學(xué)評價臨床診斷實驗室第80頁/共90頁81診斷性能評價：

與臨床診斷相結(jié)合，建立參考值，采用臨床評價標(biāo)——診斷靈敏度、診斷特異度、預(yù)測值、似然比等作進一步評價。與檢測方法的靈敏度、特異度相區(qū)別第81頁/共90頁82一、參考值和醫(yī)學(xué)決定水平（一）參考值和參考范圍正常值和正常值范圍參考值和參考范圍某地區(qū)選定一群健康人采用標(biāo)準(zhǔn)方法測定某項目，采用統(tǒng)計學(xué)方法處理求出和Ｓ為正常值±2S為正常值范圍

參考個體（預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)個體）

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