分析前變異臨床對(duì)生化檢驗(yàn)的影響優(yōu)秀課件

分析前變異臨床對(duì)生化檢驗(yàn)的影響第一頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五

分析前變異是指在分析前階段產(chǎn)生的各種變異。分析前階段是實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)最重要組成部份，包括從病人準(zhǔn)備到樣本收集等分析前過(guò)程。分析前階段產(chǎn)生的變異直接影響采集樣本的質(zhì)量，即使分析儀器非常先進(jìn)，而且室內(nèi)和室間質(zhì)控非常良好，最終仍不能得到可靠的結(jié)果。第二頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五分析前變異可分成三大類。：一、生理性變異二、樣本收集和處理過(guò)程的變異三、內(nèi)源性干擾因素第三頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五一、生理性變異生理性變異包括：年齡、性別、采血時(shí)間、季節(jié)、海拔高度、妊娠、月經(jīng)周期和生活方式；

1.年齡年齡對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響可以用不同的參考范圍來(lái)區(qū)別。健康的生長(zhǎng)期兒童的骨骼生長(zhǎng)和發(fā)育表現(xiàn)為成骨細(xì)胞分泌，使堿性磷酸酶增加。因此，生長(zhǎng)期兒童的堿性磷酸酶的活性比健康成人大約高3倍。第四頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五1.年齡新生兒的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)高于成人，出生后大量RBC被破壞，使血紅蛋白水平增加，血紅蛋白在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)中轉(zhuǎn)變成間接膽紅素，由于新生兒肝中缺乏葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶，不能將間接膽紅素轉(zhuǎn)變成水溶性的結(jié)合膽紅素，表現(xiàn)為血清中總膽紅素和間接膽紅素水平增加。年齡可以影響腎功能，表現(xiàn)為肌酐清除率的變化。肌酐清除率每隔10年會(huì)漸漸減少。例如：30歲左右的人肌酐清除率的平均值是每1.73m2體表面積140ml/min(2.33ml/s)；相反，80歲左右的人肌酐清除率減少到每1.73m2體表面積97ml/min(1.62ml/s)，50歲以上的人，肌酐清除率的減少還與肌肉的量減少有關(guān)。第五頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五1.年齡抗利尿激素的水平與年齡相關(guān)。有研究表明，53到87歲的健康人（68人）抗利尿激素水平比21至51歲的健康人（45人）明顯增高（53至87歲健康人的水平是4.7±0.3pg/ml，21至51歲健康人是2.1±0.2pg/ml）。甲狀腺水平明顯地受到年齡的影響。據(jù)報(bào)道，促甲狀腺素水平在老年人群（平均年齡79.6歲）比青年人群（平均年齡39.4歲）高38%。而老年組血清三碘甲腺原氨酸水平比青年組低11%。上面的實(shí)例說(shuō)明年齡的變化會(huì)影響某些生化檢驗(yàn)的結(jié)果，因而在臨床工作中對(duì)不同的年齡段制定不同的參考范圍，而不能使用統(tǒng)一的參考范圍。第六頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五

2．性別

在15歲到55歲之間，總膽固醇（TC）和低密度脂蛋白（LDL）的水平女性比男性稍高，而高密度脂蛋白（HDL）的水平在15-55歲的男性和女性沒(méi)有差異。和肌肉有關(guān)的分析項(xiàng)目如肌酐和肌酸激酶，男性的水平明顯高于女性的水平。但是，運(yùn)動(dòng)量大的女性，其肌肉質(zhì)量增加，肌酐及CK和男性相比沒(méi)有差異。有報(bào)道曾對(duì)23項(xiàng)常規(guī)生化項(xiàng)目的分析結(jié)果進(jìn)行性別統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ALT、UA、BU、CREA、GGT、TC、CK、MG有性別差異。性別的差異可能是由于肌肉質(zhì)量的不同或內(nèi)分泌及器官特異性的不同而引起差異。由于這些項(xiàng)目有性別差異存在，因而需要對(duì)于不同的性別制定不同的參考范圍。第七頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五3．采血時(shí)間

某些分析項(xiàng)目有時(shí)間節(jié)律的變化。例如：皮質(zhì)醇一般在早上6點(diǎn)左右出現(xiàn)峰值，晚上和午夜降低；促甲狀腺激素水平峰值出現(xiàn)在深夜，中午時(shí)最低；生長(zhǎng)激素的水平在清晨最低，睡眠中升高。一般情況下，激素均存在時(shí)間節(jié)律變化，但不必為不同的時(shí)間制定不同的參考范圍，而需要統(tǒng)一采集標(biāo)本的時(shí)間。第八頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五4、季節(jié)性影響由于夏季暴露于日光中的時(shí)間較長(zhǎng)，因而維生素D的水平會(huì)升高；總膽固醇水平在冬季比夏季平均增高2.5%；甲狀腺三碘甲腺原氨酸水平在冬季比夏季增高平均20%。因此，當(dāng)病人在不同的季節(jié)檢查這些類的項(xiàng)目時(shí)，應(yīng)考慮季節(jié)變化帶來(lái)的影響。第九頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五4、季節(jié)性影響春季－血清/血漿：↑AST、TG↓ALT、Glu、甲狀腺激素、尿素夏季－血清/血漿：↑LD、肌酐、尿酸↓ALT、白蛋白、尿素秋季－血清/血漿：↑白蛋白、Ca、Glu、尿素↓AST、TG冬季－血清/血漿：↑ALT↓Ca、肌酐、LD、尿酸第十頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五5．海拔高度

在海平面與較高的海拔高度相比較，血清中某些成份的水平會(huì)發(fā)生變化。例如:C反應(yīng)蛋白在35600米高度時(shí)升高65%。一些分析物的濃度因高度增加而減少，如血漿中的腎素、轉(zhuǎn)鐵蛋白，尿肌酐，雌三醇及肌酐清除率等。當(dāng)病人在兩個(gè)差別很大的海拔高度做相同的檢查時(shí)，對(duì)于結(jié)果的分析應(yīng)考慮高度的影響。第十一頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五6．月經(jīng)月經(jīng)周期是成熟女性的正常生理過(guò)程，在月經(jīng)周期的三個(gè)不同時(shí)期，和生殖有關(guān)的多種激素發(fā)生不同的變化，因此，雌二醇、促卵泡激素、黃體生成素等的參考范圍隨月經(jīng)周期的各階段（即卵泡期、中期、黃體期）而不同。第十二頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五7．妊娠

妊娠時(shí)血容量增加導(dǎo)致血液稀釋，使微量元素的測(cè)定結(jié)果明顯降低；在妊娠后期，胎盤產(chǎn)生雌激素和絨毛膜促生長(zhǎng)激素，使血清葡萄糖的水平升高；妊娠期代謝需求增加使脂肪動(dòng)員增加，使血清載脂蛋白AI、AⅡ、甘油三酯和總膽固醇（特別是LDL-C）大大增加。妊娠時(shí)胎盤生成熱穩(wěn)定堿性磷酸酶、甲胎蛋白、銅藍(lán)蛋白、急性時(shí)相蛋白和凝血因子，使相應(yīng)的檢查結(jié)果升高。由于妊娠是特殊的生理過(guò)程，對(duì)于孕婦的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)充分考慮妊娠的影響。第十三頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五8．生活方式

飲食影響一些分析物的測(cè)定結(jié)果。非素食者的飲食是高蛋白或高嘌呤，其尿酸、尿素和氨的水平比素食者高。富含魚油的飲食會(huì)降低血清中甘油三酯和極低密度脂蛋白（VLDL）的水平，可能是魚油具有抑制VLDL和甘油三酯合成的能力。攝入咖啡因會(huì)影響一些分析物的結(jié)果，咖啡因抑制磷酸二酯酶的活性，使cAMP水平增高，cAMP活化甘油三酯酯酶導(dǎo)致游離脂肪酸濃度增加3倍。游離脂肪酸競(jìng)爭(zhēng)白蛋白分子上結(jié)合位點(diǎn)，取代結(jié)合在白蛋白上的藥物或激素，因此，影響了游離藥物或激素濃度的測(cè)定。吸煙會(huì)對(duì)某些生化項(xiàng)目產(chǎn)生影響。如在1小時(shí)內(nèi)抽4支香煙，血漿中腎上腺素、醛固酮、皮質(zhì)醇、游離脂肪酸和游離甘油濃度會(huì)升高。第十四頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五飲食的影響（一次標(biāo)準(zhǔn)餐后）甘油三脂增加50%；（至少應(yīng)當(dāng)在抽血前的3天以內(nèi)注意保持正常飲食）天門冬氨酸轉(zhuǎn)移酶增加20%；膽紅素、無(wú)機(jī)磷和糖增加15%；丙氨酸轉(zhuǎn)移酶和鉀增加10%；尿酸、總蛋白、白蛋白、尿素、鈣和膽固醇增加5%左右。由此看來(lái)，飲食結(jié)構(gòu)的不同，對(duì)上述指標(biāo)的影響也是不同的；因此大多數(shù)檢驗(yàn)項(xiàng)目都要求在早晨空腹采血。在作內(nèi)生肌酐清除率測(cè)定之前，待檢者應(yīng)禁食肉類3天，不飲咖啡和茶，停用利尿劑，試驗(yàn)前避免劇烈運(yùn)動(dòng)，飲足量的水。第十五頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五

二、標(biāo)本收集和處理的變異標(biāo)本收集和處理的變異包括禁食時(shí)間、標(biāo)本采集時(shí)間、采血時(shí)的姿勢(shì)、使用壓脈帶、輸液、運(yùn)動(dòng)、抗凝劑、穩(wěn)定劑和標(biāo)本處理等。標(biāo)本收集和處理標(biāo)準(zhǔn)化，使分析前誤差達(dá)到最小。

第十六頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五1．禁食時(shí)間

被采血者在標(biāo)本收集前應(yīng)禁食一整夜（即至少12小時(shí)），禁食12小時(shí)的原因是脂肪餐后，血清中甘油三酯的水平可持續(xù)升高近9小時(shí)，而總膽固醇和載脂蛋白AI、AⅡ的濃度幾乎無(wú)影響。但是，過(guò)長(zhǎng)的禁食時(shí)間會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如：48小時(shí)禁食，肝的膽紅素清除能力比一般情況下高240%，使血清間接膽紅素濃度降低。如果延長(zhǎng)禁食，一些特異性蛋白質(zhì)，如補(bǔ)體、前白蛋白和白蛋白水平降低。因此，應(yīng)統(tǒng)一禁食的時(shí)間，一般為12小時(shí)。第十七頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五2．標(biāo)本采集時(shí)間

標(biāo)本采集時(shí)間要依據(jù)血循環(huán)中分析物水平的變化而定，保持每天標(biāo)本采集時(shí)間恒定對(duì)于消除由日內(nèi)變異造成的影響很重要。如激素的測(cè)定需要嚴(yán)格控制標(biāo)本采集的時(shí)間。對(duì)于尿標(biāo)本的采集時(shí)間依被測(cè)成分而定，對(duì)有日間變異的分析物進(jìn)行測(cè)量，收集24小時(shí)尿標(biāo)本是必要的。

第十八頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五3．采血時(shí)體位的影響（1）許多血漿生化成份在站、坐、臥三種不同體位時(shí)有明顯的濃度差異，長(zhǎng)期以來(lái)，人們忽視了采血時(shí)體位變化對(duì)生化檢測(cè)的影響。由于血液中直徑大于4nm的成份不能通過(guò)血管壁轉(zhuǎn)移至間質(zhì)，使其血漿含量升高5—15%。直立位時(shí)血漿總量比臥位約減少12%，一般情況下，與仰臥相比，坐位時(shí)多數(shù)大分子物質(zhì)（如白蛋白）的濃度升高5-15%。當(dāng)檢測(cè)HB、RBC、WBC、Hct、Tca、蛋白質(zhì)和血脂時(shí)應(yīng)相對(duì)固定體位。（2）建議門診病人靜坐5~10分鐘后以坐位（從肘靜脈）采血為最佳。（3）臥床患者可臥位采血。第十九頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五4．壓脈帶時(shí)間的影響

(1)

使用壓脈帶可降低血管內(nèi)壓力，使其低于心臟收縮壓，使小分子和液體從血管內(nèi)移出至組織間隙，而不能通過(guò)毛細(xì)血管壁的大分子物質(zhì)的濃度增加。使用壓脈帶過(guò)久，局部缺氧使無(wú)氧酵解增加，血漿中乳酸增高而pH值降低，pH值降低使鉀從細(xì)胞內(nèi)移出，引起血清鉀假性升高。若采血時(shí)要求病人反復(fù)握拳可使K+增加1-2mmol/L，最高可至2.7mmol/L。pH值降低會(huì)改變藥物-蛋白結(jié)合或激素-蛋白結(jié)合，使游離藥物和游離激素濃度增加。(2)壓脈帶不應(yīng)扎得太緊，扎脈的時(shí)間應(yīng)盡量縮短。抽血時(shí)，見到回血應(yīng)立即松開壓脈帶，減少血行阻滯時(shí)間（更不應(yīng)該鼓勵(lì)被抽血者長(zhǎng)時(shí)間、用力攥拳）。第二十頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五4、壓脈帶時(shí)間的影響(3)血脂項(xiàng)目、出凝血項(xiàng)目、血常規(guī)項(xiàng)目抽血時(shí)壓脈帶使用應(yīng)限定在1分鐘以內(nèi)；壓脈帶扎脈小于1分鐘，血樣的各項(xiàng)檢驗(yàn)指標(biāo)無(wú)明顯改變。(4)壓脈帶束縛太緊、時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)造成血行阻滯時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，因溶血、血小板激活、纖溶系統(tǒng)激活等原因?qū)⑹挂陨蠙z驗(yàn)項(xiàng)目的結(jié)果；產(chǎn)生偏差，甚至誘導(dǎo)錯(cuò)誤診治壓脈帶扎脈3分鐘后膽紅素、膽固醇、轉(zhuǎn)氨酶均會(huì)增加5倍以上。(5)需要重新采血時(shí)，在壓脈帶束縛時(shí)間太長(zhǎng)的情況下，應(yīng)當(dāng)在對(duì)側(cè)手臂重新采血。因此在抽血時(shí)，為了減少壓脈帶使用對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，應(yīng)在針頭一進(jìn)入靜脈后解開立即壓脈帶，并避免過(guò)度的握拳。第二十一頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五5．輸液

在實(shí)際工作時(shí)有發(fā)現(xiàn)罕見的高血糖值，其原因是從輸液同側(cè)手臂采血引起的。盡量避免輸液時(shí)采血(1)一般情況下，輸入脂肪乳劑的病人應(yīng)在8小時(shí)后采血；輸入碳水化合物、氨基酸、蛋白質(zhì)或電解質(zhì)的病人在1小時(shí)后采取血標(biāo)本。(2)搶救過(guò)程中必須一邊輸液一邊采血時(shí)，應(yīng)避免從正在輸液的肢體上采血，應(yīng)避免輸液成份混入血液標(biāo)本，還應(yīng)在檢驗(yàn)申請(qǐng)單上注明。(3)輸液時(shí)采血應(yīng)當(dāng)遵從“遠(yuǎn)端原則”：選擇在輸液的對(duì)側(cè)肢體或無(wú)輸液的其他肢體（如足部）靜脈采血。在四肢靜脈都輸液時(shí)，可以選擇在輸液靜脈的遠(yuǎn)心端（靜脈血流的上游）采血。

第二十二頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五6．運(yùn)動(dòng)的影響

運(yùn)動(dòng)時(shí)腎上腺素、去甲腎上腺素、糖皮質(zhì)激素、促腎上腺皮質(zhì)激素和生長(zhǎng)激素的升高，而胰島素減低。對(duì)于劇烈運(yùn)動(dòng)可以使許多血液成份發(fā)生改變，甚至持續(xù)24小時(shí)以上，還會(huì)產(chǎn)生一定程度的血管內(nèi)溶血，使血漿中結(jié)合珠蛋白水平降低。為了減少由于運(yùn)動(dòng)引起的分析前的變異，應(yīng)建議病人至少在試驗(yàn)前一晚上避免劇烈活動(dòng)并在采血前避免長(zhǎng)距離行走、跑步或爬樓。因此劇烈運(yùn)動(dòng)之后不應(yīng)立即抽血；快步行走之后，至少應(yīng)休息10~15分鐘然后再抽血，應(yīng)在平靜狀態(tài)抽血，避免情緒激動(dòng)。

第二十三頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五6．運(yùn)動(dòng)的影響①適量的運(yùn)動(dòng)：↑GLU、乳酸鹽、肌酐、尿酸、AST、LD、CK、尿素↓pH、pCO2、膽固醇、TG②劇烈運(yùn)動(dòng)：↑糖蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、2-巨球蛋白、纖溶蛋白活性、PRA、氯化物、ACP、ALT、醛固酮、GH、PRL、兒茶酚胺、FFA、肌酐、尿素↓白蛋白、膽紅素、Fe、LD、K、Na、總血脂尿液：↑游離皮質(zhì)醇、兒茶酚胺、pH值第二十四頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五7．抗凝劑

臨床生化常用的抗凝劑為肝素的各種鹽類，包括肝素納、肝素鋰和肝素銨。三種鹽用于電解質(zhì)的測(cè)定可得到相同的結(jié)果，但肝素鋰優(yōu)于其它兩類，這是由于肝素鈉可能引起鈉水平的假性升高，以及用尿素酶測(cè)定尿素時(shí)，肝素銨可引起血清尿素濃度的假性升高。

第二十五頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五8．穩(wěn)定劑氟化鈉（NaF）和碘醋酸鋰可單獨(dú)用于血液采集，也可用于草酸鉀、EDTA、枸櫞酸三鈉和肝素鋰等抗凝劑，用于抑制糖酵解的NaF的濃度為4.3mg/ml血，與抗凝劑合用時(shí)，如Na2EDTA或k2EDTA（1mg/ml血）或草酸鉀（2mg/ml血），氟化物的濃度為2.5mg/ml血（60mmol/L）。不加入糖酵解抑制劑，在室溫條件下，新生兒標(biāo)本的血糖1小時(shí)降低24%，而健康成人標(biāo)本的血糖水平降低5%。當(dāng)標(biāo)本采集后放置室溫5小時(shí)后，Hct高的新生兒的不含糖酵解抑制劑的標(biāo)本，血糖降低可達(dá)68%。第二十六頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五9．標(biāo)本的處理和保存

標(biāo)本的貯存，分離血清、血漿或細(xì)胞的過(guò)程會(huì)引入變異，存在于細(xì)胞內(nèi)的分析物需要從血液中快速分離。氟化物和碘醋酸鹽需大約3小時(shí)來(lái)穩(wěn)定糖的水平，這是因?yàn)椴荒軌蛞种铺墙徒馔緩降牡牡谝粋€(gè)酶--已糖激酶。氟化物作用于糖酵解途徑的第八個(gè)酶--烯醇化酶，而碘醋酸鹽作用于糖酵解途徑的第五個(gè)酶--磷酸甘油醛脫氫酶，草酸鉀能抑制丙酮酸激酶，氟化物和草酸鉀一起使用能延緩血收集后1小時(shí)內(nèi)乳酸的形成。多種方法用以提高抑制劑的功效。一種方法是：枸櫞酸、枸櫞酸三鈉、EDTANa2和少量氟化鈉(0.2mg)混合，通過(guò)維持血pH在5.3-5.9的范圍來(lái)抑制糖酵解途徑的酶反應(yīng)。由于添加了抑制劑，室溫下糖酵解可被抑制8小時(shí),而24h后葡萄糖的均值±標(biāo)準(zhǔn)差下降0.07±0.06mmol/L。第二十七頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五9．標(biāo)本的處理和保存

另一種糖酵解抑制方法是添加甘露糖（已糖），由于甘露糖是葡萄糖的差向異構(gòu)體，和葡萄糖競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合已糖激酶達(dá)到抑制糖酵解的作用。但是甘露糖是一個(gè)競(jìng)爭(zhēng)抑制劑，其抑制作用僅保持4小時(shí)。如果加入了氟化物，可以得到一個(gè)更好的葡萄糖穩(wěn)定性。當(dāng)甘露糖濃度是3mg/ml時(shí)，用已糖激酶和葡萄糖氧化酶法測(cè)葡萄糖濃度，不會(huì)產(chǎn)生干擾。甘露糖濃度為9mg/ml，測(cè)定結(jié)果會(huì)增高1.0mmol/L。如果血標(biāo)本收集后立即分離血漿，由于分解葡萄糖的酶存在于細(xì)胞內(nèi)，血漿中的葡萄糖水平可長(zhǎng)期穩(wěn)定。第二十八頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五三、內(nèi)源性的干擾因素

內(nèi)源性干擾非常廣泛，主要的干擾物來(lái)源于藥物及其代謝產(chǎn)物。目前，我們對(duì)于藥物的干擾處于了解的狀態(tài)，消除對(duì)測(cè)定方法的干擾還很困難。實(shí)際工作中不能解釋的分析結(jié)果可能就是藥物干擾產(chǎn)生的。目前，人們對(duì)于普通的干擾因素（如溶血和脂血等）進(jìn)行了廣泛的研究，掌握大量的相關(guān)知識(shí)。一般情況下，輕微的溶血對(duì)于許多常規(guī)臨床生化實(shí)驗(yàn)方法的影響是微不足道的，而重度溶血對(duì)RBC中的濃度比血漿中濃度高得多的成分產(chǎn)生嚴(yán)重影響，對(duì)于RBC中濃度低于血漿中濃度的成分產(chǎn)生一個(gè)輕微的稀釋效應(yīng)。如：乳酸脫氫酶存在RBC中的濃度比在血漿中高160倍，酸性磷酸酶高68倍，AST高6.7倍，鉀高23倍。當(dāng)標(biāo)本溶血時(shí)，這些項(xiàng)目的結(jié)果出現(xiàn)假性升高。對(duì)于脂血標(biāo)本，脂質(zhì)是一個(gè)方法依賴性的干擾物質(zhì)，干擾來(lái)于機(jī)制的差異，如標(biāo)本的不同種類，水的置換和親脂成份的吸收。明顯的高脂標(biāo)本干擾可用電泳法和比色法測(cè)定總蛋白。第二十九頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五三、內(nèi)源性的干擾因素關(guān)于血?dú)夥治龅姆治銮白儺?。包括：病人的仰臥姿勢(shì)；在收集動(dòng)脈血之前和收集過(guò)程中，是否停止吸氧；容器材料（玻璃還是塑料注射器）的影響；抗凝劑是干粉還是液體肝素；收集標(biāo)本到分析之間的時(shí)間等等均應(yīng)該標(biāo)準(zhǔn)化。分子生物學(xué)是另一個(gè)對(duì)分析前變異關(guān)注的一個(gè)領(lǐng)域。在細(xì)胞溶解時(shí)使用去污劑，不同類型的去污劑會(huì)影響PCR技術(shù)中的DNA擴(kuò)增；溶血標(biāo)本中正鐵血紅素對(duì)DNA聚合酶的影響；組織的處理，固定和固定時(shí)間等均會(huì)產(chǎn)生影響。第三十頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五三、內(nèi)源性的干擾因素隨著現(xiàn)代技術(shù)的發(fā)展，新的生化標(biāo)志物不斷被推出，分析前變異的問(wèn)題也隨之出現(xiàn)。例如：同型半胱氨酸是心血管疾病的一個(gè)標(biāo)志物，但是，在體外可由細(xì)胞生成，因此需要快速分離血清或血漿。分析前變異對(duì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)會(huì)產(chǎn)生重要的影響，對(duì)于各種分析前的變異應(yīng)充分了解，采取制定不同的參考范圍、標(biāo)準(zhǔn)化收集標(biāo)本等措施，控制分析前變異，提高檢驗(yàn)質(zhì)量。第三十一頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五影響ELISA結(jié)果的若干內(nèi)源性干擾因素內(nèi)源性干擾因素一般包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體、因使用鼠抗體治療或診斷誘導(dǎo)的抗鼠Ig抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)等。在日常的臨床血清(漿)標(biāo)本中，有相當(dāng)比例不同程度的含有上述各種干擾物質(zhì)，從而導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果的假陽(yáng)性。第三十二頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五例：影響ELISA結(jié)果的若干內(nèi)源性干擾因素1.類風(fēng)濕因子(rheumatoidfactors,RF)干擾在類風(fēng)濕患者和其他疾病以及正常人血清中，常含有較高或不同濃度的RF，RF一般為IgM型，亦有IgG和IgA型，RF具有與變性IgG產(chǎn)生非特異結(jié)合的特點(diǎn)，因?yàn)樵贓LISA測(cè)定中，其可與固相上包被的特異抗體IgG以及隨后加入的酶標(biāo)的特異抗體IgG結(jié)合，從而出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。避免其發(fā)生的方法有：(1)稀釋標(biāo)本：在測(cè)定前對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋，特異的IgM因高滴度存在仍可檢出，而非特異的RF則會(huì)因?yàn)橄♂屪兂煞浅５偷牡味龋瑥亩鴮?duì)測(cè)定幾乎不產(chǎn)生干擾。(2)用F(ab)2替代完整的IgG。(3)標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理。(4)檢測(cè)抗原時(shí)，可在標(biāo)本中加入可使RF降解的還原劑：如2-s巰基乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。

注：F(ab’)2的片段。該片段由一對(duì)通過(guò)兩個(gè)二硫鍵相連的Fab’單元組成。第三十三頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五影響ELISA結(jié)果的若干內(nèi)源性干擾因素2.補(bǔ)體的干擾在固相酶免疫測(cè)定中：（a）固相特異抗體和酶標(biāo)二抗分子發(fā)生變構(gòu)，從而其Fc段的補(bǔ)體C1結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來(lái)，這樣補(bǔ)體C1就成為一個(gè)中介物將二者交聯(lián)起來(lái)，造成假陽(yáng)性結(jié)果。（b）固相抗體也會(huì)因?yàn)榛罨a(bǔ)體的結(jié)合，封閉抗體的抗原表位結(jié)合能力，而引起假陽(yáng)性結(jié)果或使定量測(cè)定結(jié)果偏低。排除的方法有：(1)對(duì)臨床血清標(biāo)本加熱滅活補(bǔ)體：采用56℃30min加熱可使標(biāo)本中的補(bǔ)體C1滅活。(2)使用特異的雞抗體IgY作為標(biāo)記或固相抗體。雞抗體不激活人的補(bǔ)體系統(tǒng)。因此，使用特異的雞抗體，不會(huì)出現(xiàn)因補(bǔ)體激活而存在的假陽(yáng)性和假陰性干擾。第三十四頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五3.異嗜性抗體(heterophilieantibodies)的干擾天然的異嗜性抗體(lgG)可分為兩類，一類可結(jié)合于山羊、小鼠、大鼠、馬和牛IgG的Fab區(qū)域，但不與兔IgG的Fab區(qū)結(jié)合(85%的假陽(yáng)性由其引起)。另一類可結(jié)合于小鼠、馬、牛和兔IgG的Fc區(qū)表位，但不與山羊和大鼠IgG的Fc區(qū)表位結(jié)合(15%的假陽(yáng)性由其引起)。異嗜性抗體可通過(guò)交聯(lián)固相和酶標(biāo)的單抗或多抗而出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。異嗜性抗體引起干擾的排除方法有：(1)使用特異的兔F(ab’)2片段作為固相或測(cè)定酶標(biāo)抗體。(2)在標(biāo)本或標(biāo)本稀釋液中加入過(guò)量的動(dòng)物Ig，封閉可能存在的異嗜性抗體。但加入量不足或亞類不同時(shí)無(wú)效。(3)使用靶特異的非Ig親和蛋白(Affibody)替代固相或酶標(biāo)抗體，采用噬菌體展示技術(shù)展示來(lái)自單個(gè)金黃色葡萄球A蛋白(SPA)聯(lián)合文庫(kù)的的人IgA結(jié)合親和蛋白，用于IgA的測(cè)定，不受異嗜性抗體的影響。(4)使用特異的雞抗體作為固相和測(cè)定抗體。第三十五頁(yè)，共四十頁(yè)，編輯于2023年，星期五4.抗鼠Ig抗體的干擾：抗鼠抗體對(duì)使用鼠源性單克隆抗體的免疫測(cè)定有干擾，可產(chǎn)生假陽(yáng)性。排除干擾的方法有：(1)使用特異的抗體F(ab’)2片段作為固相或測(cè)定酶標(biāo)抗體。(2)在標(biāo)本或標(biāo)本稀釋液中加入過(guò)量的鼠Ig，封閉可能存在的抗鼠抗體。(3)使用特異的雞抗體IgG作為固相和測(cè)定抗體。雞IgG不與人抗鼠抗體反應(yīng)。因而，用其作為固相或酶標(biāo)抗體不會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。第三十六