紫外可見分光光度計(jì)的使用

紫外可見分光光度計(jì)的使用第1頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日主要內(nèi)容1、工作原理及儀器組成2、分光光度計(jì)的使用

波長(zhǎng)掃描

定量測(cè)定3、注意事項(xiàng)第2頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日第3頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日物質(zhì)的顏色與吸收光的關(guān)系：當(dāng)白光照射到物質(zhì)上時(shí)，如果物質(zhì)對(duì)白光中某種顏色的光產(chǎn)生了選擇性的吸收，則物質(zhì)就會(huì)顯示出一定的顏色。物質(zhì)所顯示的顏色是吸收光的互補(bǔ)色。一、工作原理及儀器組成第4頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日互補(bǔ)色原理植物葉子呈現(xiàn)綠色是因?yàn)橹参镏写嬖谝环N吸收藍(lán)紫光和紅光的載體——葉綠素顏色的產(chǎn)生第5頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日完全吸收完全透過(guò)吸收黃色光光譜示意表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光第6頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日利用一定頻率的紫外--可見光照射分析物，它將有選擇地被吸收。吸收光譜可以反映出物質(zhì)的特征。

溶液對(duì)光的作用示意圖物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收－溶液對(duì)光的作用

第7頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日I0入射光輻射強(qiáng)度I透射光輻射強(qiáng)度T透射比a吸光系數(shù)ε摩爾吸光系數(shù)光吸收遵循朗伯-比爾定律：溶液對(duì)光吸收過(guò)程第8頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日0.575光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示儀器組成-單光束分光光度計(jì)第9頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日雙光束分光光度計(jì)比值光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示光束分裂器第10頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日組成：光源、單色器、樣品池、檢測(cè)器1．光源：①能提供連續(xù)的輻射；②光強(qiáng)度足夠大；③在整個(gè)光譜區(qū)內(nèi)光譜強(qiáng)度不隨波長(zhǎng)有明顯變化；④光譜范圍寬；⑤使用壽命長(zhǎng)，價(jià)格低。

鎢燈——可見光區(qū)320～2500nm氫燈或氘燈——紫外光區(qū)195－375nmU3010（碘鎢燈、氘燈）波長(zhǎng)范圍190-900nm

第11頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日2．單色器：包括狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件單色器是分光光度計(jì)的心臟部分，它的作用是把來(lái)自光源的混合光分解為單色光并能隨意改變波長(zhǎng)。它的主要組成部件和作用是：①入射狹縫——限制雜散光進(jìn)入。②色散元件——即棱鏡或光柵，是核心部件，可將混合光分解為單色光。

③準(zhǔn)直鏡——把來(lái)自入射狹縫的光束轉(zhuǎn)化為平等光，并把來(lái)自色散元件的平等光聚焦于出射狹縫上。④出射狹縫——只讓特定波長(zhǎng)的光射出單色器。

第12頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日3.吸收池玻璃——由于吸收紫外UV光，僅適用于可見光區(qū)；石英——適用于紫外和可見光區(qū)4．檢測(cè)器：將光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)的裝置光電管光電倍增管二極管陣列檢測(cè)器5．記錄裝置：訊號(hào)處理和顯示系統(tǒng)第13頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日第14頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日Slit1不存在，Mirror取代了光柵grating1Grating2variable-pitchaberration-correcteddiffractiongrating旋轉(zhuǎn)鏡將光分成兩束，分別通過(guò)參比池和樣品池，然后聚集在PMT第15頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日第16頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日開始程序啟動(dòng)按方法設(shè)定按鈕掃描范圍讀數(shù)方式掃描速度按樣品名輸入按鈕或?qū)⒖瞻讟悠贩謩e放入?yún)⒈瘸睾蜆悠烦剡M(jìn)行用戶基線校正按按鈕將樣品放入樣品池開始測(cè)量按按鈕開始測(cè)量打印數(shù)據(jù)按按鈕打開數(shù)據(jù)處理界面數(shù)據(jù)檢索峰值檢出圖譜平滑、求導(dǎo)二分光光度計(jì)的使用-波長(zhǎng)掃描第17頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日啟動(dòng)UVSolution軟件

打開儀器主機(jī)電源。用鼠標(biāo)點(diǎn)擊Windows開始菜單中的[HitachiApplications]選項(xiàng)中的[UVSolutions2.0]選項(xiàng)?；蛘咧苯釉谧烂嫔想p擊UVSolution圖標(biāo)。第18頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日

2運(yùn)行UVSolution軟件。軟件將自動(dòng)配置計(jì)算機(jī)的串行口（RS232Port）見圖第19頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日儀器在初始化過(guò)程中進(jìn)行如下自檢工作：ROM檢測(cè)RAM檢測(cè)波長(zhǎng)步進(jìn)電機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)檢測(cè)氘燈點(diǎn)亮檢測(cè)鎢燈點(diǎn)亮檢測(cè)儀器波長(zhǎng)校正第20頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日3儀器主機(jī)開始初始化。見圖第21頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日4儀器主機(jī)初始化完畢，進(jìn)入工作狀態(tài)。第22頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日5測(cè)量參數(shù)設(shè)置1在[Edit]菜單中選擇[Method…]選項(xiàng)，或按按鈕。出現(xiàn)下列窗口。

第23頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日General:總體設(shè)置頁(yè)面Measurement測(cè)量:

Wavelengthscan波長(zhǎng)掃描Timescan時(shí)間掃描

Photometry定波長(zhǎng)測(cè)量Operator操作者:輸入操作者的姓名Instrument儀器:儀器型號(hào)由軟件自動(dòng)從儀器主機(jī)獲得。UseSampleTable使用樣品表:選擇是否使用樣品表。Comments備注:填寫一些備注信息。[Load]按鈕:用于裝載原來(lái)保存的方法文件。[Save]按鈕:保存當(dāng)前的設(shè)置參數(shù)。[SaveAs]按鈕:將當(dāng)前設(shè)置參數(shù)另存為一個(gè)方法文件。第24頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日Instrument儀器參數(shù)設(shè)置頁(yè)面第25頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日Datamode讀數(shù)顯示方式，選擇Abs吸光度，波長(zhǎng)掃描的起止范圍一般為190-800，狹縫值一般為2Light一般選擇“Auto”第26頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日Monitor顯示頁(yè)面

第27頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日Processing數(shù)據(jù)處理頁(yè)面

第28頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日Report報(bào)告結(jié)果頁(yè)面

第29頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日樣品名設(shè)置，備注信息及文件名輸入第30頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日基線校正用戶基線校正方法：可將scanspeed設(shè)小一些；進(jìn)行樣品掃描時(shí)，可設(shè)大一些。將空白樣品分別放入樣品室的參比光路和樣品光路。按按鈕系統(tǒng)基線校正方法。使用空氣作為參比和樣品。按按鈕出對(duì)話框見圖，選擇System后按[OK]按鈕，進(jìn)行系統(tǒng)基線校正。第31頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日測(cè)量有兩種方法可以開始測(cè)量：使用菜單方式選擇[Spectrophotometer]菜單下Start]選項(xiàng)開始測(cè)量使用按鈕方式：按按鈕開始測(cè)量如果要終止掃描按按鈕。第32頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日開始程序啟動(dòng)按方法設(shè)定按鈕按樣品名輸入按鈕或?qū)⒖瞻讟悠贩謩e放入?yún)⒈瘸睾蜆悠烦貙悠贩湃霕悠烦亻_始測(cè)量按按鈕開始測(cè)量打印數(shù)據(jù)按按鈕打開數(shù)據(jù)處理界面進(jìn)行用戶基線校正按按鈕定量測(cè)量設(shè)置波長(zhǎng)輸入標(biāo)樣二分光光度計(jì)的使用-光度法第33頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日測(cè)量參數(shù)設(shè)置在[Edit]菜單中選擇[Method…]選項(xiàng)。出現(xiàn)下列設(shè)置窗口.第34頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日具體操作程序Method:general:Measurement測(cè)量方式選擇Photometry（光度計(jì)測(cè)量）

Quantitation定量參數(shù)設(shè)置頁(yè)面：第35頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日在measure中選擇波長(zhǎng)wavelength，在Calibration中選擇“1storder”，“2storder”，“3storder”，也可以不校準(zhǔn)。在concertration中鍵入標(biāo)準(zhǔn)濃度單位。3.Instrument第36頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日4

standards標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)設(shè)置

鍵入標(biāo)系的樣品濃度及名稱第37頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日5吸光度自動(dòng)校零在開始測(cè)試前，需要進(jìn)行吸光度校零。在樣品室參比和樣品光路中分別放入空白樣品。按按鈕進(jìn)行吸光度校零。

6在wavelength中設(shè)定掃描的最大吸收波長(zhǎng)，7放入標(biāo)樣，選中第一個(gè)標(biāo)樣，點(diǎn)measure依次測(cè)定完成后自動(dòng)給出標(biāo)準(zhǔn)曲線。8選擇SAMPLE進(jìn)行樣品測(cè)定，全部測(cè)定完后點(diǎn)擊END，此時(shí)自動(dòng)生成一個(gè)文件，打開此文件，另存為所需的文件名。9關(guān)機(jī)時(shí)，先退出UVsolution，再關(guān)電腦，最后關(guān)光度計(jì)上的power。第38頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日三注意事項(xiàng)1.開機(jī)預(yù)熱15分鐘左右。2.測(cè)定時(shí)應(yīng)注意：參照池和吸收池應(yīng)是一對(duì)經(jīng)校正好的匹配的吸收池，材料和規(guī)格一致。使用前后應(yīng)將洗手池洗凈，測(cè)量時(shí)不能用手接觸窗口。已匹配好的比色皿不能用爐子和火焰干燥，不能加熱，以免引起光程長(zhǎng)度上的改變。第39頁(yè)，共42頁(yè)，2023年，2月20日，星期日3.測(cè)量條件的選擇：選擇適宜波長(zhǎng)的入射光:由于有色物質(zhì)對(duì)光有選擇性吸收,為了使測(cè)定結(jié)果有較高的靈敏度,必須選擇溶液最大吸收波長(zhǎng)的入射光?？刂莆舛華的準(zhǔn)確的讀數(shù)范圍:由朗伯-比耳定律可知,吸光度只有控制在0.2~0.7讀數(shù)范圍內(nèi)時(shí),測(cè)量的準(zhǔn)確度較高.選擇參比溶液：參比溶液是用來(lái)調(diào)節(jié)儀器工作零點(diǎn)的。若樣品溶液，試劑，顯色劑無(wú)色可用蒸餾水作參比溶液；反之應(yīng)采用不加顯色劑的樣品液作參比溶液。4.用完后先關(guān)程序，再關(guān)儀器開關(guān)，關(guān)電源，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。5.正確登記，將儀器及實(shí)驗(yàn)臺(tái)擦干凈。第40頁(yè)，共42