血液細胞分析儀原理及應用

血液細胞分析儀原理及應用第1頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日人類生理和病理變化，往往會引起血液組分的變化，所以及時了解血液組分的變化，可以為醫(yī)生提供診斷與治療疾病的重要依據(jù)。第2頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日紅細胞雙凹圓盤無核紅細胞的直徑在6～9μm之間，平均為7.2μm。成年男子的紅細胞個數(shù)為(4.6～6.2)×1012個/L成年女子的紅細胞個數(shù)為(4.2～5.4)×1012個/L第3頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日白細胞有核球形直徑為7～25μm。正常人的白細胞數(shù)目為(4～10)×109個/L第4頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日血小板兩面微凹的圓盤，受刺激時伸出偽足正常人的血小板值為(100～300)×109個/L，直徑為2～4μm。第5頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日血紅蛋白（血色素或血紅素）血紅蛋白存在于紅細胞中，是一種含鐵的色蛋白成年男子為120～160g/L成年女子為110～150g/L第6頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日血液細胞分析儀測量參數(shù)紅細胞RBC白細胞WBC血小板PLT血紅蛋白HGB紅細胞比容HCT平均紅細胞容量MCB平均血紅蛋白量MCH平均血紅蛋白濃度MCHC第7頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日一、血液細胞分析儀的發(fā)展簡史1956年美國科學家W.H.Coulter將電阻法計數(shù)粒子的專利技術應用于血細胞計數(shù)獲得成功其原理是根據(jù)血細胞非傳導的性質，以電解質溶液中懸浮血細胞在通過計數(shù)小孔時引起的電阻變化進行檢測為基礎，進行血細胞計數(shù)和體積測定，這種方法稱為電阻法或庫爾特原理。第8頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日國外廠商：日本SYSMEX美國beckman-coulter日本KOHDEN美國DANAM瑞典BOULE美國BAYER美國ABBOTT國內廠商：南昌特康南昌百特深圳邁瑞桂林百利特第9頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日二、血細胞計數(shù)檢測原理庫爾特計數(shù)原理白細胞分類及計算方法紅細胞計數(shù)核紅細胞比容測定原理血紅蛋白測定原理血小板計數(shù)原理其它參數(shù)計算方法五分類血液分析儀原理及應用機型第10頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日1.庫爾特計數(shù)原理庫爾特原理（coulterprinciple）：二、血細胞計數(shù)檢測原理第11頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日庫爾特原理懸浮在電解液中的顆粒/細胞，隨電解液通過小孔管時，因取代了相同體積的電解液，在恒電流設計的電路中導致小孔管內外兩電極間電阻發(fā)生瞬時變化，而產生了電位脈沖。脈沖信號的大小和次數(shù)與顆粒的大小和數(shù)目成正比。

二、血細胞計數(shù)檢測原理第12頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日2.白細胞分類及計算方法根據(jù)脈沖的大小，即可人為地將血內地白細胞分成幾群（二分群或三分群）三分類：淋巴細胞LY，單核細胞MO，粒細胞GI。五分類：淋巴細胞LY，單核細胞MO，粒細胞GI（中性細胞，嗜酸性細胞，嗜堿性細胞）電阻抗法白細胞“分類”不能代替顯微鏡涂片檢查二、血細胞計數(shù)檢測原理第13頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日在進行血細胞測定之前，全血標本必須用稀釋液在儀器外部或內部進行一定比例的稀釋，一般用1：251的稀釋倍數(shù)來測量白細胞儀器將從白細胞計數(shù)池中測量到體積>35fl顆粒產生的電子脈沖的數(shù)量作為白細胞計數(shù)，根據(jù)細胞稀釋倍數(shù)進行計算，得到正確的白細胞計數(shù)結果。二、血細胞計數(shù)檢測原理第14頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日儀器是如何進行細胞分群的呢？儀器除給出細胞數(shù)據(jù)結果外，同時提供出細胞體積分布圖形，這些可以表示出細胞群體分布情況的圖形被稱為直方圖它可以顯示出某一特定細胞群的平均細胞體積、細胞分布情況和是否存在明顯的異常細胞群直方圖是由測量通過感應區(qū)的每個細胞脈沖累積得到的，根據(jù)庫爾特原理可以在計數(shù)的同時進行分析測量。二、血細胞計數(shù)檢測原理第15頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日直方圖與脈沖信號的關系二、血細胞計數(shù)檢測原理第16頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日在進行白細胞分析時，儀器的計算機部分可以將白細胞體積從35～450fl分為256個通道，每個通道約為1.64fl，細胞根據(jù)其體積大小被分別放在不同通道中，從而得到白細胞體積分布的直方圖二、血細胞計數(shù)檢測原理第17頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日二、血細胞計數(shù)檢測原理第18頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日經過溶血劑處理后的白細胞根據(jù)體積大小可以初步確認其相應的種類：第一亞群（小細胞群）是淋巴細胞LYM；第二個亞群是單個核細胞群MONO，也被稱為中間細胞MID；相當于粒細胞的細胞群GRAN位于第三亞群（大細胞群）。二、血細胞計數(shù)檢測原理第19頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日二、血細胞計數(shù)檢測原理第20頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日儀器根據(jù)各細胞群占總體積的比例計算出各細胞群的百分比，如果與該標本為的白細胞總數(shù)相乘，即得到各項的絕對值注意，由于各廠家血細胞分析儀使用的稀釋液和溶血劑成分不完全相同，對白細胞膜的作用程度不同，所以儀器對各類白細胞區(qū)分界限的規(guī)定有所不同，在使用時不應隨意更換生產廠家試劑，防止造成錯誤報告。二、血細胞計數(shù)檢測原理第21頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日3.紅細胞計數(shù)和紅細胞比容測定原理大多數(shù)血細胞分析儀使用庫爾特法進行紅細胞計數(shù)核紅細胞比容測定，其原理同白細胞檢測一樣。

紅細胞通過小孔時，形成大小相應的脈沖，脈沖的多少即紅細胞的數(shù)目，脈沖的高度代表單個脈沖細胞的體積脈沖高度疊加，經過換算可得到紅細胞的比容HCT二、血細胞計數(shù)檢測原理第22頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日紅細胞比容的測定方法：紅細胞比容指紅細胞在全血中所占的容積百分比是用來檢測紅細胞數(shù)量的一個比值。先以單個脈沖細胞的高度計算紅細胞的平均體積MCV，再乘以紅細胞的數(shù)，得出紅細胞比容正常成年人的紅細胞比容,男性為40%-50%,女性為37%-48%。二、血細胞計數(shù)檢測原理第23頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日4.血紅蛋白測定原理一般采取比色法加入溶血劑，釋放血紅蛋白用HiCN生成氰化血紅蛋白，或是用SLS，光譜最大吸收在540nm附近。二、血細胞計數(shù)檢測原理第24頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日二、血細胞計數(shù)檢測原理第25頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日雙波長法測量血紅蛋白含量二、血細胞計數(shù)檢測原理第26頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日設在540nm處為λ1，690nm處為λ2，則在λ1時的吸光度為：式中，Aλ1為在λ1時的吸光度；Kλ1為在λ1時的吸光系數(shù)；C為待測物質濃度；L為吸收池厚度。AS1為光散射和背景吸光度。同樣對于λ2也有：二、血細胞計數(shù)檢測原理第27頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日因540nm和690nm相差不遠，可以吧AS1和AS2視為相等。因此透過比色皿的參考信號和樣品信號的吸光度之差ΔA為：二、血細胞計數(shù)檢測原理第28頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日5.血小板計數(shù)原理血小板隨紅細胞一起在一個系統(tǒng)中進行檢測，由于血小板體積與紅細胞體積有明顯的差異，儀器設定了特定的閾值，將高于閾值者定于紅細胞，反之為血小板。二、血細胞計數(shù)檢測原理第29頁，共31頁，2023年，2月20日，星期日血小板分別貯存于64個通道內，直方圖范圍為2-30fl。為了使血小板計數(shù)更準確，有些儀器專門設置了增加血小板準確性的計數(shù)，如鞘流計數(shù)、浮動界標、擬合曲線等二