微生物課件（老師版） 第15章 螺旋體

螺旋體（spirochete）第15章概述

螺旋體

：一類細(xì)長(zhǎng)、柔軟、彎曲呈螺旋狀、運(yùn)動(dòng)活潑的原核細(xì)胞型微生物；特點(diǎn)

基本結(jié)構(gòu)與細(xì)菌相似，如有細(xì)胞壁、原始核質(zhì)；

以二分裂方式繁殖；

對(duì)抗生素等藥物敏感；

介于細(xì)菌與原蟲之間。致病螺旋體的分類屬和代表菌引起人類疾病

傳播方式或媒介密螺旋體屬（Treponema）

蒼白密螺旋體蒼白亞種

梅毒

性傳播蒼白密螺旋體地方亞種地方性梅毒

黏膜損傷蒼白密螺旋體極細(xì)亞種

雅司病

皮膚損傷品他密螺旋體

品他病

皮膚損傷疏螺旋體屬（Borrelia）

伯氏疏螺旋體

萊姆病

硬蜱回歸熱疏螺旋體流行性回歸熱

體虱杜通疏螺旋體

地方性回歸熱

軟蜱奮森疏螺旋體

咽峽炎、牙齦炎

條件致病鉤端螺旋體屬（Leptospira）

問(wèn)號(hào)狀鉤端螺旋體

鉤端螺旋體病

接觸疫水

名稱螺旋數(shù)目螺旋特點(diǎn)舉例致病螺旋體的螺旋特點(diǎn)

密螺旋體

8~14

規(guī)則，細(xì)密；兩端尖直疏螺旋體3~10

不規(guī)則蒼白密螺旋體蒼白亞種鉤端螺旋體數(shù)十個(gè)規(guī)則，更細(xì)密；一端/兩端呈鉤狀問(wèn)號(hào)狀鉤端螺旋體回歸熱疏螺旋體伯氏疏螺旋體鉤端螺旋體屬（Leptospira）-問(wèn)號(hào)狀鉤端螺旋體（L.

interrogans）-雙曲鉤端螺旋體（L.biflexa）分兩個(gè)種。第一節(jié)鉤端螺旋體屬1.形態(tài)染色

螺旋細(xì)密、規(guī)則，形似細(xì)小珍珠排列的細(xì)鏈，一端或兩端呈鉤狀；運(yùn)動(dòng)活潑，常使菌體呈C、S或8字型，G－，不易著染；Fontana鍍銀染色法染成棕褐色。一、生物學(xué)性狀黃疸出血熱群鉤端螺旋體螺旋體結(jié)構(gòu)模式圖內(nèi)鞭毛內(nèi)鞭毛緊緊纏繞在原生質(zhì)圓柱體表面呈螺旋狀，使鉤端螺旋體活潑地沿長(zhǎng)軸旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)。暗視野顯微鏡螺旋體暗視野鏡下形態(tài)AgNO3

+

NH4OH→AgOH↓+

NH4NO3

AgOH+X（菌體中嘌呤）↓AgX（嘌呤銀鹽，棕褐色）鍍銀染色法原理鉤端螺旋體鍍銀染色2.培養(yǎng)特性

?營(yíng)養(yǎng)要求復(fù)雜，常用Korthof培養(yǎng)基，適宜生長(zhǎng)溫度為28～30℃，最適pH7.2～7.6，

?需氧或微需氧；

?在人工培養(yǎng)基中生長(zhǎng)緩慢。3.抵抗力

?對(duì)熱抵抗力弱，60℃

1

min即死亡。0.2%來(lái)蘇、1：2000升汞、1%石炭酸經(jīng)10～30

min被殺滅。

?對(duì)青霉素敏感。

?在濕土或水中可存活數(shù)月。4.抗原分類據(jù)群（內(nèi)部抗原）和型（表面抗原）特異性抗原分血清群和血清型，問(wèn)號(hào)狀鉤端螺旋體至少可分為25個(gè)血清群、273個(gè)血清型，其中有我國(guó)學(xué)者發(fā)現(xiàn)的37個(gè)血清型；我國(guó)已發(fā)現(xiàn)的致病性鉤端螺旋體至少有19個(gè)血清群、161個(gè)血清型，是發(fā)現(xiàn)血清型最多的國(guó)家。（一）致病物質(zhì)

1.內(nèi)毒素樣物質(zhì)(ELS)

細(xì)胞壁中含類似脂多糖物質(zhì)（LLS），引起的病理變化與典型的內(nèi)毒素相似，只是毒性較低。

二、致病性與免疫性2.溶血素

溶血素破壞紅細(xì)胞膜而溶血。

溶血素不耐熱，56℃經(jīng)30分鐘失活，對(duì)氧穩(wěn)定，可被胰蛋白酶破壞。（一）致病物質(zhì)

3.細(xì)胞毒性因子(CTF)

注射小鼠，可出現(xiàn)肌肉痙攣、呼吸困難而死亡。4.細(xì)胞致病作用（CPE）物質(zhì)

引起細(xì)胞退行性病變；注射家兔，可形成紅斑和水腫。（二）所致疾病鉤端螺旋體病人畜共患傳染病，多宿主（鼠和豬為主），傳播途徑有：

?人與污染水或土壤接觸

?黏膜或皮膚侵入

?消化道黏膜（污染食物/飲水）

?胎盤垂直傳播

?吸血昆蟲流行環(huán)節(jié)野鼠水或飼料豬或其它家畜

尿稻田.水溝水塘尿

野鼠豬或其它家畜人疫水疫水流行特點(diǎn)

季節(jié)性（夏秋）：洪水型—豬，稻田型—鼠

地區(qū)性：三多－鼠、豬、水

職業(yè)性：農(nóng)民、礦工、飼養(yǎng)員致病性

先形成鉤體血癥，損傷全身毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及肝、腎、肺心及中樞神經(jīng)，出現(xiàn)休克、DIC、黃疸、出血、心腎功能不全、腦膜炎等。臨床特點(diǎn)

起病急，高熱、乏力、全身酸痛、結(jié)膜充血、腓腸肌壓痛、表淺淋巴結(jié)腫大；

三大癥狀：寒熱、身痛、一身乏

三大體征：眼紅、腿疼、淋巴大結(jié)膜充血黃疸出血型病人出現(xiàn)畏寒、發(fā)熱、頭痛、乏力、眼結(jié)膜充血、淺表淋巴結(jié)腫大、全身肌肉疼痛特別是腓腸肌疼痛和觸痛，新時(shí)期的英雄戰(zhàn)士--李向群1978年生，廣州軍區(qū)塔山守備英雄團(tuán)九連戰(zhàn)士。中國(guó)共產(chǎn)黨黨員。在1998年長(zhǎng)江流域抗洪搶險(xiǎn)戰(zhàn)斗中，主動(dòng)報(bào)名參加部隊(duì)的搶險(xiǎn)突擊隊(duì)，他帶病頑強(qiáng)拼搏，先后4次暈倒在大堤上，被送進(jìn)醫(yī)院搶救醒來(lái)后，又拔掉輸液的針管上堤戰(zhàn)斗，終因勞累過(guò)度壯烈犧牲。中央軍委授予李向群“新時(shí)期英雄戰(zhàn)士”光榮稱號(hào)。

抗洪英雄--李向群

1998年長(zhǎng)江第6次洪峰抵達(dá)荊江時(shí)，沙市水位猛漲到45.22米，超歷史最高紀(jì)錄，李向群冒雨連續(xù)奮戰(zhàn)了14個(gè)小時(shí)，感到有點(diǎn)頭昏發(fā)熱。他以為自己是淋雨感冒了，就悄悄找營(yíng)部衛(wèi)生員王穩(wěn)官，要了幾片速效感冒膠囊。在下午堵管涌的戰(zhàn)斗中，他突然暈倒，高燒40度，連隊(duì)干部迅速把他送進(jìn)了團(tuán)衛(wèi)生隊(duì)。8月19日中午，南平鎮(zhèn)興堤段再次出現(xiàn)管涌，正在輸液的李向群聽到緊急集合的哨音，自己拔掉針頭就沖上了大堤，一口氣干了一個(gè)多小時(shí)。漸漸地，他的腳步慢了下來(lái)，頭痛得越來(lái)越歷害，便找來(lái)一根帶子緊緊扎在頭上，繼續(xù)搶運(yùn)沙包，直到又一次暈倒大堤上，被戰(zhàn)友再次送進(jìn)衛(wèi)生隊(duì)?？购橛⑿?-李向群當(dāng)李向群扛著沙包爬上大堤時(shí)，一個(gè)跟頭栽倒在地，他第三次暈倒了。戰(zhàn)友和地方群眾頓時(shí)圍上來(lái)，經(jīng)簡(jiǎn)易救治，李向群漸漸蘇醒過(guò)來(lái)。他著急地對(duì)大家說(shuō)：“我沒事，保大堤要緊，你們趕快去搶險(xiǎn)！”戰(zhàn)友們剛剛投入戰(zhàn)斗，李向群喝了兩杯涼開水，又奮不顧不勸阻上堤扛包。一包、兩包、三包……大約扛了20多包，他再也支撐不住了，口吐鮮血，連人帶包倒在了漫水的大堤上。團(tuán)衛(wèi)生隊(duì)火速將他送進(jìn)公安縣第二人民醫(yī)院，經(jīng)診斷為鉤端螺旋體病時(shí)，當(dāng)晚又轉(zhuǎn)送廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院搶救。終于極度勞累，病情惡化，經(jīng)全力搶救無(wú)效。免疫性

體液免疫為主，病后獲得對(duì)同型鉤體的持久免疫力。（一）病原學(xué)診斷標(biāo)本采集

發(fā)病10天內(nèi)取血液；2周后取尿液；腦膜刺激者取腦脊液。1.直接鏡檢三、微生物學(xué)檢查法2.分離鑒定

接種至Korthof培養(yǎng)基，置28℃孵育陽(yáng)性標(biāo)本在2周內(nèi)可見培養(yǎng)液呈輕度混濁；

暗視野顯微鏡檢查有動(dòng)力，則用已知診斷血清鑒定其血清群和血清型。3.動(dòng)物接種

敏感方法，尤適用于有雜菌污染的標(biāo)本。接種于幼齡豚鼠或金地鼠腹腔，3～5天后用暗視野顯微鏡檢查腹腔液；或3～6天取心血檢查并作分離培養(yǎng)。4.分子生物學(xué)診斷：檢測(cè)核酸

DNA探針雜交

用PCR擴(kuò)增（二）血清學(xué)診斷

病初和發(fā)病后第3～4周各采血清一次。有腦膜刺激癥狀者采取腦脊液。

1.顯微鏡凝集試驗(yàn)1.顯微鏡凝集試驗(yàn)

用標(biāo)準(zhǔn)株或當(dāng)?shù)亓餍兄曜餍吞禺愋钥乖謩e與病人不同稀釋度血清混合，37℃孵育2

h，暗視野顯微鏡觀察，可見鉤端螺旋體凝集成小蜘蛛狀。一般效價(jià)在1：300以上或晚期血清效價(jià)有4倍以上增高有診斷意義。顯微鏡凝集試驗(yàn)

凝集成小蜘蛛狀對(duì)照2.間接凝集試驗(yàn)

可溶性鉤端螺旋體屬特異抗原，吸附于乳膠或活性炭成為顆粒性抗原，與病人血清中相應(yīng)抗體作用，可出現(xiàn)肉眼可見的凝集。防鼠、滅鼠，加強(qiáng)對(duì)帶菌家畜的管理接種多價(jià)鉤體疫苗：

在常年流行地區(qū)，對(duì)易感人群和與疫水接觸者宜接種包含當(dāng)?shù)亓餍兄暝趦?nèi)的多價(jià)鉤端螺旋體疫苗。治療：

青霉素首選。四、防治原則第二節(jié)密螺旋體屬密螺旋體分類－蒼白密螺旋體（T.pallidum）?蒼白亞種(subsp.pallidum)：亦稱梅毒螺旋體，引起人類梅毒。

?地方亞種（subsp.endemicum）：引起非性傳播梅毒（污染餐具傳播）?極細(xì)亞種（subs.perternue）：雅司?。ㄆつw損傷受染）－品他密螺旋體（T.carateum）

?引起人類品他病本屬主要介紹梅毒螺旋體。（一）形態(tài)染色

8～14個(gè)致密而規(guī)則的螺旋，兩端尖直。運(yùn)動(dòng)活潑，圓柱體表面繞有3～4根周鞭毛，與運(yùn)動(dòng)有關(guān)。

普通染色不易著色，常用Fontana鍍銀染色法，菌體染成棕褐色且變粗。一、生物學(xué)性狀（二）培養(yǎng)特性

目前人工培養(yǎng)方法尚未真正成功。

接種兔睪丸或眼前房，兔睪丸活體培養(yǎng)，但生長(zhǎng)緩慢，多用來(lái)保存菌種；家兔上皮細(xì)胞中能有限生長(zhǎng)，繁殖慢，約30

h分裂一次。（三）抵抗力

抵抗力極弱，對(duì)冷、熱及干燥特別敏感；血液中的螺旋體4℃放置3天后才死亡，故冷藏3天以上的血液無(wú)傳染梅毒的危險(xiǎn)。（一）致病因素

1.莢膜樣物質(zhì)

為酸性粘多糖，具有抗吞噬作用

2.主要外膜蛋白

粘附作用，激活人皮膚微血管內(nèi)皮上的血管粘附分子-1（VCAM-1）和細(xì)胞間粘附分子-1（ICAM-1）的表達(dá)，促進(jìn)T細(xì)胞增殖，釋放炎癥因子（TNF-α和IL-1α）。3.透明質(zhì)酸酶

分解透明質(zhì)酸有利于擴(kuò)散并造成組織損傷。二、致病性與免疫性（二）所致疾病：據(jù)感染方式分

1.先天性梅毒

亦稱胎傳梅毒，易致流產(chǎn)、早產(chǎn)或死胎；也可致先天畸形，出生后被稱為梅毒兒，常呈鋸齒形牙、間質(zhì)性角膜炎、神經(jīng)性耳聾等癥狀。先天梅毒2.后天性梅毒：分三期I期梅毒：

多見外生殖器，出現(xiàn)無(wú)痛性、直徑約1

cm的硬性下疳，含有大量梅毒螺旋體，此時(shí)傳染性極強(qiáng)。4～8周后，下疳自然愈合。經(jīng)2～3個(gè)月無(wú)癥狀潛伏期后進(jìn)入第二期。

II期梅毒：感染性強(qiáng)，破壞性小。全身皮膚黏膜出現(xiàn)梅毒疹，周身淋巴結(jié)腫大，不經(jīng)治療一般在1～3個(gè)月后癥狀自然消退而痊愈，經(jīng)2～4年,又可被激活進(jìn)入第三期。

III期（晚期）梅毒：感染性小，破壞性大。感染2年（亦可達(dá)10～15年）后，可侵犯內(nèi)臟器官或組織，出現(xiàn)慢性肉芽腫病變。重癥患者引起心血管及中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變，出現(xiàn)梅毒瘤、動(dòng)脈瘤、脊髓瘤。（三）免疫性

1.以細(xì)胞免疫為主。2.傳染性免疫：

一般認(rèn)為當(dāng)體內(nèi)持續(xù)有螺旋體存在時(shí)，對(duì)再感染有免疫力，一旦螺旋體被殺滅，其免疫力亦隨之消失。3.產(chǎn)生兩類抗體

?特異性制動(dòng)抗體

?反應(yīng)素：非特異性抗體，能與生物組織中的類脂抗原（如牛心?。┌l(fā)生非特異性結(jié)合反應(yīng)，可利用其進(jìn)行血清學(xué)診斷。（一）標(biāo)本采集

Ⅰ期梅毒：硬下疳滲出液

Ⅱ期梅毒：梅毒疹滲出液或局部淋巴結(jié)

抽出液三、微生物學(xué)檢查法（二）顯微鏡檢查暗視野顯微鏡觀察螺旋體的動(dòng)力和形態(tài)

Fontana鍍銀染色法（二）血清學(xué)診斷1.非密螺旋體抗原試驗(yàn)：測(cè)非特異性抗體抗原（正常牛心脂質(zhì)）→測(cè)血清中的反應(yīng)素（抗脂質(zhì)抗體）1.VDRL（veneraldiseaseresearchlaboratory）試驗(yàn)和RPR（rapidplasmareagin,改良的VDRL）試驗(yàn)：適合梅毒患者的初篩。前者在玻片上進(jìn)行，后者在專用紙卡反應(yīng)圈（內(nèi)徑18

mm）內(nèi)進(jìn)行。I期梅毒陽(yáng)性率約70％，II期梅毒可達(dá)100％，III期梅毒陽(yáng)性率低。梅毒快速血清反應(yīng)素RPR試驗(yàn)梅毒快速血清反應(yīng)素RPR試驗(yàn)RPR是心脂質(zhì)（而不是密螺旋體的）梅毒抗體試驗(yàn)，在疾病初期呈陽(yáng)性。將病人血清與炭聯(lián)心脂質(zhì)抗原試劑混合，陽(yáng)性血清顯示凝集抗原顆粒。(4分鐘后觀察顆粒凝集）2.密螺旋體抗原試驗(yàn)

采用Nichols株梅毒螺旋體或重組蛋白作為抗原，測(cè)定病人血清中特異性抗體。可作確診試驗(yàn)。

熒光密螺旋體抗體吸收試驗(yàn),

（FTA-ABS）

梅毒螺旋體血凝試驗(yàn),

（TPHA）

預(yù)防：加強(qiáng)性衛(wèi)生教育和嚴(yán)格社會(huì)管理。治療：梅毒確診后，宜用青霉素等藥物及

早予以徹底治療。治療原則：早期，足量，正規(guī)。四、防治原則

有3～10個(gè)稀疏而不規(guī)則的螺旋，運(yùn)動(dòng)活潑。

對(duì)人致病的主要有伯氏疏螺旋體、回歸熱螺旋體、奮森螺旋體等。第3節(jié)疏螺旋體屬

萊姆病的主要病原體。

1977年在美國(guó)萊姆鎮(zhèn)（Lyme,atownofsoutheastConnecticut,USA）發(fā)現(xiàn)，從硬蜱及患者體內(nèi)分離出伯氏疏螺旋休。

1985年我國(guó)在黑龍江省林區(qū)首次發(fā)現(xiàn)萊姆病，1988年從病人血液中分離出病原體，迄今已有十多個(gè)省和自治區(qū)證實(shí)。一、伯氏疏螺旋體（一）形態(tài)染色

兩端稍尖，運(yùn)動(dòng)活潑，周漿鞭毛數(shù)不

等，與運(yùn)動(dòng)有關(guān)。

Giemsa或Wright染色均佳。一、生物學(xué)性狀革蘭染色Wright染色（二）培養(yǎng)特性

BSK培養(yǎng)：該培養(yǎng)基含長(zhǎng)鏈飽和與不飽和脂肪酸、氨基酸、牛血清白蛋白及熱滅活兔血清等豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

微需氧，5％～10％CO2促進(jìn)生長(zhǎng)。分裂繁殖一代需12～18

h。一般培養(yǎng)2～3周，長(zhǎng)出細(xì)小而邊緣整齊的小菌落。（三）分類

根據(jù)DNA-DNA同源性及16SrRNA基因序列分析結(jié)果，可將菌株分為10個(gè)不同基因種。（一）致病性

?能選擇性吸附在膠原纖維相關(guān)的核心蛋白多糖。

?在體外，它們能與整合素、錨定蛋白、粘多糖相結(jié)合。

?在體內(nèi)，表達(dá)脂蛋白能激活多種細(xì)胞，引起劇烈的炎癥反應(yīng)。（二）所致疾病萊姆病

經(jīng)3～30天潛伏期，在叮咬部位可出現(xiàn)慢性移行性紅斑（erythemamigrans）。經(jīng)2～3周，皮損消退，留有斑痕與色素沉著。

早期癥狀表現(xiàn)為乏力、頭痛、發(fā)熱、頸硬及關(guān)節(jié)炎等。晚期癥狀主要表現(xiàn)為慢性關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)系統(tǒng)與皮膚異常、心內(nèi)膜炎等。

（三）宿主及傳播媒介蜱（tick）：

在美國(guó)主要是肩突硬蜱和太平洋硬蜱，在歐洲主要是蓖子硬蜱，我國(guó)北方林區(qū)主要是全溝硬蜱。

慢性移行性紅斑

ELISA

方法簡(jiǎn)便，特異性和敏感性較高，