顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

微生物生長量的測定-顯微鏡直接測定法酵母菌的死活細(xì)胞鑒別與鏡檢計(jì)數(shù)酵母菌的形態(tài)特征

一、酵母菌的個(gè)體形態(tài)酵母菌大多數(shù)為球狀、卵圓、橢圓、圓柱等單細(xì)胞，有的酵母菌子代細(xì)胞連在一起成為鏈狀，稱為假絲酵母。

1）圓形圓球酵母2）橢圓形葡萄酒酵母3）卵圓形啤酒酵母4）檸檬形漢遜氏酵母5）臘腸形巴斯德酵母6）假絲狀假絲酵母二、酵母菌的大小

酵母菌長約5~20um，可達(dá)50um；寬約1~5um，可達(dá)10um以上；比細(xì)菌粗10倍左右。一般用高倍鏡（40×10）觀察。酵母細(xì)胞的大小與培養(yǎng)方式、菌齡、制片方式有關(guān)。一般成熟細(xì)胞比幼齡細(xì)胞大；菌體在液體培養(yǎng)基中比在固體培養(yǎng)基中大。

三、芽殖酵母的形態(tài)芽殖是酵母主要的無性繁殖方式。成熟細(xì)胞長出一個(gè)小芽，到一定程度后脫離母體繼續(xù)長成新個(gè)體。方式可分為多邊出芽（最普遍），兩端出芽和三端出芽。酵母菌死活細(xì)胞的鑒別

一、鑒別的原理美藍(lán)是一種無毒性的染料，它的氧化型呈蘭色，還原型無色，用美藍(lán)對(duì)酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，由于細(xì)胞的新陳代謝作用，細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，能使美藍(lán)由蘭色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型。因此，具有還原能力的酵母活細(xì)胞是無色的，而死細(xì)胞或代謝作用微弱的衰老細(xì)胞則呈蘭色或淡蘭色，借此即可對(duì)酵母菌的死細(xì)胞和活細(xì)胞進(jìn)行鑒別。二、鑒別的步驟1.染色：在干凈的載玻片中央加一小滴0.1%美藍(lán)染色液，然后再加一小滴預(yù)先稀釋至適宜濃度的酵母發(fā)酵液，混勻后從側(cè)面蓋上蓋玻片，并吸去多余的水分和染色液（注意染色液和菌液不宜過多或過少，并應(yīng)基本等量，而且要混勻）。2.鏡檢：將制好的染色片置于顯微鏡的載物臺(tái)上，放置約3min后進(jìn)行鏡檢，先用低倍鏡，后用高倍鏡進(jìn)行觀察，根據(jù)細(xì)胞顏色區(qū)分死細(xì)胞（藍(lán)色）和活細(xì)胞（無色），并進(jìn)行記錄。3.比較：染色約30min后再次進(jìn)行觀察，注意死細(xì)胞數(shù)量是否增加。死細(xì)胞（藍(lán)色）和活細(xì)胞（無色），酵母菌細(xì)胞的鏡檢計(jì)數(shù)原理：主要采用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法，該方法是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有特定面積和容積的載玻片上(又稱計(jì)菌器），于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。目前國內(nèi)常用的計(jì)菌器：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)，中間較寬的平臺(tái)被一短橫槽隔成兩半。計(jì)數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格

無論是哪一種規(guī)格的計(jì)數(shù)板，每一個(gè)大方格中的小方格400個(gè)，每一個(gè)大方格邊長為1毫米，則每一個(gè)大方格的面積為1mm2，蓋上蓋玻片后，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.1毫米，所以計(jì)數(shù)室的容積為0.1mm3（萬分之一毫升）

計(jì)數(shù)方法

數(shù)五個(gè)中方格的總菌數(shù)，然后求得每個(gè)中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一個(gè)大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成毫升菌液中的總菌數(shù)。設(shè)五個(gè)中方格中總菌數(shù)A，菌液稀釋倍數(shù)B，如果是25個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，則

1ml菌液中的總菌數(shù)=A/5×25×104×B=50000AB

同理，如果是16個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，則

1ml菌液中的總菌數(shù)=A/4×16×104