章9紫外可見吸收光譜課件

第九章紫外-可見分光光度法

（紫外-可見吸收光譜法）Ultraviolet-VisibleSpectrophotometryUV—Vis123一、紫外-可見吸收光譜與紫外-可見吸收光譜法1、紫外-可見吸收光譜:物質(zhì)分子、離子價電子在吸收紫外-可見輻射后，躍遷到高能級所產(chǎn)生的吸收光譜，稱～。2、紫外-可見吸收光譜法：利用物質(zhì)的分子或離子對紫外-可見光的吸收所產(chǎn)生的紫外-可見光譜特性及吸收程度對物質(zhì)的組成、含量和結(jié)構(gòu)

進(jìn)行分析、測定、推斷的分析方法?！?-1分子吸收光譜5二、紫外-可見光區(qū)：

三、分子的能級與紫外-可見吸收1、分子的運(yùn)動形式和能級分布波長范圍能量范圍真空（遠(yuǎn)）紫外區(qū)近紫外區(qū)可見光區(qū)10-200nm200-400nm400-800nm1.2×102～6.2ev6.2～3.1ev3.1～1.6ev電子運(yùn)動:價電子圍繞原子核的運(yùn)動；振動運(yùn)動：分子中原子在其平衡位置附近振動；轉(zhuǎn)動運(yùn)動：分子整體繞軸心或軸的轉(zhuǎn)動。6E分子=E電子+

E轉(zhuǎn)動

+

E振動1-20ev0.05-1ev0.05-0.005ev7四、紫外-可見吸收光譜特征及表示

1、紫外-可見吸收光譜特征（1）吸收光譜可能是無數(shù)條吸收譜線的集合

由于入射光不是單一波長的光，而是包含許多不同波長（不同能量）的光，所以在分子電子能級發(fā)生躍遷的同時，會發(fā)生振動和轉(zhuǎn)動能級的躍遷，即不只出現(xiàn)一條線光譜，而可能是無數(shù)條譜線的集合。（2）吸收光譜是帶光譜

由于存在各種譜線變寬因素（多普勒變寬、勞侖茲變寬等），當(dāng)產(chǎn)生的譜帶增寬超過相鄰譜線的間隔時，原來分立的線光譜成為帶光譜，因此，分子吸收光譜呈現(xiàn)帶光譜特征。9末端吸收最強(qiáng)峰肩峰峰谷次強(qiáng)峰maxmin

A2、紫外-可見吸收光譜表示：將不同波長的光依次通過一定濃度的溶液，分別測定每個波長下的吸光度，以波長λ為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，稱吸收光譜曲線。紫外-可見吸收光譜示意圖10五、紫外-可見分光光度法的應(yīng)用及特點(diǎn)1、應(yīng)用：不僅可進(jìn)行定量分析，還可利用吸收峰的特性進(jìn)行定性分析和簡單的結(jié)構(gòu)分析，還可測定一些平衡常數(shù)、配合物配位比等?？捎糜跓o機(jī)化合物和有機(jī)化合物的分析，對于常量、微量、多組分都可測定。2、特點(diǎn)：（1）靈敏度較高，可測定1%～10-5%含量11六、紫外-可見光譜（分子吸收）原子吸收光譜與比較1、相同點(diǎn)（1）同屬吸收光譜范疇（即都是在電磁輻射作用下，吸收輻射能，發(fā)生電子躍遷而產(chǎn)生）；（2）波長范圍均在近紫外到紅外區(qū)（190-900nm);（3）測量儀器組成部件類似。132、不同點(diǎn)（1）吸收機(jī)制不同原子吸收光譜：原子外層電子躍遷產(chǎn)生吸收；線狀光譜；譜線窄（1-5×10-3nm）（因?yàn)樵又挥须娮幽芗墸淮嬖谡駝?、轉(zhuǎn)動能級）分子吸收光譜：分子的價電子躍遷產(chǎn)生吸收；帶光譜；譜線寬（半寬度約10nm）原子吸收：銳線光源（空心陰極燈）分子吸收：連續(xù)光源（鎢燈或氘燈）14（3）儀器組件排列順序不同原子吸收：光源、原子化器、單色器、檢測器、數(shù)據(jù)輸出分子吸收：光源、單色器、吸收池、檢測器、數(shù)據(jù)輸出152、有機(jī)化合物價電子軌道及電子躍遷類型（1）軌道：電子圍繞分子或原子運(yùn)動的幾率分布。電子所具有的能量不同，軌道也不同。分子軌道能量高低σ＜π＜n＜π*＜σ*

成鍵軌道：σ，π反鍵軌道：σ*、π*非鍵軌道：n

17（2）電子躍遷類型條件：同種類型軌道上電子躍遷非鍵軌道上的電子躍遷n→π*躍遷σ→σ*n→σ*π→π*能量nσσ*π*π四種躍遷σ→σ*，n→σ*

，π→π*，n→π*分子中電子的能級和躍遷18（3）電子躍遷能量及光譜區(qū)域躍遷所需能量為：

σ→σ*n→σ*

π→π*n→π*所需能量最大，吸收在遠(yuǎn)紫外區(qū)遠(yuǎn)、近紫外區(qū)紫外-可見區(qū)3、幾個基本概念（1）紅移：化合物的λmax向長波方向移動；藍(lán)移：化合物的λmax向短波方向移動；增色效應(yīng)：使化合物吸收能力增強(qiáng)的效應(yīng)；減色效應(yīng)：使化合物吸收能力減弱的效應(yīng)。19例：λmax=254nmε

=230λmax=270nmε=1250生色團(tuán)—OH助色團(tuán)4、有機(jī)化合物中的價電子的躍遷（1）

σ→σ*躍遷成鍵σ電子躍遷反鍵σ*軌道特點(diǎn)：σ→σ*躍遷所需能量很大，相當(dāng)于遠(yuǎn)紫外的輻射能，＜200nm吸收輻射能21

CH4

λmax=125nmC2H6

λmax=135nm

22(2)

n→σ*躍遷

非鍵軌道電子反鍵σ*軌道特點(diǎn)：A這類躍遷所需能量比σ→σ*躍遷小，吸收波長增加，位于遠(yuǎn)紫外或紫外區(qū)（150~250nm）

B吸收概率較小，ε在102~103范圍內(nèi)，中吸收對象：含有未共用電子對的雜原子（N、O、S、X）的飽和化合物發(fā)生n→σ*躍遷;含-NH2

、-OH、-X例：CH3OHλmax=183nmCH3NH2

λmax=213nm吸收輻射能23(4)n→π*躍遷

非鍵n軌道電子

反鍵π*軌道

特點(diǎn)：A這類躍遷所需能量最小，吸收在紫外-可見光區(qū)（200~400nm）

B吸收強(qiáng)度小，ε

＜102，弱吸收對象：含雜原子的雙鍵不飽和有機(jī)化合物

C=SO=N--N=N-例：丙酮λmax=280nm

n→π*躍遷比π→π*躍遷所需能量小，吸收波長長。吸收輻射能25共同點(diǎn)：π→π*和n→π*躍遷都需要分子中不飽和基團(tuán)提供π軌道。區(qū)別：n→π*與π→π*躍遷的區(qū)別比較如下：

π→π*n→π*吸收峰波長與組成雙鍵的有關(guān)原子種類基本無關(guān)吸收強(qiáng)度強(qiáng)吸收104~105

弱吸收

＜102

極性溶劑向長波方向移動向短波方向移動（5）π→π*和n→π*躍遷比較26Ⅲ

B吸收帶和E吸收帶—苯環(huán)帶

B吸收帶：有苯環(huán)必有B帶，230-270nm之間有一系列吸收峰，中吸收，芳香族化合物的特征吸收峰

苯環(huán)上有取代基并與苯環(huán)共軛，精細(xì)結(jié)構(gòu)消失AλnmAλnmλmax長移苯吸收曲線λmax=254nm29E吸收帶：π→π*躍遷

E1=185nm強(qiáng)吸收ε

>104L/moLcmE2=204nm較強(qiáng)吸收ε

>103L/moLcm30

圖苯在乙醇中的紫外吸收光譜苯在λ＝185nm和204nm處有兩個強(qiáng)吸收帶，分別稱為E1和E2吸收帶，是由苯環(huán)結(jié)構(gòu)中三個乙烯的環(huán)狀共軛體系的躍遷產(chǎn)生的，是芳香族化合物的特征吸收。在230～270nm處有較弱的一系列吸收帶，稱為精細(xì)結(jié)構(gòu)吸收帶，亦稱為B吸收帶。B吸收帶是π→π*躍遷和苯環(huán)振動重疊引起。

精細(xì)結(jié)構(gòu)：315.常見有機(jī)化合物的紫外可見吸收光譜

（1）飽和烴及其衍生物：A飽和烴（脂肪烴、脂環(huán)烴）只有電子，產(chǎn)生σ→σ*躍遷，所需能量高，所產(chǎn)生有吸收在遠(yuǎn)紫外區(qū)，λmax

＜150nmB飽和烴衍生物（取代脂肪烴、脂環(huán)烴）如鹵代烴，醇，醚等可產(chǎn)生n→σ*躍遷，能量低于σ→σ*躍遷，吸收波長紅移，逐步向近紫外區(qū)。32

飽和化合物的紫外吸收光譜對分析測定用途不大，但它們是測定其它類型有機(jī)化合物紫外-可見吸收的良好溶劑。CH4λmax：125-135nmCH3Cl173nmCH3Br208nmCH3I259nm例：在正己烷溶劑中33（2）不飽和烴及其共軛烯烴A簡單的不飽和烴即含有孤立雙鍵的化合物，分子中有σ，π鍵，可產(chǎn)生σ→σ*，π→π*躍遷，一般位于遠(yuǎn)紫外區(qū)（175-200nm）含雜原子的雙鍵化合物可產(chǎn)生π→π*、n→π*、n→σ*。

B共軛雙鍵的化合物當(dāng)兩個或多個雙鍵共軛晨，使π→π*所需能量降低，吸收峰長移，吸收強(qiáng)度增強(qiáng)。34例：1，3-丁二烯217nm1,3,5-己三烯268nm1,3,5,7-辛四烯304nm1,3,5,7,9-癸五烯334nm35（3）羰基化合物羰基化合物含有C=O，存在σ、π、n電子，可產(chǎn)生σ→σ*、n→σ*、n→π*、π→π*四類躍遷，一般在近紫外、紫外區(qū)有吸收。

A醛、酮的n→π*吸收帶在270~300nm附近，強(qiáng)度低，

ε

為10~20，當(dāng)醛、酮的羰基與雙鍵共軛時，形成了，—不飽和醛酮，產(chǎn)生共軛，n→π*、π→π*躍遷的波長紅移。B羧酸羰基與雙鍵共軛時，產(chǎn)生n→π*、π→π*躍遷的波長長移

共軛使π*軌道能量降低。36（4）芳香族化合物AE帶和B帶是芳香族化合物的特征吸收帶，π→π*躍遷B當(dāng)苯環(huán)上有羥基、氨基等取代基時，吸收峰紅移，吸收強(qiáng)度增大。像羥基、氨基等一些助色團(tuán)，非鍵n電子，這樣才能與苯環(huán)上的電子相互作用，產(chǎn)生助色作用.C取代基不同，變化程度不同，可由此鑒定各種取代基例：B帶λmaxE2

λmax

苯254204甲苯262208

苯酚271213苯甲酸27223037二無機(jī)化合物的紫外-可見吸收光譜

（電子光譜）1.配位場躍遷產(chǎn)生無機(jī)化合物電子光譜的電子躍遷類別配位場躍遷電荷轉(zhuǎn)移躍遷配位場理論：中心離子與配位體的靜電引力是配合物穩(wěn)定的主要原因，但中心金屬離子原來能量相同的五個d軌道或七個f軌道在配位體靜電場的作用下，會分裂成幾組能量不等的d軌道或f軌道（軌道之間的能量差稱為分裂能），因而，當(dāng)他們的分子或離子38吸收光能后，低能態(tài)的d或f電子可以分別躍遷到高能態(tài)的d軌道或f軌道，由于這兩類躍必須在配體的配位場作用下才能產(chǎn)生，因此，稱之為配位場躍遷。（自由離子）（球性對稱的靜電場）（八面體場）正八面體場中d軌道的分裂39（自由離子）（球性對稱的靜電場）（四面體場）正四面體場中d軌道的分裂40配位場躍遷的特點(diǎn)：（1）吸收光譜一般位于可見區(qū)；（2）配位體的配位場越強(qiáng)，軌道分裂能越大，吸收波長越短，產(chǎn)生藍(lán)移。例：H2O的配位場強(qiáng)度＜NH3的配位場強(qiáng)度[Cu(H2O)4]2+吸收峰在794nm淺藍(lán)色[Cu(NH3)4]2+吸收峰在663nm深藍(lán)色一些配位體配位場強(qiáng)度順序I-

Br-

Cl-F-OH-C2O42-=H2OSCN-吡啶=NH3乙二胺聯(lián)吡啶鄰二氮菲NO2-CN-41（3）躍遷概率較小,摩爾吸光系數(shù)ε一般較小，只有~100L.mol-1·cm-1，定量分析價值不大,可用于配合物的結(jié)構(gòu)研究2.電荷遷移躍遷

指用電磁輻射照射化合物時，電子從給予體向與接受體相聯(lián)系的軌道躍遷。

電子從配位體軌道躍遷到中心金屬離子軌道e電子接受體電子給予體42產(chǎn)生電荷遷移躍遷的必要條件：一組分是電子給予體，另一組分是電子接收體。例:[Fe3+(SCN-)]2+[Fe2+（SCN)]2+

h特點(diǎn)：（1）電子給予體給電子能力越強(qiáng)（還原能力強(qiáng)），發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移躍遷所需能量小，吸收紅移；

紅色淡黃色43（2）電荷遷移躍遷光譜的摩爾吸光系數(shù)ε較大，一般在104L.mol-1·cm-1以上，是無機(jī)光譜分析的重要吸收，可提高檢測靈敏度。44§9~3光吸收基本定律一、朗伯-比耳定律（Lambert-BeerLaw）1、公式推導(dǎo)：當(dāng)一束平行單色光，照射到均勻、非散射介質(zhì)（固體、液體、氣體），It-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------反射光I0入射光透射光Ir

Ia吸收光入射光I0一部分吸收Ia一部分反射Ir一部分透過It根據(jù)光強(qiáng)度關(guān)系：

I0=Ia+Ir+It45當(dāng)測量時，采用相同的器皿，且光潔度很高時，

Ir很小且基本相同，可以相互抵銷、忽略，于是：

I0=Ia+ItI0一定時，Ia越大，It越小，吸收大；I0一定時，Ia越小，It越大，吸收??；定義：透光率（透光度）T為：研究表明，物質(zhì)對光的吸收強(qiáng)度Ia=f(λ，C，b)當(dāng)入射光波長λ一定時，Ia=f(C，b)46（1）朗伯（Lambert）定律（1760年Lambert發(fā)現(xiàn)）——光吸收強(qiáng)度與光程b關(guān)系I0dbbItII-dI若吸收溶液濃度一定，讓一定波長的單色光通過厚度（光程）為b的均勻、非散射介質(zhì)，如圖示：將吸收層分為無限薄的許多薄層db,設(shè)照射到薄層上的光強(qiáng)度為I，經(jīng)薄層吸收后，光強(qiáng)度減弱dI，則：47變化：積分：Lambert定律48（2）比耳（Beer）定律（1852年Beer發(fā)現(xiàn)）——光吸收強(qiáng)度與溶液濃度C關(guān)系若保持溶液厚度（光程）不變，用波長和強(qiáng)度一定的單色光照射不同濃度的溶液，研究發(fā)現(xiàn)：吸光溶液濃度每增加dC，光的吸收程度增加，相應(yīng)地，透射光強(qiáng)度減弱dI，同理有：類似推導(dǎo)可得：比耳定律49（3）Lambert-Beer定律若同時考慮吸光溶液濃度和光程的變化，則當(dāng)入射光波長一定時，有：

k：比例系數(shù)，與入射光波長、物質(zhì)性質(zhì)、溫度有關(guān)；I0：波長一定的入射光強(qiáng)度；It:通過濃度為C、厚度為b的均勻、非散射介質(zhì)后，透過光強(qiáng)度b:溶液厚度（光程）C：溶液濃度50已定義透光率：均勻變化取值范圍0～1;或0～100%I0一定，It

越大，T越大，越小，吸光程度??；I0一定，It

越小，T越小，越大，吸光程度大。定義：吸光度非均勻變化取值范圍0～51

T=0，A入射光全部被吸收；T=1，A=0，入射光全部透過溶液。Lambert-Beer定律：k:常數(shù)，用摩爾吸光系數(shù)表示，單位：<一般>104靈敏吸光物質(zhì)；103不靈敏吸光物質(zhì)；52例：光度分析中，在某濃度下，用厚度一定的比色皿測得透光率為T1，若濃度增大一倍，求透光率為多少？解：53二、對Lambert-Beer定律的偏離及原因1、對Lambert-Beer定律的偏離根據(jù)Lambert-Beer定律，當(dāng)固定吸收光程b不變時，即吸光度A與分析物濃度呈嚴(yán)格線性關(guān)系（通過零點(diǎn)），但在實(shí)際測定時，特別是在高濃度分析物下，常發(fā)生偏離現(xiàn)象，如圖：負(fù)偏差正偏差542、偏離Lambert-Beer定律的原因（1）非單色光引起的偏差嚴(yán)格講，Lambert-Beer定律只適用于一定波長的單色光，但實(shí)際上，即使最先進(jìn)的光度分析儀器，用最好的單色器，也不可能得到單一波長的光，只能得到一定波長范圍的光：

（詳見武大教材推導(dǎo)）（2）非正常吸收引起的偏差A(yù)吸光質(zhì)點(diǎn)散射：存在于測量溶液中的固體微粒對入射光散射引起吸光度的表觀增大。

55

Lambert-Beer定律只適用于均勻、非散射體系，實(shí)際測量溶液中，存在極少量的固體微粒，特別是在對膠體溶液、乳濁液或懸濁液測量時，存在嚴(yán)重的散射現(xiàn)象。散射結(jié)果吸收程度相對增大；透光率減小，實(shí)測吸光度增加，產(chǎn)生正偏差。B熒光效應(yīng)---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------hνhν’

當(dāng)吸光物質(zhì)吸收輻射后，分子又以熒光形式發(fā)射，結(jié)果使溶液透光率相對增大，吸光度減法，產(chǎn)生負(fù)偏差。56（3）溶液中吸光質(zhì)點(diǎn)的化學(xué)反應(yīng)引起的偏差

當(dāng)產(chǎn)生可見-紫外吸收的物質(zhì)因離解、締合、互變異構(gòu)等，導(dǎo)致吸光物質(zhì)濃度變化，從而對Lambert-Beer定律偏離。例：低濃度時，離解度大，高濃度時，離解度小，低濃度時，吸光度下降。57§9~4紫外-可見分光光度法儀器一、分類1、按使用的波長范圍

可見分光光度計(jì)紫外分光光度計(jì)紫外-可見分光光度計(jì)2、按功能來分單光束分光光度計(jì)雙光束分光光度計(jì)雙波長分光光度計(jì)58二、儀器結(jié)構(gòu)簡圖

光源

單色器

吸收池

檢測器信號處理及數(shù)據(jù)輸出復(fù)合光單色光I0透射光It三、主要部件功能簡介591、輻射光源（1）作用：提供能量足夠高的紫外、可見輻射，供吸光物質(zhì)吸收；（2）要求：

A能量足夠高；

B波長范圍盡可能寬；

C良好的穩(wěn)定性；

D使用壽命長。（3）常用光源可見光區(qū)：鎢燈320-2500nm優(yōu)點(diǎn)：發(fā)射強(qiáng)度大、使用壽命長60紫外光區(qū)：

氫燈或氘燈180-375nm氘燈的發(fā)射強(qiáng)度比氫燈大4倍玻璃對這一波長有強(qiáng)吸收，必須用石英光窗。紫外—可見分光光度計(jì)同時具有可見和紫外兩種光源。61棱鏡光柵：利用光的衍射與干射作用制成。玻璃棱鏡：適用400～800nm可見光區(qū)；石英棱鏡：適用180～400nm紫外光區(qū)；2、單色器（1）作用：從光源的連續(xù)光譜中，分出被測物質(zhì)所需要的、波長足夠窄的入射單色光的裝置，是分光光度計(jì)的心臟部件。（2）色散元件：棱鏡單色器的缺點(diǎn)是色散率隨波長變化，得到的光譜呈非均勻排列，而且傳遞光的效率較低。

光柵單色器在整個光學(xué)光譜區(qū)具有良好的幾乎相同的色散能力，使用波長范圍寬，分辨率高，成本低，易保存等，因此，現(xiàn)代紫外—可見分光光度計(jì)上多采用光柵單色器。62633、吸收池

（1）吸收池作用：是用于盛放待測溶液并提供一定吸光厚度的器皿。（2）類型玻璃吸收池：可見光區(qū)使用；石英吸收池：紫外光區(qū)使用（3）規(guī)格：0.5cm,1cm,2cm,5cm,10cm644、檢測器（1）檢測器的作用：檢測光信號，交將光信號轉(zhuǎn)變電信號。（2）要求：A靈敏度高；B穩(wěn)定性好；C響應(yīng)時間快（3）類型光電池光電管光電倍增管65A光電管光電管由一個半圓筒形陰極和一個金屬絲陽極組成。當(dāng)照射陰極上光敏材料時，陰極就發(fā)射電子。兩端加壓，形成光電流。——藍(lán)敏光電管為銫銻陰極。適用波長范圍：220-625nm——紅敏光電管為銀和氧化銫陰極適用波長范圍：600-1200nm。66B、光電倍增管光電倍增管是檢測微弱光信號的光電元件。它由密封在真空管殼內(nèi)的一個光陰極、多個倍增極（亦稱打拿極）和一個陽極組成。通常兩極間的電壓為75-100V，九個倍增極的光電倍增管的總放大數(shù)為106-107光電倍增管的暗電流是儀器噪音的主要來源675、信號處理及數(shù)據(jù)輸出系統(tǒng)由于透射光強(qiáng)度很弱，所以，照射到光電管后所產(chǎn)生的電流很小，需放大后才能測定，所以，通過系列信號放大過程后輸出結(jié)果。常用的顯示器有檢流計(jì)、微安計(jì)、電位計(jì)、數(shù)字電壓表、記錄儀、示波器。現(xiàn)代光度分析儀器已實(shí)現(xiàn)微機(jī)自動化，可直接輸出結(jié)果，并自動處理復(fù)雜的數(shù)據(jù)。68五、常用光度分析儀器介紹

（一）單光束分光光度計(jì)

國產(chǎn)721型、722型、UV-1100型、英國SP-500型0.575光源單色器吸收池檢測器顯示69（二）雙光束分光光度計(jì)

比值光源單色器吸收池檢測器顯示光束分裂器70（三）雙波長分光光度計(jì)一個光源，兩個單色器，一個吸收池光源單色器Ⅰ單色器Ⅱ吸收池檢測器12斬光器用兩種不同波長的單色光束交替照射到樣品溶液上，不需使用參比溶液，測得的是樣品在兩種波長下的吸光度之差711為選好的測定波長，一般為待測物質(zhì)的max2為選好的參比波長，一般為待測物質(zhì)的min測得的是樣品在兩種波長1和2處的吸光度之差A(yù)，A為扣除了背景吸收的吸光度A=A1-A2=（K1-K2）CL優(yōu)點(diǎn)：（1）大大提高了測定準(zhǔn)確度，可完全扣除背景（2）可用于微量組分的測定（3）可用于混濁液和多組分混合物的定量測定72§9-5紫外-可見分光光度法測量誤差及

分析條件一、光度測量誤差來源及誤差計(jì)算1、光度測量誤差來源

兩個原因化學(xué)因素引起的誤差：介質(zhì)不均勻、吸光質(zhì)點(diǎn)離解、締合、互變異構(gòu)等；儀器測量誤差：電子元件性能不穩(wěn)定、雜散光影響、單色器質(zhì)量等。其中，儀器測量誤差是影響光度分析準(zhǔn)確度的主要因素。732、儀器測量誤差在光度分析儀器中百分透光率標(biāo)尺刻度均勻，讀數(shù)誤差相等，約為：標(biāo)尺刻度均勻，A小，刻度稀疏，??；A大，刻度密集，大。74分析：小，但由于C小，所以，不一定?。划?dāng)C小，A小，小，根據(jù)當(dāng)C大，A大，大，根據(jù)大，所以，可能大；結(jié)論：無論高吸光度或低吸光度，均可能引起較大的濃度測量誤差。根據(jù)L-B定律：？75濃度測量相對誤差等于吸光度測量相對誤差，但不等于透光率測量相對誤差。推導(dǎo)：兩邊微分：76意義：濃度測量相對誤差不僅與儀器透光率讀數(shù)相對誤差相關(guān)，而且與透光率計(jì)數(shù)值大小相關(guān)。一般dT=±0.01，利用可計(jì)算不同T值時的大小。77一般透光率在10–80%吸光度在0.1–1.0濃度測量相對誤差較小。實(shí)際測量，一般選擇：T：15～65%A：0.2～0.8使?jié)舛葴y量誤差最小的透光率T稱為T最佳：顯然，要使最小，則需TlnT最大。78濃度測量相對誤差最小79二、分光光度法分析條件的選擇1、入射光波長選擇無干擾組分時：最大吸收原則（測定靈敏度高）有干擾組分時：吸收最大，干擾最?。y定準(zhǔn)確度高）。A470500nm丁二酮肟-鎳吸收曲線酒石酸鐵吸收曲線例：丁二酮肟光度法測鋼中鐵含量802、控制入射光強(qiáng)度（調(diào)節(jié)儀器狹縫寬度）狹縫寬度適當(dāng)太寬：光的單色性下降，偏離L-B定律嚴(yán)重，影響測定靈敏度。太窄：入射光強(qiáng)度減弱，影響測定靈敏度。3、控制適當(dāng)?shù)奈舛茸x數(shù)范圍一般選擇：T：15～65%A：0.2～0.8措施控制待溶液濃度：稱樣量，稀釋度（顯色前）選用不同寬度的比色皿（顯色后）814、選擇適當(dāng)?shù)膮⒈热芤簠⒈热芤海翰患语@色劑的試液

試液顯色劑溶劑吸光物質(zhì)參比液組成無吸收無吸收光學(xué)透明溶劑有吸收無吸收吸收無吸收吸收吸收顯色劑有吸收吸收吸收吸收顯色劑+試液+待測組分的掩蔽劑在光度分析中，用來調(diào)節(jié)分光光度儀器工作零點(diǎn)（T=100%，A=0），消除由于吸收池器壁反射及溶劑、顯色劑或干擾組分對入射光的吸收可能帶來的誤差。82三、“顯色”反應(yīng)及其影響因素1、概念：將待測組分轉(zhuǎn)變成在紫外-可見區(qū)能產(chǎn)生吸收的物質(zhì)的反應(yīng)，稱“顯色”反應(yīng)?！帮@色劑”：能與被測組分生成紫外-可見吸光化合物的試劑。X+R

XR被測組分“顯色劑”吸光物質(zhì)氧化還原反應(yīng)配位反應(yīng)832、分光光度法對顯色反應(yīng)的要求A選擇性好；B靈敏度高（值大）；C生成的吸光物質(zhì)組成恒定，性質(zhì)穩(wěn)定；D生成的吸光物質(zhì)的與顯色劑的明顯不同。843、“顯色反應(yīng)”條件A酸度影響B(tài)顯色溫度C顯色時間4、分光光度法提高測定選擇性的方法（干擾及消除）

A控制溶液酸度B加入掩蔽劑C改變干擾離子價態(tài)D選擇適當(dāng)?shù)膮⒈热芤篍選擇合適的測定波長F分離干擾離子85一、有機(jī)化合物雜質(zhì)的檢查

判斷雜質(zhì)存在與否

被檢對象：紫外-可見區(qū)無吸收；可能的雜質(zhì)：有吸收可通過測定紫外-可見光譜來確定是否存在可能雜質(zhì)例如要鑒定甲醇和乙醇中的雜質(zhì)苯，可利用苯在254nm處的B吸收帶，而甲醇或乙醇在此波長范圍內(nèi)幾乎沒有吸收?！?-6紫外-可見分光光度法測量方法與應(yīng)用86

用紫外可見吸收光譜鑒定未知物的結(jié)構(gòu)較困難，因譜圖簡單，吸收峰個數(shù)少，主要表現(xiàn)化合物的發(fā)色團(tuán)和助色團(tuán)的特征。利用紫外可見吸收光譜可確定有機(jī)化合物中不飽和基團(tuán)，還可區(qū)分化合物的構(gòu)型、構(gòu)象、同分異構(gòu)體二、結(jié)構(gòu)分析871.推測官能團(tuán)200～280nm無吸收不含不飽和鍵，不含苯環(huán)，可能是飽和化合物210～250nm強(qiáng)吸收π—π*，2個共軛單位260～350nm強(qiáng)吸收π—π*，3—5個共軛單位270～350nm弱吸收n—π*，無強(qiáng)吸收，孤立含雜原子的雙鍵C=O,-NO2,-N=N-260nm（230～270）中吸收π—π*，有苯環(huán)88

2.判斷同分異構(gòu)體酮式結(jié)構(gòu)，無共軛中吸收206nm(極性溶劑中為主）烯醇式結(jié)構(gòu)，共軛體系，強(qiáng)吸收=1.8104,245nm(非極性溶劑中為主）例：乙酰乙酸乙酯89三、定量分析

應(yīng)用范圍：1.單組分物質(zhì)的定量分析測定條件：A：選擇合適的分析波長（λmax）B：0.2-0.8C：選擇適當(dāng)?shù)膮⒈热芤簾o機(jī)化合物，測定主要在可見光區(qū)大約可測定60多種元素有機(jī)化合物，主要在紫外區(qū)90

（1）標(biāo)準(zhǔn)比較法（一