單克隆抗體技術(shù)及其應(yīng)用課件

單克隆抗體技術(shù)及其應(yīng)用報(bào)告人：楊金先1975年，Kohler和Milstein建立了淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)，兩人由此杰出貢獻(xiàn)而榮獲1984年度諾貝爾生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。單克隆抗體（monoclonalantibody）：針對(duì)預(yù)定抗原的同一抗原決定簇的，高度同質(zhì)的，且能保證無限量供應(yīng)的抗體。單克隆抗體技術(shù)的理論依據(jù)：抗體的多樣性、克隆選擇學(xué)說、抗體基因的重排理論、抗體結(jié)構(gòu)與生物合成機(jī)制。單克隆抗體技術(shù)簡介單克隆抗體制備過程（示意圖）克隆形成單克隆細(xì)胞→擴(kuò)大培養(yǎng)，制備抗體、液氮凍存SP2/OB細(xì)胞細(xì)胞融合有限稀釋法進(jìn)行單克隆細(xì)胞融合的方法：1、仙臺(tái)病毒2、PEG/DMSO3、電融合嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，防止污染（細(xì)菌、霉菌、支原體、細(xì)胞）根據(jù)實(shí)驗(yàn)的目標(biāo)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞的檢測與篩選，（ELISA、IFA、凝集、中和，……）對(duì)篩選得到的陽性細(xì)胞克隆進(jìn)行早期單克?。ㄓ邢尴♂尫ǎ┰趩慰寺〖?xì)胞建株過程中不定期驗(yàn)證檢測防止單克隆細(xì)胞過度生長——老化死亡

單克隆抗體制備過程的注意事項(xiàng)單抗Monoclonalantibody由雜交瘤細(xì)胞系產(chǎn)生的，針對(duì)同一抗原決定簇的抗體——高度均質(zhì)。由同一個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的同異質(zhì)的抗體組成，是針對(duì)抗原的單一決定簇抗體。單抗純度高，專一性強(qiáng)、重復(fù)性好。無披次差異。易于標(biāo)準(zhǔn)化。能保證無限量供應(yīng)。單克隆抗體與免疫血清的比較免疫血清又稱多克隆抗體（polyclonalantibody），簡稱多抗。由不同B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的異質(zhì)的抗體組成，是針對(duì)多個(gè)不同抗原決定簇抗體的混合物。通常含有針對(duì)其他無關(guān)抗原的抗體和血清中其他蛋白質(zhì)成分——特異性差。不同批次的抗體制劑質(zhì)量差異很大。難以工業(yè)化批量制備。

單克隆抗體技術(shù)的應(yīng)用2、治療試劑病毒等微生物的中和抗體抗毒素—蛇毒、破傷風(fēng)毒素，等被動(dòng)免疫治療制劑“生物導(dǎo)彈”

??????3、分子生物學(xué)研究工具蛋白質(zhì)等生物活性分子的純化；細(xì)胞生物學(xué)——組織定位；分子病毒學(xué)——結(jié)構(gòu)分析；特定生物分子的功能研究；1、免疫學(xué)快速診斷試劑（抗體）細(xì)菌病毒腫瘤因子特定蛋白農(nóng)殘檢測

??????診斷技術(shù)方法：ELISA（間接法、夾心法、競爭法）免疫熒光法膠體金放射免疫法??????我們實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)制備的單克隆抗體魚類Ig單抗歐洲鰻血清IgM歐洲鰻粘膜Ig石斑魚IgM大黃魚IgM鱖魚IgM鮰魚IgM病原微生物嗜水氣單胞菌殺鮭氣單胞菌雞IBDV中和單抗豬PRRSV豬旋毛蟲囊蚴小瓜