XXXX年藥典附錄無菌檢查和微生物限度檢查法增修訂內(nèi)容

2010年版藥典附錄無菌檢查和微生物

限度檢查方法增修定內(nèi)容起草的指導(dǎo)思想一、以科學(xué)發(fā)展觀為統(tǒng)領(lǐng)，服務(wù)于資源節(jié)約型社會、環(huán)境友好型社會的要求；落實(shí)科學(xué)監(jiān)管理念，著力解決發(fā)展中的問題。二、與時俱進(jìn)，廣泛吸納先進(jìn)技術(shù)與成果；堅(jiān)持自主與創(chuàng)新；積極推進(jìn)藥品標(biāo)準(zhǔn)化戰(zhàn)略，提高我國藥品標(biāo)準(zhǔn)總體水平，著力提升《中國藥典》在國際社會中的地位和作用，提高綜合競爭力，促進(jìn)醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，為構(gòu)建社會主義和諧社會作出貢獻(xiàn)。2010年版無菌檢查法增修訂內(nèi)容一、進(jìn)一步確定了無菌檢查法的定義：無菌檢查法系用于檢查要求無菌的藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料、及其他品種是否無菌的一種方法。二、進(jìn)一步明確了無菌檢查保障1、檢驗(yàn)全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染，但采用的措施不得影響微生物的生長。2、無菌檢查要進(jìn)行環(huán)境檢測增加了日常檢驗(yàn)還需進(jìn)行環(huán)境檢測。3、無菌檢查人員必須具備微生物專業(yè)知識，并經(jīng)過無菌技術(shù)的培訓(xùn)。無菌檢查儀器無菌檢查儀無菌濾杯三、培養(yǎng)基增修訂內(nèi)容⒈刪去硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基的使用范圍。⒉刪去選擇性培養(yǎng)基使用的表面活性劑種類對氨基苯甲酸、聚山梨酯-80等

培養(yǎng)基適用性檢查增修訂內(nèi)容

3、培養(yǎng)基靈敏度試驗(yàn)⑴菌懸液制備中黑曲霉菌懸液的制備修改為“用適宜的方法吸出孢子懸液”。⑵在稀釋液0.9%無菌氯化鈉溶液中加入0.05％v/v）聚山梨酯80。

四、試驗(yàn)稀釋液、沖洗液增修訂為⒈增加根據(jù)供試品的特性，可選用其他經(jīng)驗(yàn)證過的適宜的溶液作為稀釋液、沖洗液。⒉試驗(yàn)中使用的中和劑、滅活劑和表面活性劑除證明其有效性外還應(yīng)證明對污染的微生物無影響修改為無毒性。五、方法驗(yàn)證試驗(yàn)增修訂內(nèi)容

⒈試驗(yàn)菌株刪除銅綠假單胞菌增加大腸埃希菌及大腸埃希菌菌液的制備(同金黃色葡萄球菌)。⒉薄膜過濾法供試品用量將規(guī)定量供試品按薄膜過濾法過濾修改為取每種培養(yǎng)基規(guī)定接種的供試品總量。六、供試品的無菌檢查增修訂內(nèi)容⒈檢驗(yàn)量直接接種法除另有規(guī)定外，每份培養(yǎng)基接種的供試品量按表2、表3規(guī)定刪除，采用直接接種法時的規(guī)定。2.陰性對照無菌試驗(yàn)中若使用表面活性劑等應(yīng)證明其有效性且對微生物生長無影響修改為無毒性。⒊薄膜過濾法①增加了抗生素供試品濾膜選擇的指導(dǎo)應(yīng)選擇低吸附的濾器及濾膜。②若需要沖洗濾膜,每張濾膜每次沖洗量一般為100ml，且沖洗量不宜過大修改為總沖洗量不得超過1000ml。⑴水溶液供試品含抑菌成分需用適量的沖洗液沖洗膜修改為所用的沖洗量、沖洗方法同方法驗(yàn)證試驗(yàn).微生物限度檢查增修定內(nèi)容修改內(nèi)容1、培養(yǎng)條件控制菌培養(yǎng)溫度35℃～37℃修改為30℃～35℃。限度檢查（薄膜過濾儀器）2、檢驗(yàn)量增修訂內(nèi)容⑴中藥膜劑檢驗(yàn)量50cm2修改為100cm2。⑵沙門菌檢驗(yàn)量修改為檢驗(yàn)量為20g或20ml并注明（其中10g用于陽性對照）。3、供試液的制備增修訂內(nèi)容⑴供試品檢查時使用表面活性劑應(yīng)證明其對微生物生長和存活無影響修改為無毒性。⑵供試液的制備若需加溫時，可采用其他經(jīng)驗(yàn)證的方法，但應(yīng)均勻加熱，且溫度不應(yīng)超過45℃。4.具抑菌活性的供試品增修訂內(nèi)容刪除應(yīng)消除供試液的抑菌活性修改為當(dāng)供試品具有抑菌活性時，應(yīng)盡量選擇操作簡便、快速的方法，應(yīng)避免損傷供試品中污染的微生物。在供試品溶液性狀允許的情況下，應(yīng)盡量選用薄膜過濾法。①離心沉淀集菌法兩次離心修改為一次離心；500轉(zhuǎn)/分離心，不超過3分鐘，取全部上清液用于檢查。適用范圍⒈僅使用于微生物限度檢查供試液的制備。⒉盡量避免使用，不可使用快速離心。5.細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)增修訂內(nèi)容⒈新增計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查⑴菌種大腸埃希菌（Escherichiacoli）〔CMCC（B）44102〕金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）〔CMCC（B）26003〕枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）〔CMCC（B）63501〕白色念珠菌（Candidaalbicans）〔CMCC（F）98001〕黑曲霉（Aspergillusniger）〔CMCC（F）98003〕①增加了菌懸液的制備及保存條件。

菌懸液制備后在室溫下放置應(yīng)在2小時內(nèi)使用，若保存在2～8℃可以在24小時內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2～8℃，在驗(yàn)證過的貯存期內(nèi)使用，每株試驗(yàn)菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，按規(guī)定條件培養(yǎng)計(jì)數(shù)，同時用相應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)。②增加了對照培養(yǎng)。

6、供試品檢查增修訂內(nèi)容⑴平皿法刪去采用平皿法進(jìn)行菌數(shù)測定時，連續(xù)2～3個稀釋級的供試液。修改為按計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證試驗(yàn)確認(rèn)的程序進(jìn)行供試液制備。

⑵培養(yǎng)時間修改內(nèi)容除另有規(guī)定外，細(xì)菌培養(yǎng)48小時改為3天，霉菌、酵母菌培養(yǎng)72小時改為5天，必要時，可適當(dāng)延長培養(yǎng)時間至7天進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)并報(bào)告。⑶菌數(shù)報(bào)告規(guī)則增修訂內(nèi)容⒈若同稀釋級兩個平板的菌落平均數(shù)不小于15，則兩個平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。⒉細(xì)菌、酵母菌和霉菌平均菌落數(shù)在30～300、30～100之間的稀釋級修改為選取菌落數(shù)小于300cfu和100cfu的稀釋級作為菌數(shù)報(bào)告的依據(jù)。⑷薄膜過殘濾法增修翅訂內(nèi)容新增內(nèi)容嫁采用其它愉直徑的濾蕉膜，沖洗黨量應(yīng)相應(yīng)臉的進(jìn)行調(diào)昌整（如使浙用膜直徑畜增大沖洗豈液量也應(yīng)非相應(yīng)增加桃，可保證右沖洗液覆存蓋整個濾末膜）。增加了白澡色念珠菌欣檢驗(yàn)方法增菌培驚養(yǎng)沙氏葡萄狠糖肉湯培釋養(yǎng)基。分離培敏養(yǎng)劃線接種鴨于沙氏葡陡萄糖瓊脂穴培養(yǎng)基平撐板上。鑒定試驗(yàn)典型菌落⒈沙氏葡藥萄糖瓊狡脂培養(yǎng)鞋基菌落呈乳嚴(yán)白色偶見原淡黃色，娃表面光滑微有濃酵母氣味索，時間稍魂久則菌落虹增大，顏?zhàn)嗌兩睢①|(zhì)地竹變硬或有驕皺摺。⒉念珠菌顯版色培養(yǎng)基菌落呈宿綠色或膛翠綠色峰菌落生斷長。⒋確認(rèn)谷試驗(yàn)取1%吐溫80-玉米瓊脂鼓培養(yǎng)基培艙養(yǎng)物進(jìn)行葬染色，鏡丈檢及芽管皆試驗(yàn)。結(jié)果判斷非革蘭材陽性菌允，顯微增鏡下未走見厚膜獅孢子、阿假菌絲塘、芽管任判未檢寫出白色飼念珠菌三、藥品微生池物檢驗(yàn)替也代方法驗(yàn)介證指導(dǎo)原殺則⒈目的⑴是為所岔采用的試尺驗(yàn)方法能披否替代藥蜜典規(guī)定的方法用于的藥品微生韻物的檢驗(yàn)磚提供指導(dǎo)烤。⑵在控制狗藥品微生葡物質(zhì)量中勤，需要采針用替代方法時，應(yīng)婆進(jìn)行方法莖的驗(yàn)證，富確認(rèn)其應(yīng)該用效果優(yōu)于或等同于藥典的方毯法。⒉微生物其檢驗(yàn)的類虹型及驗(yàn)證鼻參數(shù)藥品微生潤物檢驗(yàn)方壁法主要分航兩種類型定性試怨驗(yàn)賽定量試慌驗(yàn)⒊生物試允驗(yàn)的特殊薦性抽樣誤差糧操作炸誤差儲稀釋誤差體培養(yǎng)包誤差計(jì)量誤獸差亭計(jì)數(shù)誤第差藥品質(zhì)量類標(biāo)準(zhǔn)分析堂方法驗(yàn)證燃指導(dǎo)原則所不完全宜于微爸生物替泄代方法軍的驗(yàn)證件。培養(yǎng)基培養(yǎng)基是撿微生物試奮驗(yàn)的基礎(chǔ)寸，直接影響微生爪物試驗(yàn)陳結(jié)果。史適宜的梅培養(yǎng)基游制備方燥法、貯綁藏條件森和質(zhì)量茫控制試技驗(yàn)是提移供優(yōu)質(zhì)伶培養(yǎng)基舍的保證閥。該指導(dǎo)原僻則對培養(yǎng)奇基的制備死、儲存、管滅菌及質(zhì)芳量控制進(jìn)版行了指導(dǎo)偶。培養(yǎng)基的微制備⒈容器⒉溶劑⒊管理應(yīng)戴形成程序碌化管理培養(yǎng)基遞的制備功方法稱量誤配制且分裝pH應(yīng)確獵定培養(yǎng)基綿滅菌后的斃pH（冷釘卻至室溫兄25℃測嗽定）。P攪H的范圍隔不能超過鼓規(guī)定的0僚.2。培養(yǎng)基的貍貯藏⒈商品化丘培養(yǎng)基應(yīng)顫根據(jù)使用閱說明書上巷的要求進(jìn)吉行儲存。昏脫水培養(yǎng)悉基或單獨(dú)駁配方組分掏應(yīng)在適當(dāng)腿的條件下檔貯存，如巴低溫、干觸燥和避光掀，所有的均容器應(yīng)密按閉，尤其死是盛有脫瓣水培養(yǎng)基麻的容器.⒉自配的清培養(yǎng)基應(yīng)臂標(biāo)記名稱丈、批號、性配制日期問等信息，促并在已驗(yàn)礙證的條件潑下貯藏。⒊培養(yǎng)糧基滅菌愉后應(yīng)立扔即取出傻，不得免儲藏在水高壓滅撞菌器中肚，避免桐影響培辮養(yǎng)基的雖質(zhì)量。⒋保存矩于密閉賊容器中搏，避光騎保存，立可防止駐水分流疑失以延叢長保存揉時間。濫瓊脂平母板最好墨現(xiàn)配現(xiàn)疑用，如掛置冰箱逐保存，儉一般不豎超過一惹周，且紡應(yīng)密閉銅包裝，休若延長角保存，駝保存期靠需經(jīng)驗(yàn)潑證確定債。⒌固體開培養(yǎng)基揪滅菌后敵的再融刷化應(yīng)在閱加熱的禍水浴中刪或采用霉流通蒸乎汽進(jìn)行傘，只允拉許一次該，融化忽的培養(yǎng)供基應(yīng)放居在45絹～50除℃的水騙浴中，誼不得超暗過8小馬時。⒍使用臣過的培蔥養(yǎng)基（提包括失窩效的培故養(yǎng)基）板應(yīng)按照食國家污數(shù)染廢物鉛處理相雜關(guān)規(guī)定種進(jìn)行。菌種實(shí)驗(yàn)室菌廣種的處理由和保藏的灶程序應(yīng)標(biāo)馬準(zhǔn)化，⑴使盡嶄可能減土少菌種站污染和孔生長特鈴性的改每變。⑵按統(tǒng)啟一操作穗程序制賊備的菌地株是微覺生物試?yán)?yàn)結(jié)果糊一致性辨的重要俱保證。菌種保藏紫的原則⑴標(biāo)準(zhǔn)康儲備菌葬株可用敗于制備系每月或難每周一走次轉(zhuǎn)種芳的工作勿菌株.冷凍菌株紙一旦解凍飾轉(zhuǎn)種制備糧工作菌株選后,不得重禍新冷凍照或再次蛾使用。⑵工作計(jì)菌株不猛可代替僵標(biāo)準(zhǔn)菌爛株，標(biāo)惠準(zhǔn)菌株蟻的商業(yè)銷衍生物純僅可用指作工作戀菌株。菌種的傳卸代和使用⑴工作菌呢種的傳代段次數(shù)應(yīng)嚴(yán)皺格控制，濃不得超過5代防止過溜度的傳代碰造成菌種欣變異,工作菌株康不可代替員標(biāo)準(zhǔn)菌株.⑵任何亞判培養(yǎng)的形計(jì)式均被認(rèn)蘇為是轉(zhuǎn)種贊或傳代一份次。實(shí)驗(yàn)鄭室應(yīng)對工詳作菌株的強(qiáng)特性和純婚度進(jìn)行確膚認(rèn)。謝謝觀看/歡迎下載BY竄FAI日TH梯IM菜EAN忠A銅