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文檔簡介

ELISA或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。受檢標(biāo)本與固相載體表形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。加原或抗體，通過反應(yīng)也結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)。3、ELISA實(shí)驗(yàn)流程示圖(以雙抗體夾心法為例)?4、試劑與耗材(1)包被緩沖液(pHM碳酸鹽緩沖液)：(2)洗滌緩沖液(pH，MPBS)：(3)稀釋液：(4)終止液(2MHSO)：24(5)底物緩沖液(pH)：(6)四甲基聯(lián)苯胺(TMB)使用液：(7)2，2’-連氮基-雙-3-乙基-苯丙噻唑啉磺胺(ABTS)使用液：(8)抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體：按說明書處理。(9)標(biāo)準(zhǔn)品：用稀釋液稀釋成梯度濃度溶液。(10)96孔聚苯乙烯塑料板(酶標(biāo)板)。2、實(shí)驗(yàn)步驟(雙抗體夾心法)：(1)包被：用包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1-10μg/mL。在酶標(biāo)板反應(yīng)孔中加mL，4℃內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗板3次，每次3min。(2)加樣：加一定濃度稀釋的待檢樣品(同時(shí)做空白對照，陰性對照孔及陽性對照)mL于上述已(3)加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)。(4)加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入現(xiàn)配的TMB底物溶液mL，37℃，10-30min。(5)終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入終止液mL。(7)以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫

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