基因?qū)嶒?yàn)診斷培訓(xùn)班 科華核酸診斷試劑及臨床檢測(cè)操作

科華核酸診斷試劑產(chǎn)品及臨床檢測(cè)操作上海科華生物工程股份有限公司P

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.內(nèi)容概要?

科華公司介紹?

科華核酸診斷試劑產(chǎn)品介紹?

臨床核酸檢測(cè)操作P

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.介紹內(nèi)容一、科華公司簡(jiǎn)介P

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.企業(yè)概況企業(yè)名稱：科華生物工程股份有限公司企業(yè)地址：上海市徐匯區(qū)欽州北路1189號(hào)員工人數(shù)：1320人注冊(cè)資本：49,227.75萬元上市時(shí)間：2004年7月21日證券代碼：002022P

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.科華——中國(guó)體外診斷試劑第一品牌lll創(chuàng)立于1981年，擁有近30年診斷產(chǎn)品生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)。2004年在深交所上市，證劵代碼002022。國(guó)內(nèi)規(guī)模最大的體外診斷試劑生產(chǎn)廠家；產(chǎn)業(yè)涉及診斷試劑、臨床檢驗(yàn)儀器、真空采血系統(tǒng)、醫(yī)用信息軟件等。l體外診斷試劑年綜合銷售額與市場(chǎng)占有率連續(xù)十余年雄踞國(guó)內(nèi)市場(chǎng)榜首。涵蓋酶聯(lián)免疫、膠體金、臨床生化、臨床P

CR、核酸血篩等產(chǎn)品線，形成國(guó)內(nèi)最完整的診斷試劑供應(yīng)平臺(tái)。l主要用戶：血站、臨床醫(yī)院、血制品廠、疾病控制中心等，為阻斷疾病傳播作出了重要貢獻(xiàn)。P

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.主營(yíng)業(yè)務(wù)診斷試劑：實(shí)驗(yàn)室儀器：酶聯(lián)免疫試劑生化診斷試劑快速診斷試劑核酸臨床試劑三聯(lián)血篩試劑全自動(dòng)生化分析儀全自動(dòng)核酸提取儀實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀酶標(biāo)儀、洗板機(jī)電解質(zhì)儀、移液器KHB實(shí)驗(yàn)耗品：醫(yī)用軟件（LI

S）：真空采血管采血針尿液收集器各類檢驗(yàn)儀器軟件;醫(yī)院檢驗(yàn)科、血站血庫(kù)等信息管理系統(tǒng)軟件KHB是國(guó)內(nèi)診斷用品公司中最有能力為臨床實(shí)驗(yàn)室提供一站式全方位解決方案的供應(yīng)商。P

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.體外診斷試劑——核酸類?

2003年：成功研制SARS實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)試劑盒，并在科技部評(píng)審中榮獲國(guó)內(nèi)第一。?

后陸續(xù)推出乙肝、丙肝、

甲流H1N1等實(shí)時(shí)熒光P

CR檢測(cè)試劑。?

2007年：上海市“科教興市”項(xiàng)目——HB

V/

HCV/

HI

V-

1核酸檢測(cè)試劑盒（熒光P

CR法）開發(fā)完成，用于血液制品中感染性病原體的篩查。臨床診斷試劑及儀器結(jié)合研制：2006年，科華Fl

uoc

ycl

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實(shí)時(shí)熒光定量P

CR儀、全自動(dòng)核酸提取儀投放市場(chǎng)P

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.體外診斷試劑——核酸類檢測(cè)系統(tǒng)概念：完成標(biāo)本檢驗(yàn)必需的儀器、試劑、校準(zhǔn)品和檢測(cè)程序等的標(biāo)準(zhǔn)組合KHB核酸血液篩查系統(tǒng)乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒1型核酸檢測(cè)試劑盒+KHB全自動(dòng)核酸工作站（HAMILTON-磁模塊組合）ABI7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR全自動(dòng)分析系統(tǒng)自動(dòng)完成樣本匯集、核酸提取和PCR反應(yīng)液準(zhǔn)備信息管理服務(wù)器連接核酸工作站平臺(tái)和擴(kuò)增檢測(cè)平臺(tái)，

樣本信息管理和系統(tǒng)運(yùn)行過程管理P

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.體外診斷試劑——核酸類三聯(lián)血篩核酸試劑獲WHO澳洲室間質(zhì)評(píng)證書科華生物三聯(lián)血篩核酸試劑獲得世界衛(wèi)生組織（WHO）指定、由澳大利亞國(guó)家血清學(xué)參考實(shí)驗(yàn)室（NRL）組織的室間質(zhì)評(píng)證書（HI

V/

HBV/

HCV血篩核酸檢測(cè)）。通過前后4組質(zhì)評(píng)血清樣品盤的考核，我司血篩核酸試劑達(dá)到100%樣品檢測(cè)準(zhǔn)確率。P

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.介紹內(nèi)容二、科華核酸診斷試劑產(chǎn)品P

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.科華核酸診斷試劑產(chǎn)品核酸種類試劑盒產(chǎn)品名稱注冊(cè)號(hào)規(guī)格乙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒（P

CR-

熒光探針法）國(guó)食藥監(jiān)械(

準(zhǔn))

字2008第3400932號(hào)沙眼衣原體核酸檢測(cè)試劑盒（P

CR-

熒光探針法）國(guó)食藥監(jiān)械(

準(zhǔn))

字2009第3400912號(hào)淋球菌核酸檢測(cè)試劑盒（P

CR-

熒光探針法）國(guó)食藥監(jiān)械(

準(zhǔn))

字2009第3400914號(hào)DNA類解脲脲原體核酸檢測(cè)試劑盒（P

CR-

熒光探針法）國(guó)食藥監(jiān)械(

準(zhǔn))

字2009第3400913號(hào)32人份/盒人乳頭瘤病毒（16型、18型）核酸檢測(cè)試劑盒（P

CR-

熒光探針法）國(guó)食藥監(jiān)械(

準(zhǔn))

字2011第3400113號(hào)丙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒（P

CR-

熒光探針法）國(guó)食藥監(jiān)械(

準(zhǔn))

字2009第3400677號(hào)RNA類甲型通用型和甲型H1N1流感病毒RNA檢測(cè)試劑盒

(

熒光P

CR法)國(guó)食藥監(jiān)械(

準(zhǔn))

字2010第3400117號(hào)乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒1型核酸檢測(cè)試劑盒（P

CR-

熒光法）血篩三聯(lián)檢測(cè)試劑國(guó)藥準(zhǔn)字S2010001196測(cè)試/

盒P

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.科華核酸臨床診斷試劑產(chǎn)品試劑盒組成：樣品處理試劑、P

CR擴(kuò)增反應(yīng)試劑、對(duì)照試劑、工作標(biāo)準(zhǔn)品（工作標(biāo)準(zhǔn)品僅含于核酸定量檢測(cè)試劑盒）、核酸提取柱（僅含于RNA類病原體核酸檢測(cè)試劑盒）試劑盒置-

20℃保存，有效期均為12個(gè)月規(guī)格：均為32人份包裝適用儀器：適用于臨床各類實(shí)時(shí)熒光P

CR儀，但根據(jù)不同實(shí)時(shí)熒光P

CR擴(kuò)增儀的設(shè)計(jì)差異，分為毛細(xì)管反應(yīng)和普通P

CR管反應(yīng)規(guī)格包裝，檢測(cè)性能相同。P

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.試劑盒適用于臨床各類實(shí)時(shí)熒光PCR儀ABI

7500Roche

Li

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1.

5ABI

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epOne毛細(xì)管P

CR規(guī)格包裝Roche

Li

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480

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3000科華Fl

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.乙型肝炎病毒核酸（HBV

DNA）定量檢測(cè)試劑盒樣品處理：沉淀煮沸法核酸擴(kuò)增檢測(cè)：P

CR-

熒光檢測(cè)試劑盒含UNG酶防污染體系4支不同濃度的工作標(biāo)準(zhǔn)品

（104-

107I

U/

ml

）均準(zhǔn)確定值，檢測(cè)結(jié)果可溯源至國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檢測(cè)靈敏度：500

I

U/

ml定量線性范圍：500-

108

I

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mlP

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.丙型肝炎病毒核酸（HCV

RNA）定量檢測(cè)試劑盒?

樣品處理：柱提取方法獲得樣品中病原體

RNA加入裂解液釋放核酸——介質(zhì)吸附核酸——過濾洗滌——核酸洗脫?

二氧化硅吸附核酸，以負(fù)壓純化柱方式實(shí)現(xiàn)核酸純化，以半自動(dòng)操作代替手工操作，極大地降低了實(shí)驗(yàn)操作的技巧要求，受人工操作影響顯著減少，檢測(cè)速度快、結(jié)果重復(fù)性好二氧化硅膜吸附核酸純化方法2：離心法AxyVa

c

負(fù)壓裝置P

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.丙型肝炎病毒核酸（HCV

RNA）定量檢測(cè)試劑盒與傳統(tǒng)R

NA提取方法相比，柱提取法操作更簡(jiǎn)便安全，雜質(zhì)去除更徹底，產(chǎn)物純度更高。無需長(zhǎng)時(shí)間低溫離心操作；配合真空負(fù)壓裝置使用，操作快捷且標(biāo)準(zhǔn)化。核酸擴(kuò)增檢測(cè)：

PCR-熒光檢測(cè)，使用一步法RT-P

CR反應(yīng)，逆轉(zhuǎn)錄和P

CR在同一反應(yīng)管內(nèi)進(jìn)行，在擴(kuò)增儀上一步完成，減少了操作時(shí)間，避免污染。4支不同濃度的工作標(biāo)準(zhǔn)品

（104-

107I

U/

ml

）均準(zhǔn)確定值，

檢測(cè)結(jié)果可溯源至國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，保證定量結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。檢測(cè)靈敏度：500

I

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ml定量線性范圍：103-107

I

U/

mlP

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.性病三項(xiàng)（UU/NG/CT）核酸檢測(cè)試劑盒樣品處理：沉淀煮沸法核酸擴(kuò)增檢測(cè)：P

CR-

熒光檢測(cè)試劑盒含UNG酶防污染體系待檢標(biāo)本為分泌物，標(biāo)本量不能單位量化，所以是定性檢測(cè)項(xiàng)目。擴(kuò)增試劑無需預(yù)混，直接使用，可長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定保存。P

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.人乳頭瘤病毒（16型、18型）核酸檢測(cè)試劑盒檢測(cè)意義：?

2009年國(guó)家衛(wèi)生部啟動(dòng)的六項(xiàng)公共衛(wèi)生項(xiàng)目之一——宮頸癌檢查?

HP

V核酸檢測(cè)發(fā)現(xiàn)宮頸高度病變的靈敏度比細(xì)胞學(xué)檢查高20%，減少漏檢。?

HPV

16和18亞型感染是引起宮頸癌的最為典型的兩個(gè)亞型，持續(xù)感染者需進(jìn)行合理的細(xì)胞學(xué)和病理學(xué)的檢查及跟蹤監(jiān)測(cè)。檢測(cè)應(yīng)用：?

適合于婦科體檢普查，篩查高危人群?

對(duì)確定為16/

18亞型者的持續(xù)感染監(jiān)測(cè)，警惕預(yù)防?

對(duì)確定為16/

18亞型感染且宮頸病變治療后的隨訪P

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.人乳頭瘤病毒（16型、18型）核酸檢測(cè)試劑盒試劑盒特點(diǎn)?

樣品處理（核酸模板制備）采用煮沸法，實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單；?

實(shí)時(shí)熒光P

CR擴(kuò)增檢測(cè)，與其他DNA類核酸檢測(cè)項(xiàng)目共用的檢測(cè)平臺(tái)和擴(kuò)增檢測(cè)程序；?

全封閉的擴(kuò)增檢測(cè)流程

，避免對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的操作，并含UNG酶防污染體系，有效控制實(shí)驗(yàn)室污染；?

擴(kuò)增試劑無需預(yù)混，直接使用，可長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定保存；?

臨床研究顯示，試劑盒臨床敏感性為97.

9%，臨床特異性為98.

9%，臨床準(zhǔn)確性為98.

6%。試劑盒設(shè)計(jì)?

在同一反應(yīng)管內(nèi)檢測(cè)女性宮頸分泌物拭子樣本中的人乳頭瘤病毒（16型和/

或18型）核酸成份，節(jié)省人力及擴(kuò)增孔位；?

針對(duì)感染最普遍的兩種高危亞型進(jìn)行檢測(cè)，有效保證檢測(cè)的高靈敏度和高特異性；?

方法學(xué)設(shè)計(jì)方便、快捷、準(zhǔn)確、價(jià)廉，尤其適合于婦科體檢篩查與病原體感染（及治療）后的持續(xù)監(jiān)測(cè)。P

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.甲流與H1N1！–

美國(guó)F

DA和CDC、中國(guó)衛(wèi)生部，推薦使用定量P

CR技術(shù)來快速檢測(cè)甲流。–

科華試劑盒：甲型通用型和甲型H1N1流感病毒RNA檢測(cè)試劑盒

(

熒光P

CR法)

，用于鼻咽拭子、口咽拭子等臨床樣品中的甲型流感（I

nf

l

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A）通用型及H1N1型（I

nf

l

uenz

a

A/

H1N1,

2009）病毒核酸的定性檢測(cè)及鑒別診斷。–

采用內(nèi)標(biāo)質(zhì)控技術(shù)，避免了各樣品反應(yīng)管內(nèi)假陰性檢測(cè)情況的出現(xiàn)。–

采用柱提取方法獲得樣品中病原體

R

NA，并采用多重P

CR技術(shù)，對(duì)于每一個(gè)樣品，甲型流感通用型、H1N1型、及內(nèi)標(biāo)在同一反應(yīng)管內(nèi)同步操作檢測(cè)，操作便利并保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。P

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.科華臨床核酸試劑性能總結(jié)科華試劑盒對(duì)核酸檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的保證措施?方法學(xué)設(shè)計(jì)合理，DNA類試劑盒采用沉淀煮沸方法處理樣品，RNA類試劑盒采用柱提取方法處理樣品，兼顧操作便利性及檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。????每個(gè)樣品檢測(cè)管的假陰性檢測(cè)情況控制：具有內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）技術(shù)。假陽性情況控制：UNG酶+d

UTP防污染體系，有效避免前一輪P

CR產(chǎn)物氣溶膠造成的擴(kuò)增污染。定量檢測(cè)試劑盒的工作標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確溯源至國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，定值準(zhǔn)確可靠。采用優(yōu)質(zhì)的原料，保證試劑盒在運(yùn)輸和貯存過程中的穩(wěn)定性，試劑盒效期長(zhǎng)達(dá)12個(gè)月。衛(wèi)生部臨檢中心目前開展的室間質(zhì)評(píng)核酸項(xiàng)目包括：HBV

DNA定性和定量、HCV

RNA定性和定量、沙眼衣原體(

CT)

DNA定性、淋球菌(

NG)

DNA定性、HPV16/

18型定性及分型檢測(cè)等科華臨床核酸診斷試劑系列產(chǎn)品對(duì)每次E

QA發(fā)放的樣品檢測(cè)準(zhǔn)確率達(dá)到100%。P

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.試劑性能——重復(fù)性（HBV

DNA，批內(nèi)）試劑檢測(cè)靈敏度以上、線性范圍內(nèi)的樣品重復(fù)檢測(cè)的孔間C

V不大于5%P

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.試劑性能——重復(fù)性（HBV

DNA，批間）連續(xù)八次（不同日內(nèi)）檢測(cè)不同濃度的樣品，結(jié)果C

V不大于5%P

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.介紹內(nèi)容三、臨床核酸檢測(cè)操作P

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.臨床病原體核酸檢測(cè)核酸檢測(cè)：①

核酸提?。?biāo)本處理）

DNA類病毒：沉淀煮沸法R

NA類病毒：柱提取法手工操作，需配置恒溫儀、離心機(jī)、負(fù)壓抽提裝置等進(jìn)行實(shí)驗(yàn)易受人工操作和儀器耗材因素影響，檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)問題常出現(xiàn)在這一步②

提取物擴(kuò)增檢測(cè)RNA模板逆轉(zhuǎn)錄，形成雙鏈結(jié)構(gòu)雙鏈核酸模板的P

CR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）擴(kuò)增熒光P

CR法將擴(kuò)增與檢測(cè)同管同步完成已實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化檢測(cè)，擴(kuò)增檢測(cè)平臺(tái)是實(shí)時(shí)熒光定量P

CR儀，病原體核酸定性和定量檢測(cè)項(xiàng)目均可在此平臺(tái)上進(jìn)行P

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.臨床核酸檢測(cè)結(jié)果影響因素手工操作多、影響因素多，質(zhì)量控制困難?

臨床標(biāo)本采集和保存、標(biāo)本性質(zhì)?

實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理區(qū)和產(chǎn)物擴(kuò)增及分析區(qū)應(yīng)嚴(yán)格劃分，工作流程應(yīng)是單向的?

核酸提取和擴(kuò)增檢測(cè)操作（試劑盒、耗材、儀器設(shè)備）?

操作人員的技術(shù)能力（操作規(guī)范防止污染、加樣準(zhǔn)確性、反應(yīng)液混勻等）?

結(jié)果的分析處理P

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.防止假陽性檢測(cè)結(jié)果?

避免樣品間交叉污染：–

使用帶濾芯的吸頭防止移液器的氣溶膠污染–

實(shí)驗(yàn)中戴一次性手套–

嚴(yán)格規(guī)范的操作程序?

避免實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增產(chǎn)物污染–

試劑盒的UNG酶防污染體系?

檢測(cè)時(shí)必須設(shè)置陰性對(duì)照P

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.防止假陰性檢測(cè)結(jié)果?

低含量樣品更易受操作影響，出現(xiàn)假陰性檢測(cè)結(jié)果–采用受人工操作因素影響較小的樣品處理方法?

試劑失效–使用保存性能穩(wěn)定，效期長(zhǎng)的試劑盒?

儀器與耗材––使用經(jīng)滅菌及去RNase處理的吸頭和離心管儀器定期校正，尤其關(guān)注離心機(jī)離心力、恒溫裝置的溫控準(zhǔn)確度、及實(shí)時(shí)熒光PCR儀孔間差異?

操作失誤–––在可以確保檢測(cè)質(zhì)量的基礎(chǔ)上，采用操作較為簡(jiǎn)便的樣品處理方法和核酸擴(kuò)增檢測(cè)方法實(shí)驗(yàn)中戴一次性手套嚴(yán)格規(guī)范的操作程序?

檢測(cè)時(shí)必須設(shè)置陽性對(duì)照P

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.核酸DNA處理注意事項(xiàng)DNA提?。撼恋碇蠓蟹?.

樣品加處理液A，離心沉淀病毒1.

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