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文檔簡介

實驗十二pH對酶活性的影響

Exp.12

EffectofChangesinpH

onEnzymeActivity

一、實驗原理

酶的活性，受環(huán)境pH的影響極為顯著，通常只在一定的pH范圍內，酶才表現(xiàn)出活性，當酶活性達到最高時的pH值稱為該酶的最適pH(optimumpH)，低于或高于最適pH時，酶的活性依次降低，酶的最適pH受底物性質和緩沖液性質的影響。不同酶的最適pH不同。但與該酶在生物體內存在的部位有關，例如高等動物的胃蛋白酶最適pH為1.5～2.5，而胃液的pH與此相近，胰蛋白酶的最適pH為8左右，而十二指腸附近腸道的pH值近乎中性。本實驗使用唾液淀粉酶(salivaryamylase

)來說明pH對酶活性的影響。唾液淀粉酶的最適pH為6.8，有人發(fā)現(xiàn)該酶在磷酸緩沖液中，其最適pH為6.4～6.6。三、方法和步驟1、取8個50毫升錐形瓶，編號。按下表中的比例，用吸量管加入0.2M磷酸氫二鈉溶液和0.1M檸檬酸溶液，制備pH5.0～8.0的8種緩沖溶液。表1.pH5.0～8.0的8種緩沖溶液的制備錐形瓶號0.2M磷酸氫二鈉/ml0.1M檸檬酸/ml

緩沖液pH123456785.156.056.617.287.728.249.089.724.853.953.392.722.281.760.920.285.05.86.26.66.87.07.48.02、由8個錐形瓶中，各取緩沖液3ml，分別注入8支帶有編號的試管中，隨后于每個試管中，添加0.5%淀粉溶液2ml和稀釋200倍的唾液2ml。(增加1個和5號內容相同的試管，作為檢驗淀粉的水解程度)向各試管加入稀釋唾液的時間間隔各為1分鐘。將各試管內容物混勻，并依次置于37℃恒溫水浴中保溫。3、5分鐘后（視酶的活性而定，一般5～10分鐘），每隔1分鐘由第5號試管之一吸取1滴混合液，置于白磁板上，加一小滴碘化鉀—碘溶液，檢查淀粉的水解程度，使實驗結果成為橙黃色時，向所有試管依次添加1～2滴碘化鉀-碘溶液，充分混勻。加碘化鉀溶液時間間隔，由第一管起，也均為1分鐘，

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