輸血科常見(jiàn)試驗(yàn)問(wèn)題的探討

輸血科常見(jiàn)試驗(yàn)問(wèn)題的探討第1頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

一.輸血科常用的實(shí)驗(yàn)1．直接凝集試驗(yàn)：

原理：顆?？乖t細(xì)胞）+抗體（試劑為IgM，血清為

IgM或IgG）。方法：玻片法，試管法，微柱凝膠法（單個(gè)紅細(xì)胞可通過(guò)玻璃微珠之間空隙到達(dá)底部，而凝集紅細(xì)胞則不能通過(guò)而滯留于玻璃微珠表面）。特點(diǎn)：紅細(xì)胞表面抗原數(shù)量多：數(shù)萬(wàn)-數(shù)十萬(wàn)甚至一百多萬(wàn)個(gè)。應(yīng)用：血型鑒定，鹽水交叉配血。關(guān)鍵：抗原抗體的比例需適當(dāng)，否則結(jié)果錯(cuò)誤。紅細(xì)胞濃度1%,5%-10%。

第2頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二2.間接抗球蛋白試驗(yàn)原理：抗體首先與紅細(xì)胞結(jié)合，洗滌，然后再與抗球蛋白抗體反應(yīng)。方法：試管法，微柱凝膠法（配血卡，抗篩卡）。特點(diǎn)：可檢出IgG抗體或可致敏的補(bǔ)體成分。應(yīng)用：交叉配血，抗體篩選，抗體鑒定。關(guān)鍵：紅細(xì)胞濃度（0.8%，2-5%），37℃孵育時(shí)

間。試管法：充分洗滌紅細(xì)胞。微柱法：離

心速度和時(shí)間（1000rpm×10min），血清與

紅細(xì)胞需混合后孵育。第3頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二3．直接抗球蛋白試驗(yàn)原理：抗體或補(bǔ)體致敏的紅細(xì)胞洗滌后直接與抗球蛋白抗體反應(yīng)。方法：試管法，微柱法。應(yīng)用：可檢出IgG抗體或補(bǔ)體致敏的紅細(xì)胞（自身免疫病）。關(guān)鍵：紅細(xì)胞濃度（0.8%，2-5%），試管法：充分洗滌紅細(xì)胞。第4頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二4．抗體篩選原理：間接抗球蛋白試驗(yàn)。血清與試劑紅細(xì)胞混合，37℃孵育，離心。方法：微柱凝膠法。應(yīng)用：可檢出血清中抗紅細(xì)胞IgG抗體或可致敏紅細(xì)胞的補(bǔ)體成分。關(guān)鍵：應(yīng)用前微柱卡離心，紅細(xì)胞濃度

0.8%），血清與紅細(xì)胞需混合后37℃

孵育，離心速度和時(shí)間

1000rpm×10min）。第5頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二5．聚凝胺交叉配血試驗(yàn)原理：聚凝胺中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷縮小紅細(xì)胞之間的距離，LISS增強(qiáng)可以抗體之間的結(jié)合力，離心產(chǎn)生凝集現(xiàn)象，加入解聚液消除聚凝胺正電荷，有IgM或IgG抗體產(chǎn)生的凝集不散開(kāi)，非特異性凝集則散開(kāi)。應(yīng)用：可檢出血清中IgM或尤其是IgG類抗紅細(xì)胞抗體第6頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二關(guān)鍵：按標(biāo)準(zhǔn)操作程序非常重要，是快速、敏感的交叉配血方法。紅細(xì)胞濃度為

5%，血清加入量，LISS加入量，離心速度和時(shí)間（3400rpm×15sec），30

秒內(nèi)觀察結(jié)果等等。肝素抗凝血多加幾滴聚凝胺，注意新鮮血標(biāo)本產(chǎn)生溶血現(xiàn)象。第7頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二6．吸收試驗(yàn)原理：紅細(xì)胞表面抗原與相應(yīng)抗體孵育產(chǎn)生結(jié)合反應(yīng)。已知抗體可檢測(cè)紅細(xì)胞表面未知抗原，已知紅細(xì)胞表面抗原可檢測(cè)未知血清中的抗體。應(yīng)用：血型亞型的鑒定，抗體特異性鑒定，血清自身抗體吸收后用于血型鑒定和交叉配血試驗(yàn)。第8頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二7．放散試驗(yàn)原理：與紅細(xì)胞表面抗原結(jié)合的抗體通過(guò)熱放散或乙醚放散等方法解離下來(lái)。應(yīng)用：血型的鑒定，抗體特異性鑒定，得到自身抗體或無(wú)自身抗體的紅細(xì)胞。第9頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二8．凝集抑制試驗(yàn)（中和試驗(yàn)）原理：血清、唾液、胃液、精液、腹水以及卵巢液等體液中的血型抗原與已知相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，抑制抗體與紅細(xì)胞的結(jié)合反應(yīng)。應(yīng)用：體液或組織中ABHLewis血型物質(zhì)的鑒定，司法鑒定。第10頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二9．新生兒溶血病的血清學(xué)試驗(yàn)嬰兒和父母ABO血型鑒定新生兒標(biāo)本檢查：DAT,IAT，游離抗體（放散試驗(yàn)）。3.母親標(biāo)本檢查：IgG抗A(B)效價(jià)，ABO以外抗體（試劑紅細(xì)胞）。第11頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

二.血型及血型鑒定第12頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（一）ABO，Rh（D）血型抗原的分子生物學(xué)

1）H抗原和H基因：

H基因位于19號(hào)染色體上，編碼巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶，催化巖藻糖與前體物質(zhì)支鏈末端的半乳糖相連接形成H抗原。群體中99.99％有H基因（Hh或HH），而hh即為孟買(mǎi)型，很少見(jiàn)，雖然有A、B基因，但紅細(xì)胞上缺乏ABO系統(tǒng)的全部抗原。H基因的遺傳與ABO基因無(wú)關(guān)，但A，B及H抗原全部都是從相同的前身物質(zhì)形成的。第13頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二2）A、B抗原和A、B基因：

A、B基因位于第九號(hào)染色體上(9q34.1-q34.2,跨越染色體18kb長(zhǎng)度)。A基因編碼N－乙酰胺半乳糖轉(zhuǎn)移酶，使N－乙酰半乳糖胺與H抗原相連，形成A血型物質(zhì)，在A型成人每個(gè)紅細(xì)胞上可多達(dá)81－117萬(wàn)個(gè)血型A分子。B基因編碼D－半乳糖轉(zhuǎn)移酶，使D－半乳糖與H抗原相連，形成B血型物質(zhì)，在B型成人每個(gè)紅細(xì)胞上可多達(dá)61－83萬(wàn)個(gè)血型B分子。

第14頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

A和B基因都被遺傳時(shí)（AB型），A分子大約有6萬(wàn)個(gè)（正定型A端可能會(huì)弱一些），B分子大約有72萬(wàn)個(gè)（正定型B端可能會(huì)強(qiáng)一些）。O型紅細(xì)胞上只有高濃度的H抗原。ABH抗原在37周齡開(kāi)始發(fā)育，但新生兒紅細(xì)胞ABH的反應(yīng)性沒(méi)有成人強(qiáng)，位點(diǎn)數(shù)只有成人的25－50％，血型鑒定時(shí)應(yīng)注意。第15頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二3）ABO血型基因及編碼氨基酸示意圖A、B、O基因高度同源，A基因和B基因表達(dá)產(chǎn)物僅有4個(gè)氨基酸差異234567（外顯子編號(hào)）9a

23a17a16a12a45a225a（編碼氨基酸數(shù)目）第16頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二4）RH(D)抗原和基因基因位于1p34-36區(qū)域，由10個(gè)外顯子組成，編碼417aa的多肽，跨細(xì)胞膜存在表達(dá)其抗原性。

RH血型基因：RHDd,Cc,Ee等位基因。單倍型：8種(2×2×2)；基因型：8×（8＋1）/2＝36種。表型：用五種抗血清鑒定的表型有

2（D,d）×3（C,c,Cc）×3(E,e,Ee)＝18種。第17頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

5）D抗原表型的分類：正常D抗原：每個(gè)紅細(xì)胞9萬(wàn)－33萬(wàn)個(gè)，200萬(wàn)個(gè)（D－－/D－－基因型）弱D：有正常的D抗原但數(shù)量減少

，數(shù)百個(gè)。單抗檢測(cè)，直接凝集或抗球蛋白實(shí)驗(yàn)

Del型：只能用吸收放散試驗(yàn)檢測(cè)出來(lái)，部分外顯子缺乏導(dǎo)致抗原不完整。不完全D抗原：D抗原不完全，血清中有針對(duì)缺失D抗原表位的抗體。第18頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（二）ABO血型系統(tǒng)的亞型及變異型

1）A1和A2亞型

兩種A抗原：A1和A2亞型構(gòu)成了全部A型血液的99.99％。兩種紅細(xì)胞均與抗A試劑發(fā)生強(qiáng)凝集反應(yīng)。B型血血清含兩種抗體（抗-A，抗-A1）。1－2％A2型人和22－26％A2B型人血清含抗A1。系A(chǔ)基因第三外顯子單一堿基突變?cè)斐擅富钚愿淖儭?/p>

區(qū)別：

抗A1試劑與A1紅細(xì)胞凝集，不與A2紅細(xì)胞凝集，大約80％A型或AB型紅細(xì)胞與抗A1（雙花扁豆植物血凝素）凝集，分類為A1或A1B型；其余20％紅細(xì)胞為抗A凝集，但不為抗A1凝集，稱為A2或A2B型。第19頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二意義：

在常規(guī)輸血實(shí)驗(yàn)中，除非A2或A2B型人的血清含有抗A1抗體，患者與獻(xiàn)血員間的A1或A2不需加以區(qū)別?？笰1抗體在A2型人為1－2％，A2B型人為22－26％。在37℃有反應(yīng)的抗A1才有臨床意義，可造成正反定型不符，交叉配合不相合。第20頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

2）弱A亞型弱A亞型的血清學(xué)和轉(zhuǎn)移酶特點(diǎn)：名稱細(xì)胞反應(yīng)血清中抗體分泌型唾液中的抗原血清中的A轉(zhuǎn)移酶抗－A抗－AB抗－A抗－A1A3mfmf無(wú)有時(shí)AH有時(shí)Aendmfmf無(wú)有時(shí)H無(wú)Ax-/w＋+/—通常有H很少Am-/w+/—無(wú)無(wú)AH有Ay——無(wú)無(wú)AH痕量Ael——一些有H無(wú)

注：紅細(xì)胞均與抗H反應(yīng)；抗A1可被上述紅細(xì)胞吸收放散下來(lái)；mf：混合外觀；w：非常弱的凝集。主要原因是A轉(zhuǎn)移酶分子某個(gè)氨基酸的變異使其功能受到不同程度的影響所致。第21頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

3）弱B亞型弱B亞型的血清學(xué)和轉(zhuǎn)移酶特點(diǎn)：名稱細(xì)胞反應(yīng)血清中抗體分泌型唾液中的抗原血清中的B轉(zhuǎn)移酶

抗－B抗－AB抗H抗－BB3mfmf＋無(wú)BH有Bxww＋有BH無(wú)Bm－/w－/w＋無(wú)BH有Bel－－＋有時(shí)H無(wú)

注：紅細(xì)胞均與抗H反應(yīng)；抗B可被上述紅細(xì)胞吸收放散下來(lái)；mf：混合外觀；w：非常弱的凝集。主要原因是B轉(zhuǎn)移酶分子某個(gè)氨基酸的變異使其功能受到不同程度的影響所致。第22頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二4）Cis-AB型：父親（母親）AB型＋母親（父親）O型，孩子為AB型及O型原理：染色體基因交換或基因變異

5）嵌合體：雙卵雙生兒和雙精子嵌合體中，存在兩個(gè)血型的雜合型，也可以有其它如HLA等的雜合體。第23頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

6）孟買(mǎi)型和類孟買(mǎi)型：

紅細(xì)胞是O型，但是H抗原陰性，血清中都有抗－H。缺乏形成H抗原的糖基轉(zhuǎn)移酶，雖然有A或B基因以及A、B的糖基轉(zhuǎn)移酶，但不能形成A或B抗原。紅細(xì)胞不能被抗－A、抗－B、抗－AB或抗－H所凝集。由于血清中有抗－H，給臨床輸血帶來(lái)了極大困難。一般多輸注同型血或采用自身輸血。

第24頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

7）獲得性B抗原：

細(xì)菌的脫乙酰基酶使N－乙酰半乳糖胺轉(zhuǎn)變?yōu)榘肴樘?，后者與血型B抗原的決定簇很相似。

8）血清中的AB和H物質(zhì)：

含量增高見(jiàn)于胃癌、假性粘液性卵巢囊腫患者?？芍泻洼斎胙褐械纳倭靠梗瑼和抗－B（O型血液）。第25頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二9）HAB分泌型和非分泌型：唾液中有AB物質(zhì)為分泌型，反之為非分泌型。我國(guó)占73－85％。受Se和se等位基因控制。唾液中檢測(cè)ABO血型物質(zhì)對(duì)血型鑒定有重要意義。

10)白血病引起A、B和H抗原減弱：弱A最多見(jiàn)。血型一經(jīng)正確鑒定應(yīng)輸注同型血。

11)新生兒血型：用正定鑒定血型。出生時(shí)血清中一般無(wú)IgM抗體，反定型陰性。其血清中有來(lái)自母親的IgG抗體。

12)B(A)型和A(B)型

B型紅細(xì)胞上存在A抗原，A型紅細(xì)胞上存在B抗原?；蛑?－2個(gè)堿基突變，稱為A型和B型糖基轉(zhuǎn)移酶的疊蓋功能。

第26頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（三）抗ABH和抗D抗體1）抗－A和抗－B：

抗體可以是IgM、IgG或IgA。大約1/12000成人缺少抗－A或抗－B。新生兒抗體通常是IgG，且大多缺乏。血清中主要是IgM、IgG。唾液、乳汁、淚液、宮頸分泌液和膀胱內(nèi)容物主要是IgA。IgG抗-A，B，M，N在鹽水中直接凝集紅細(xì)胞。2）抗－A1抗體：

在臨床上意義不大，多數(shù)在25℃以上沒(méi)有活性。也有抗－A1引起溶血性輸血反應(yīng)的報(bào)道。3）ABO自身抗體：

較少，材料統(tǒng)計(jì)6/4668人具有ABO自身抗體可導(dǎo)致自身溶血性貧血或致命的溶血和腎衰。第27頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二4）抗H：

孟買(mǎi)血清中的抗－H抗體，可造成嚴(yán)重的HDN；O型紅細(xì)胞輸入Oh病人體內(nèi)，僅2％的紅細(xì)胞生存24小時(shí)；A1紅細(xì)胞輸入Ah病人體內(nèi)，67％于1小時(shí)內(nèi)破壞。5）母親血清的ABO抗體：

可引起新生兒溶血?。℉DN）。通常發(fā)生在O型母親的A1、B或A1B型的孩子。15％的孕婦是A或B型的孩子，少量紅細(xì)胞輕微破壞的癥狀可能較為常見(jiàn)，但臨床上涉及HDN的非常少：紅細(xì)胞上A和B抗原的密度相對(duì)較低；血漿中有可溶性的A或B物質(zhì)可以中和部分母體來(lái)源的抗體；胎兒血漿中缺乏補(bǔ)體；因?yàn)镮gG溶解紅細(xì)胞需要補(bǔ)體的參與等。

第28頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

各血型系中，以A、B抗原性最強(qiáng)，Rh（D）抗原次之，當(dāng)受者接受了所缺少的A、B抗原后，幾乎每個(gè)人都會(huì)產(chǎn)生特異性同種抗體。大約有2/3的Rh(D)陰性的人，接受Rh(D)陽(yáng)性血液后可產(chǎn)生抗D抗體。經(jīng)一次妊娠Rh（+）的胎兒后，大約7%的Rh（-）婦女在6個(gè)月內(nèi)血清學(xué)試驗(yàn)可測(cè)到抗D。這些抗體是造成溶血性輸血反應(yīng)的主要原因。如對(duì)血型定型結(jié)果有疑問(wèn)，必須在輸血前妥善解決，否則在輸血時(shí)很難選到相合的血液。第29頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（三）血型鑒定

1）.患者的病史和標(biāo)本病史資料和信息

檢查前應(yīng)盡可能了解，核對(duì)病人的有關(guān)資料，包括病人的姓名，年齡，性別，種族，臨床診斷，輸血史，藥物史，妊娠史。標(biāo)本的要求標(biāo)本必須有正確的標(biāo)簽，符合患者血液的體內(nèi)狀態(tài)，能代表患者當(dāng)前的免疫學(xué)情況，并且要防止血樣的稀釋和溶血的產(chǎn)生，溶血的標(biāo)本一般不能使用。第30頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

因?yàn)檠逯械挠坞x血紅蛋白可以掩蓋在輸血前試驗(yàn)中抗體反應(yīng)引起的溶血。如果標(biāo)本標(biāo)簽上的內(nèi)容與血液申請(qǐng)單上的內(nèi)容不一致或?qū)Σ∪松矸荽_認(rèn)有疑問(wèn)的話，必須重抽一份新的血液標(biāo)本，任何人不得對(duì)錯(cuò)誤的標(biāo)簽進(jìn)行修改。血清或血漿均可用作檢查，但使用血漿標(biāo)本時(shí)，應(yīng)注意排除纖維蛋白原的干擾。因?yàn)檠獫{中有時(shí)有少許纖維蛋白凝塊，容易導(dǎo)致凝集結(jié)果的判讀困難。第31頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

前三個(gè)月內(nèi)病人輸過(guò)血或已經(jīng)妊娠，則配血試驗(yàn)使用的標(biāo)本不得在這次輸血的48小時(shí)前抽取，避免因回憶反應(yīng)而產(chǎn)生的抗體漏檢。新近的輸血或妊娠可以引起意外抗體的迅速出現(xiàn)，如果對(duì)病人的輸血史或妊娠史不明，使用的樣本必須是輸血前48小時(shí)內(nèi)抽取的。病人在使用右旋糖酐等藥物治療前抽取病人血液標(biāo)本備，以防止紅細(xì)胞緡錢(qián)狀凝集對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的干擾。輸血后所有的標(biāo)本均應(yīng)妥善保存于2~8℃冰箱中，至少一周。第32頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二2）血型鑒定的方法

直接凝集試驗(yàn)高效價(jià)IgM抗－A，抗－B。抗-D。方法：玻片法，試管法，卡式法，室溫避免冷抗體一般可得較準(zhǔn)確的結(jié)果。第33頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二3）血型鑒定錯(cuò)誤的原因

技術(shù)和管理方面的原因：（1）標(biāo)本或試劑搞錯(cuò)，造成假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。（2）器材不潔產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。（3）試劑污染或失效產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。（4）離心過(guò)度或不足，產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。（5）陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象未能識(shí)別，導(dǎo)致假陰性結(jié)果。（6）漏加試劑，產(chǎn)生假陰性結(jié)果。（7）結(jié)果記錄或判斷錯(cuò)誤，產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。（8）細(xì)胞與血清比例不適當(dāng)，產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。第34頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二血清異常華通氏膠或血清蛋白異常引起串錢(qián)狀形成，影響反定型結(jié)果。紅細(xì)胞致敏在含高蛋白介質(zhì)的試劑中可發(fā)生凝集，產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。異常基因型

ABO亞型的弱抗原難以檢出，產(chǎn)生假陰性結(jié)果。近期輸血曾異型輸血，使病人血液標(biāo)本成為不同型別的紅細(xì)胞混合物，定型時(shí)顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。第35頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

嵌合體血型體內(nèi)有兩群紅細(xì)胞，定型時(shí)顯示“混合外觀

凝集”現(xiàn)象。疾病因素導(dǎo)致抗原減弱某些白血病病人ABO血型抗原可受到

抑制，檢出困難。紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象紅細(xì)胞因遺傳或獲得性的表面抗原異常，

發(fā)生多凝集現(xiàn)象。獲得性類B

由于革蘭氏陰性桿菌的作用，紅細(xì)胞可獲得“類B”的活性。近期內(nèi)進(jìn)行大量的血漿置換治療影響抗體效價(jià)，造成反定

型困難。第36頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

不規(guī)則抗體的存在受檢者血漿中，含有ABO血型抗體以外

的不規(guī)則抗體，與試劑A、B細(xì)胞上的相應(yīng)抗原起反應(yīng)。低丙種球蛋白血癥低丙種球蛋白血癥病例，可能會(huì)因免疫

球蛋白水平全面下降使血清定型時(shí)不見(jiàn)凝集或僅見(jiàn)弱凝

集反應(yīng)。藥物等因素藥物、右旋糖酐及靜脈注射某些造影劑可引起

紅細(xì)胞聚集而類似凝集。年齡因素在未產(chǎn)生自己抗體的嬰兒、由母親被動(dòng)獲得抗體

的嬰兒，或抗體水平下降的老人，試驗(yàn)時(shí)可出現(xiàn)異常結(jié)果。第37頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

A亞型B亞型的鑒定：除試劑抗血清外，可用多份人源血清鑒定被檢紅細(xì)胞,吸收放散試驗(yàn),分子生物學(xué)，唾液A或B或H物質(zhì)檢測(cè)(凝集抑制試驗(yàn))。

弱凝集：用凝聚胺法增加敏感性

過(guò)量血型特異性物質(zhì)：血球洗滌2－3次。

自身免疫性疾?。赫ㄓ肊DTA抗凝血，反定用洗滌EDTA抗凝血球吸收的自身血清。

低丙種球蛋白：用增強(qiáng)敏感性的方法如凝聚胺法，酶

法。

年齡：新生兒，＜1歲，＞60歲第38頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

正反定型不一致應(yīng)考慮如下因素：生理鹽水洗滌紅血球了嗎？紅細(xì)胞新鮮否？是用較敏感的試管法，卡式法嗎？年齡：＜1歲，＞60歲低丙球？高蛋白血癥？其他疾??？自身免疫病？孕婦（孕期血清有抗A或抗B反應(yīng)）？輸過(guò)血（混合外觀）？第39頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

Rh定型和定型試驗(yàn)中應(yīng)注意的問(wèn)題

Rh定型主要鑒定D抗原，定型時(shí)應(yīng)按抗D血清試劑的使用說(shuō)明進(jìn)行，并注意設(shè)立對(duì)照試驗(yàn)系統(tǒng)。對(duì)獻(xiàn)血者需檢查和確定弱反應(yīng)性的D抗原。受血者無(wú)需鑒定弱D。只有病人有抗D以外的抗體時(shí)才有必要確定獻(xiàn)血者Rh（D）以外的抗原，選擇抗體對(duì)應(yīng)的陰性抗原血液和病人配血，可避免溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生。第40頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二導(dǎo)致Rh血型鑒定可能出現(xiàn)假陽(yáng)性的原因：（1）受檢細(xì)胞已被免疫球蛋白致敏，或標(biāo)本血清中含有引起紅細(xì)胞凝集的因子。（2）受檢細(xì)胞與抗血清孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，含高蛋白的定型試劑會(huì)引起細(xì)胞串錢(qián)狀形成。（3）定型血清中含有事先未被檢測(cè)的其它特異性抗體，造成假陽(yáng)性定型結(jié)果。（多見(jiàn)于人源抗D）（4）多凝集細(xì)胞造成定型的假陽(yáng)性。（多見(jiàn)于人源抗D）（5）檢定用器材或抗血清被污染，造成假陽(yáng)性

洗滌紅細(xì)胞，自身對(duì)照第41頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二導(dǎo)致Rh血型鑒定可能出現(xiàn)假陰性的原因：（1）受檢細(xì)胞懸液濃度太高，與抗血清比例失調(diào)。（2）漏加或錯(cuò)加定型血清。（3）離心后重懸細(xì)胞扣時(shí)，搖動(dòng)用力時(shí)度，搖散微弱的凝（4）抗血清保存不當(dāng)，導(dǎo)致失效。第42頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

4）

不規(guī)則抗體篩選所謂不規(guī)則抗體是指抗A、抗B以外的血型抗體。大約有0.3%~2%的群體血清中含有同種抗體。對(duì)外來(lái)紅細(xì)胞抗原的免疫可能由妊娠、輸血或故意注射免疫物質(zhì)而引起。抗體篩選試驗(yàn)的原則是用受檢的血清與特殊的試劑紅細(xì)在不同的介質(zhì)中起反應(yīng)，以發(fā)現(xiàn)在37℃中有反應(yīng)活性的抗體。目的是發(fā)現(xiàn)有臨床意義的不規(guī)則抗體。第43頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

方法常使的試驗(yàn)方法有鹽水介質(zhì)試驗(yàn)法、低離子強(qiáng)度介質(zhì)法（LISS）、酶技術(shù)、抗球蛋白試驗(yàn)、Polybrene及其改良法、微柱凝膠技術(shù)等等，可按抗體的血清學(xué)行為和試驗(yàn)的具體條件選擇，但必須做抗球蛋白試驗(yàn)確證。第44頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

篩選細(xì)胞的組成

通常是以2~3個(gè)單人份的O型紅細(xì)胞組成一套篩選細(xì)胞試劑，包括以下常見(jiàn)的抗原：

D,C,E,c,e,M,N,S,s,P,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb,Jka,Jkb

抗體鑒定

抗體篩選試驗(yàn)陽(yáng)性，應(yīng)作抗體鑒定試驗(yàn)，以確定其特異性。篩選細(xì)胞濃度（4％？0.8％？）和質(zhì)量第45頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二三、交叉配血交叉配血試驗(yàn)也稱配合性試驗(yàn)，實(shí)際上是檢查不配合性，使病人和獻(xiàn)血者血液之間沒(méi)有可測(cè)到的不相配合的抗原、抗體成份。

第46頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二1.交叉配血的主要作用

（1）大多數(shù)情況下能證實(shí)獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞與病人的ABO血型是配合的。（2）能檢查出存在于病人血清中的針對(duì)獻(xiàn)血者紅細(xì)胞的大多數(shù)抗體。（3）有無(wú)工作上的差錯(cuò)事故（如認(rèn)錯(cuò)病人，拿錯(cuò)血袋等）。第47頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

2.交叉配血不能解決的問(wèn)題：（1）保證輸入的紅細(xì)胞有正常存活率。（2）防止病人的免疫作用。（3）從病人的血清中檢出所有紅細(xì)胞抗體。（4）防止由于針對(duì)獻(xiàn)血者抗原而發(fā)生的記憶性抗體應(yīng)答引起的遲延性溶血性反應(yīng)。病人以前就有此種抗體但未能查出這種免疫作用。(5）檢查出獻(xiàn)血者或病人中所有的ABO血型錯(cuò)誤。(6）檢查出獻(xiàn)血者或病人中所有的Rh血型錯(cuò)誤。(7)檢出對(duì)紅細(xì)胞以外的抗體（如血小板、白細(xì)胞、血清蛋白抗體等）。第48頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二3.配血試驗(yàn)的內(nèi)容包括（1）病人血清對(duì)供者紅細(xì)胞檢測(cè)對(duì)供者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體，一般稱為“主側(cè)”配血。（2）病人紅細(xì)胞對(duì)供者血清檢測(cè)對(duì)受者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體，一般稱為“次側(cè)”配血。

（3）病人血清對(duì)病人紅細(xì)胞稱為“自身對(duì)照”試驗(yàn)。目的是顯示或排除自身抗體，直接抗球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性及紅細(xì)胞串錢(qián)狀假陽(yáng)性的存在第49頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

4.常用的配血方法酶技術(shù)配血方法凝聚胺（Polybrene）交叉配血法抗球蛋白配血法微柱凝膠法第50頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二5.配血試驗(yàn)中可能出現(xiàn)的一些特殊問(wèn)題

1）緡錢(qián)狀（串錢(qián)狀）的形成常見(jiàn)于多發(fā)性骨髓瘤，巨球蛋白血，以及其它表現(xiàn)為血沉加速的一些病例中。緡錢(qián)狀凝集現(xiàn)象，也稱串錢(qián)狀凝集。這是在鹽水介質(zhì)的凝集試驗(yàn)中，常見(jiàn)到的一種假凝集，特點(diǎn)是：①在顯微鏡下紅細(xì)胞膜完整，細(xì)胞間界限清晰地成緡錢(qián)串聚集。②緡錢(qián)狀假凝集反應(yīng)不受溫度影響，室溫與37℃結(jié)果一樣。③抗人球蛋白試驗(yàn)陰性第51頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

多種原因可以引起紅細(xì)胞緡錢(qián)狀凝集，常見(jiàn)原因：

?某些疾病致血漿球蛋白異常時(shí)，如高球蛋白血癥、巨球蛋白血癥時(shí)會(huì)出現(xiàn)緡錢(qián)狀凝集；?病人在使用大分子右旋糖酐和羥乙基淀粉溶液作血容量擴(kuò)張劑時(shí)，也可以產(chǎn)生緡錢(qián)狀凝集；?用玻片法試驗(yàn)時(shí)，如溫度過(guò)高、時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，也容易發(fā)生這種假凝集，因?yàn)椴Ｆ佑|面大，液體的蒸發(fā)面也大，致使血清容易濃縮。第52頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二緡錢(qián)狀凝集的處理

?實(shí)驗(yàn)中遇到緡錢(qián)狀凝集時(shí)，可將血清適當(dāng)稀釋后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

?在顯微鏡下觀察到緡錢(qián)狀凝集時(shí)，加1滴生理鹽水到反應(yīng)物并混勻，通?？梢韵@種假凝集。

?做試管法實(shí)驗(yàn)時(shí)如發(fā)現(xiàn)緡錢(qián)狀凝集，可將試管離心，傾去上清液，瀝干，再加2滴生理鹽水重懸，假凝集會(huì)消失，真凝集不會(huì)消失，嚴(yán)重的可重復(fù)一次。緡錢(qián)狀形成不影響間接抗球蛋白試驗(yàn)。第53頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

2）交叉配血試驗(yàn)結(jié)果不相容，顯示有未檢明的同種抗體存在。

2）在抗球蛋白試驗(yàn)中顯示有自身抗體存在。

3）存在抗體篩選試驗(yàn)陰性但交叉配血結(jié)果陽(yáng)性現(xiàn)象，提示可能有未檢明的稀有抗體存在。4）配血試驗(yàn)中,離心力不當(dāng)，選成了假陰性或假陽(yáng)性。

5）水浴箱溫度不正確，造成錯(cuò)誤結(jié)果。

6）紅細(xì)胞不正確洗滌和懸浮，使抗球蛋白試驗(yàn)出現(xiàn)假陰性。

7）血清中如含有溶血性抗體，則相應(yīng)紅細(xì)胞被溶解而不是凝集，交叉配血結(jié)果應(yīng)視為陽(yáng)性反應(yīng)（先滅火補(bǔ)體）。

第54頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

紅細(xì)胞：

EDTA或枸櫞酸抗凝，NS洗滌三次，配制成2－5％NS懸液；紅細(xì)胞濃度太高產(chǎn)生假陰性；凝集胺配血主管無(wú)凝集，但病人出現(xiàn)高熱，發(fā)生溶血。血清：干燥管凝血，離心分離血清(或血漿)第55頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二如凝集不散，則作如下處理：

?

37℃溫育排除冷凝聚

?凝聚紅細(xì)胞用NS洗滌一次排除蛋白質(zhì)等促凝因素?

?病人血清＋試劑紅細(xì)胞排除血型不規(guī)則抗體（抗體篩選）?病人、獻(xiàn)血者血型重新正反定型?獻(xiàn)血者紅細(xì)胞有無(wú)自身凝聚?排除獻(xiàn)血者紅細(xì)胞直抗陽(yáng)性第56頁(yè)，共64頁(yè)，2023年，2月20日，星期二交叉配血主側(cè)不合主側(cè)不合+抗篩陰性+自身對(duì)照陰性：

ABO血型不正確（復(fù)查血型），患者血清可能含有一種ABO抗體（亞型鑒定），篩選細(xì)胞上無(wú)相應(yīng)抗原（尋找相合血液），供者DAT陽(yáng)性（更換供者）。

主側(cè)不合+抗篩陽(yáng)性+自身對(duì)照陰性：抗原抗體反應(yīng)（抗體鑒定，尋找相合血液）主側(cè)不合+抗篩陽(yáng)性+自身對(duì)照陽(yáng)性：患者存在自身抗體（自身吸收做平行試驗(yàn)），或者異體抗體（抗體鑒定，尋