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文檔簡介

多聚酶鏈式反應擴增DNA片斷細胞內和細胞外DNA復制環(huán)境的區(qū)別體內DNA的復制體外的模擬模板（母鏈）細胞內源外源加入引物引物合成酶外源加入底物dNTP細胞內源外源加入聚合酶細胞內源外源加入反應環(huán)境細胞內環(huán)境緩沖液PCR儀微量離心管微量移液器靶序列靶序列PCR循環(huán)第一步：加熱變性靶序列靶序列引物Ⅰ引物Ⅱ5’3’5’5’3’5’3’3’TaqDNA聚合酶PCR循環(huán)第三步：引物延伸靶序列

靶序列第1個PCR循環(huán)完成后：得到兩個拷貝的靶序列循環(huán)數(shù)變性復性延伸第一次94°C，10min－－30次９4℃，30s55℃，30s72℃，1min最后一次72℃，10min④計算DNA含量（g

）＝50x(260nm的讀數(shù)）x稀釋倍數(shù)50：1g/ml的DNA在厚度為1cm比色杯中的吸光值為0.02比色杯實驗小結PCR儀加熱使（）變性,復性使引物與模板DNA（）,延伸需將反應溫度升至中溫(),在（）的作用下,以（）為原料,以（）為復制的起點,合成新鏈。如此重復改變反應溫度,經(jīng)（）三個階段為一個循環(huán),每一次循環(huán)使特異區(qū)段的基因拷貝數(shù)放大一倍,一般樣品是經(jīng)過30次循環(huán),最終使基因放大了數(shù)百萬倍;將擴增產(chǎn)物進行電泳,經(jīng)溴化乙錠染色,在紫外燈照射下肉眼能見到擴增特異區(qū)段的DNA

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