實驗九碘淀粉比色法測定血清淀粉酶

關(guān)于實驗九碘淀粉比色法測定血清淀粉酶第1頁，課件共11頁，創(chuàng)作于2023年2月原理血清（或血漿）中α-淀粉酶催化淀粉分子中α-1，4糖苷鍵水解，產(chǎn)生葡萄糖、麥芽糖及含有α-1，6糖苷鍵支鏈的糊精。在底物過量的條件下，反應(yīng)后加入碘液與未被水解的淀粉結(jié)合成藍色復(fù)合物，其藍色的深淺與未經(jīng)酶促反應(yīng)的空白管比較，從而推算出淀粉酶的活力單位。第2頁，課件共11頁，創(chuàng)作于2023年2月試劑操作步驟計算參考值第3頁，課件共11頁，創(chuàng)作于2023年2月試劑

1、0.4mg/ml底物緩沖液：4℃冰箱保存6個月。2、0.1mol/L碘貯備液：4℃避光保存6個月。0.01mol/L碘應(yīng)用液的配制:將碘貯備液:蒸餾水=1︰9稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配4℃避光保存。

第4頁，課件共11頁，創(chuàng)作于2023年2月操作步驟混勻，660nm波長，1cm光徑，蒸餾水調(diào)零，測各管吸光度。*注：不同樣本批量測試前需要做預(yù)實驗，確定最佳取樣濃度，將(空白OD-測定OD)控制在0.05~0.150之間

第5頁，課件共11頁，創(chuàng)作于2023年2月1、單位定義：100ml血清（漿）中的AMS，在37℃與底物作用15分鐘，水解5mg淀粉為1個單位。2、公式：計算第6頁，課件共11頁，創(chuàng)作于2023年2月樣本最佳取樣濃度摸索

根據(jù)不同動物血清及組織之間的差異，最好是在批量實驗之前做個預(yù)試以確定最佳取樣濃度。例1：取大鼠血清用生理鹽水稀釋成不同濃度（2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍、128倍、256倍），取樣0.1ml進行檢測第7頁，課件共11頁，創(chuàng)作于2023年2月臨床意義淀粉酶可通過腎小球濾過。流行性胰腺炎，特別是急性胰腺炎時，血和尿中的AMY顯著增高。急性胰腺炎發(fā)病后8~12h血清AMY開始升高，12~24h達高峰，2~5d下降至正常。如超過500U有意義，達350U時應(yīng)懷疑有此病。尿中AMY約于發(fā)病后12~24小時開始升高，下降也比血清AMY慢，因此在急性胰腺炎后期測定尿AMY更有價值。第8頁，課件共11頁，創(chuàng)作于2023年2月注意事項酶活性在400U以下時，與底物的水解量成線性。如測定管吸光度小于空白管吸光度一半時，應(yīng)加大血清稀釋倍數(shù)或減少稀釋血清加入量，測定結(jié)果再乘以稀釋倍數(shù)。草酸鹽、拘櫞酸鹽、EDTA-Na2及氟化鈉對AMY活性有抑制作用，肝素?zé)o抑制作用。唾液含高濃度淀粉酶應(yīng)防止帶入。淀粉產(chǎn)品不同，其空白吸光度可有明顯差異，一般空白吸光度應(yīng)在0.40以上。第9頁，課件共11頁，創(chuàng)作于2023年2月注意事項緩沖淀粉溶液若出現(xiàn)混濁或絮狀物，表示緩沖淀粉溶液受污染或變質(zhì)，不能再用，應(yīng)重新配制。本法適用于其他體液淀粉酶的測定。尿液