蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)

蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)第1頁/共16頁實(shí)驗(yàn)基本教育和基本操作訓(xùn)練

蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)和兩性反應(yīng)

蛋白質(zhì)透析脫鹽

實(shí)驗(yàn)一第2頁/共16頁了解生化實(shí)驗(yàn)的基本目的和要求熟悉生化實(shí)驗(yàn)的常用儀器了解蛋白質(zhì)的沉淀、鹽析、兩性反應(yīng)及透

析脫鹽的原理掌握蛋白質(zhì)鹽析和透析等操作技術(shù)目的第3頁/共16頁實(shí)驗(yàn)基本教育和基本操作訓(xùn)練動(dòng)物生化實(shí)驗(yàn)的重要性生化分析技術(shù)與本專業(yè)之間的關(guān)系本學(xué)期實(shí)驗(yàn)安排與要求考核

總分100：40%為實(shí)驗(yàn)理論（閉卷）

30%為實(shí)驗(yàn)技能操作

40%平時(shí)（包括實(shí)驗(yàn)報(bào)告和平時(shí)）第4頁/共16頁實(shí)驗(yàn)安排

共有9個(gè)實(shí)驗(yàn)：動(dòng)醫(yī)、動(dòng)藥專業(yè)27學(xué)時(shí)（包括1-8個(gè)實(shí)驗(yàn)）動(dòng)科、水產(chǎn)專業(yè)18學(xué)時(shí)（包括1-6個(gè)實(shí)驗(yàn)）實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)基本教育和基本操作訓(xùn)練蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)和兩性反應(yīng)，蛋白質(zhì)透析脫鹽（3學(xué)時(shí)）實(shí)驗(yàn)二蛋白質(zhì)的定量測定----雙縮脲法測定蛋白質(zhì)濃度（3學(xué)時(shí)）*實(shí)驗(yàn)三唾液淀粉酶的活性觀察（3學(xué)時(shí)）實(shí)驗(yàn)四電泳技術(shù)概論血清蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電泳（3學(xué)時(shí)）實(shí)驗(yàn)五聚丙烯酰胺凝膠盤狀電泳分離血清蛋白（3學(xué)時(shí)）*實(shí)驗(yàn)六層析技術(shù)概論分子篩凝膠過濾分離血紅蛋白和核黃素（3學(xué)時(shí)）#實(shí)驗(yàn)七無蛋白血濾液的制備血糖的測定（3學(xué)時(shí)）*實(shí)驗(yàn)八動(dòng)物肝臟中DNA的提取和鑒定（3學(xué)時(shí)）*實(shí)驗(yàn)九脂質(zhì)的提取與薄層層析（3學(xué)時(shí)）#

注：*為綜合性實(shí)驗(yàn)

#為設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)第5頁/共16頁實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理（簡明，扼要）試劑與器材（簡單，主要試劑與器材）實(shí)驗(yàn)步驟（詳細(xì)）結(jié)果討論（實(shí)事求是，準(zhǔn)確）第6頁/共16頁實(shí)驗(yàn)1

蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)蛋白質(zhì)的水溶液是穩(wěn)定性的膠體溶液

穩(wěn)定的原因有兩個(gè)1水膜

2電荷蛋白質(zhì)沉淀

物理化學(xué)因素影響下，蛋白質(zhì)穩(wěn)定性遭到破壞，以固體的形式從溶液中析出的作用。包括可逆沉淀和不可逆沉淀

第7頁/共16頁可逆沉淀（鹽析和鹽溶）鹽溶（saltingin）

純水或低鹽溶液中溶解度較低的蛋白質(zhì)，通過增加無機(jī)鹽使溶解度增加鹽析（saltingout）

高濃度的中性鹽類可以脫去蛋白質(zhì)分子表面的水膜，并中和蛋白質(zhì)分子的電荷，從而使蛋白質(zhì)從溶液中沉淀下來的過程常用的中性鹽：硫酸銨，氯化鈉，硫酸鈉等

第8頁/共16頁不可逆沉淀有機(jī)溶劑沉淀：如乙醇、丙酮、生物堿試劑沉淀

:如苦味酸、三氯醋酸（TCA)、鎢酸等.在pH值小于蛋白質(zhì)pI時(shí)，其酸根負(fù)離子能與蛋白質(zhì)分子上的正離子相結(jié)合重金屬鹽沉淀：金屬正離子與蛋白質(zhì)分子中負(fù)電荷結(jié)合加熱或改變pH等第9頁/共16頁

本實(shí)驗(yàn)選用卵蛋白（結(jié)合蛋白）

卵清蛋白球蛋白角蛋白粘蛋白等從卵蛋白中分離出清蛋白和球蛋白？

第10頁/共16頁實(shí)驗(yàn)2蛋白質(zhì)的透析脫鹽透析法（dialysis）蛋白質(zhì)是生物大分子，分子的直徑在1-100nm之間，不能通過半透膜（有微孔的膜）；而無機(jī)鹽等小分子化合物能自由通過半透膜。利用這一特性，將蛋白質(zhì)與小分子化合物分離開來。這就是透析

本實(shí)驗(yàn)利用透析的方法把實(shí)驗(yàn)一鹽析中所用硫酸銨去掉，達(dá)到分離純化的目的實(shí)驗(yàn)所用半透膜：玻璃紙第11頁/共16頁實(shí)驗(yàn)3蛋白質(zhì)的兩性實(shí)驗(yàn)

---酪蛋白pI的測定蛋白質(zhì)與氨基酸類似，是兩性電解質(zhì)蛋白質(zhì)分子在等電點(diǎn)時(shí)不帶電荷，溶解度最低，容易聚集沉淀本實(shí)驗(yàn)利用溴甲酚綠做指示劑，根據(jù)顏色的變化和等電沉淀的原理，確定待測蛋白酪蛋白的pI第12頁/共16頁實(shí)驗(yàn)步驟見講義第13頁/共16頁實(shí)驗(yàn)結(jié)果從卵蛋白中分離并純化出清蛋白和球蛋白，確定可逆和不可逆沉淀劑