輸血科試驗(yàn)操作規(guī)程

經(jīng)典word整理文檔，僅參考，雙擊此處可刪除頁眉頁腳。本資料屬于網(wǎng)絡(luò)整理，如有侵權(quán)，請(qǐng)聯(lián)系刪除，謝謝！一、血型血清學(xué)檢查的操作規(guī)程（一）ABO+RH血型鑒定常規(guī)方法1..試劑：?jiǎn)慰寺』蚨嗫寺】埂⒖笲試劑，RhD(IgM)血型單克隆抗體定型試劑，2-5%的反定紅細(xì)胞懸液2.．操作步驟：（1）將病人標(biāo)本離心（2）反定型：取兩只試管分別標(biāo)明、，加入相應(yīng)的反定細(xì)胞各1滴，加入病人的血漿1滴，離心（3）將玻片用紅蠟筆劃分為3個(gè)區(qū)域，各加一滴待測(cè)標(biāo)本紅細(xì)胞，分別滴加抗、抗、RhD試劑，輕輕晃動(dòng)觀察結(jié)果（4）結(jié)果：有凝集為陽性。無凝集無溶血為陰性。正反定型對(duì)照得出結(jié)果（二）ABO+RH血型鑒定（卡氏法）操作1.試劑：OrthoBiovueABO-Rh正反定型血型試劑卡友6個(gè)微柱組成，每一柱中含有緩沖液，其成分為牛血清蛋白、大分子增強(qiáng)劑以及0.1%疊氮鈉和0.01M的EDTA。2.操作步驟：（1）配置0.8%的反定細(xì)胞（一般配成約1.5%）（2）將試劑卡編號(hào)，并打開試劑卡（3）將病人血標(biāo)本離心（450ul的反定細(xì)胞B5號(hào)650ul的病人血清。（5）取50ul的病人壓積紅細(xì)胞加入1ml的鹽水中配成的紅細(xì)胞懸液，分別加入前四柱10ul的紅細(xì)胞懸液。（6）離心，讀取結(jié)果.按照下表并結(jié)正反定型對(duì)照。得出結(jié)果（二）改良凝聚胺技術(shù)交叉配血試驗(yàn)一.主要組成成份：R1：低離子介質(zhì)、R2：凝聚胺、R3：假凝集清除液。二.步驟：1.復(fù)檢供血者、受血者血型2.主側(cè)管加入供血者3%-4%的紅細(xì)胞懸液1滴，加入受血者血清1滴或2滴3.次側(cè)管加入受血者3%-4%的紅細(xì)胞懸液1滴，加入供血者血清1滴或2滴4.加低離子介質(zhì)33013500r/min離心150.1ml,11min內(nèi)消失呈均勻混懸液，為陰性，凝集1min內(nèi)不能被消除，即為陽性。三.結(jié)論：陽性表示受（供）血者紅細(xì)胞血型抗原相應(yīng)的抗體（IgG或）不相容，陰性表示供受血者相容。（三）卡式交叉配血試驗(yàn)一、工作準(zhǔn)備：1.生理鹽水2.0.8%-1%樣本紅細(xì)胞配備：10ul樣本壓積紅細(xì)胞加入1ml的生理鹽水中二.操作步驟：1.1號(hào)管中（主側(cè)）加入50ul供血者紅細(xì)胞懸液，25ul受血者血漿或血清。2.2號(hào)管中（次側(cè)）加入50ul受血者紅細(xì)胞懸液，25ul供血者血漿或血清。3.37℃孵育15min4.離心5min，判斷結(jié)果，記錄注：至為抗人球配血不成功，（0）為配血成功(四）抗體效價(jià)測(cè)定操作規(guī)程操作步驟：一．IgG類1IgG類抗體效價(jià)滴定，須取適量血清200ul加等體積2－Me溶液混合，封口，置37℃水浴箱作用60200μl病人血清＋600μl生理鹽水備用排列6支試管按順序編號(hào)。第二管開始加樣槍各加加生理鹽水200，在第一管和第二管中各加入稀釋血清200μl，第二管混勻后移出200μl轉(zhuǎn)至第3管，以同樣操作稀釋至第66管吸出200μl76管的血清稀釋度依次是1∶81∶16，1：32，1：64，1：128，1：256；2每管各加相應(yīng)紅細(xì)胞懸液200μl，則加入A型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液；如待檢血清抗體為抗，則加入B型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液；如待檢血清中既有抗A又有抗，則倍量稀釋兩份血清，一份加入A型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液，另一份加入B型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液；3.先直接離心觀察結(jié)果，之后再每管分別加入凝聚胺試劑盒中的R1液3d，混合30S均勻后，再各加R2溶液1滴，并混合均勻，離心后再加R3液2滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法，然后判讀結(jié)果。通常以肉眼觀察到的第一個(gè)“±”的凝集管作為判斷的終點(diǎn)，終點(diǎn)血清稀釋度的倒數(shù)為效價(jià)（二．IGM1、血清連續(xù)倍量稀釋法先稀釋血清：100μl病人血清＋700μl生理鹽水備用，排列6支試管按順序編號(hào)。第二管開始到第六管加樣槍各加加生理鹽水200ul，從第一管和第二管中各加入稀釋血清200μl，第二管混勻后移出200μl轉(zhuǎn)至第3管，以同樣操作稀釋至第66管吸出200μl暫時(shí)保留在另一試管中（可作為第76管的血清稀釋度依次是1∶8，1∶16，1：32，1：64，1：128，1：256；2、加紅細(xì)胞懸液（自配紅細(xì)胞懸液同反定型試劑）每管各加2%相應(yīng)紅細(xì)胞懸液200μlA，則加入A型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液；如待檢血清抗體為抗，則加入B型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液；如待檢血清中既有抗A又有抗，則倍量稀釋兩份血清，一份加入A型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液，另一份加入B型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液；此為IgM類鹽水抗體可立即離心后觀察。（五）新生兒溶血病檢查和抗體釋放試驗(yàn)，步驟：1.將患兒標(biāo)本離心2.直接抗人球蛋白試驗(yàn)取10ul的壓積紅細(xì)胞加入1ml生理鹽水中配成1%的紅細(xì)胞懸液，混勻后取50ul加入抗人球蛋白卡中，離心，觀察結(jié)果。3.游離抗體試驗(yàn)取患兒血漿25ul加入與患兒同型的紅細(xì)胞50ul，混勻后取50ul加入抗人球蛋白卡中，37℃孵育30min,離心，觀察結(jié)果。4.抗體釋放試驗(yàn)將患兒壓積紅細(xì)胞洗滌3-50.5ml加入等量的生理鹽水，56℃水浴震蕩10min后立即3500r/min離心1min，取25ul上清液，加入與患兒同型的紅細(xì)胞50ul，混勻后取50ul加入抗人球蛋白卡中，37℃孵育30min，離心，觀察結(jié)果。4（六）不規(guī)則抗體檢查一．概述：不規(guī)則抗體檢查也稱紅細(xì)胞抗體檢查。所謂不規(guī)則抗體是抗Ａ、抗Ｂ以外的血型抗體，其多為ＩｇＧ抗體。主要是經(jīng)輸血或妊娠等免疫刺激產(chǎn)生,在鹽水介質(zhì)中不能凝集而只能致敏相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞,必須通過特殊介質(zhì)酶、抗人球蛋白、ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ等才能使致敏紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集反應(yīng)。原的紅細(xì)胞,抗原、抗體發(fā)生免疫性結(jié)合，補(bǔ)體的參與下,使輸入的紅細(xì)胞發(fā)生溶解,即發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)。患者出現(xiàn)發(fā)熱、貧血、黃疸和血紅蛋白尿,嚴(yán)重時(shí)甚至危及其生命。因此,在輸血中要經(jīng)常警惕這種輸血反應(yīng)發(fā)生的可能性。當(dāng)不規(guī)則抗體篩選陽性時(shí),必須進(jìn)一步作抗體鑒定,確定其特異性后,再輸入無相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞,才能達(dá)到安全輸血之目的。不規(guī)則抗體是引起溶血性輸血反應(yīng)和新生兒溶血病的主要因素之一,對(duì)