土壤中蛔蟲(chóng)卵檢測(cè)

土壤中蛔蟲(chóng)卵檢測(cè)1第一頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五2第二頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五

2006～2010年的全國(guó)土源性線蟲(chóng)病監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)顯示，土源性線蟲(chóng)病監(jiān)測(cè)點(diǎn)土壤中人活蛔蟲(chóng)卵檢出率分別為25.8%，17.3%，19.0%，19.7%和14.7%，統(tǒng)計(jì)分析表明土壤人蛔蟲(chóng)卵檢出率與人群蛔蟲(chóng)感染率呈正相關(guān)，因此土壤中蛔蟲(chóng)卵的污染情況是評(píng)價(jià)環(huán)境衛(wèi)生狀況的一項(xiàng)重要指標(biāo)。3第三頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五原理采樣方法注意事項(xiàng)鑒別（受精與未受精、死活）4第四頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五先用堿性溶液與土壤樣品充分混合以分離蛔蟲(chóng)卵與土壤顆粒，再加入比重較大的液體使得比重較輕的蛔蟲(chóng)卵漂浮在溶液表面，收集后鏡檢計(jì)數(shù)。5第五頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五1、分別從土表及5厘米深處采取土樣，因?yàn)橄x(chóng)卵存活時(shí)間與土層深度有關(guān)；2、在用人糞施肥的農(nóng)場(chǎng)和菜地可分別在隴上和犁溝中取土樣，同時(shí)還應(yīng)取20厘米深處的土樣，以確定蟲(chóng)卵附著在根塊植物上的可能；3、為了測(cè)定不同局部氣候條件下蟲(chóng)卵存活率，要從有日光照射和蔭蔽區(qū)采取土樣；4、廁所、庭院、廚房取表層土；5、每份土樣約50~100g。6第六頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五1、土樣處理：剔除菜葉、樹(shù)皮等大雜物，壓碎土樣中的大顆粒；然后用孔徑3mm的銅篩和孔徑為2mm的銅篩過(guò)篩，收集過(guò)篩后的土樣。2、分離：取50ml大離心管，放入過(guò)篩后的土樣10g，加5%氫氧化鈉溶液至40或45ml刻度線。用橡皮塞緊塞管口，在振蕩器上振蕩15分鐘，可反復(fù)3～4次，待充分混合后，以2000rpm,離心4min。3、漂?。簵壢ド喜康臍溲趸c，加入飽和硝酸鈉溶液充分?jǐn)嚢杌靹颍?000rpm離心4min，再加飽和硝酸鈉溶液滿至管口，覆上18mm×18mm蓋玻片。4、計(jì)數(shù)：靜置15min后，將蓋玻片迅速翻轉(zhuǎn)取下，置于載玻片上鏡檢，同時(shí)再覆上第二張蓋玻片，如此反復(fù)，共計(jì)數(shù)3～4張蓋玻片。7第七頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五8第八頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五1、漂浮液的比重：漂浮液的比重是影響蛔蟲(chóng)卵檢出率的重要因素，用比重大的溶液作為漂浮液效果較為理想，與飽和硫酸鋅、硫酸鎂、氯化鈉等鹽溶液相比，飽和硝酸鈉的比重最高，用作漂浮液蛔蟲(chóng)卵的檢出率最高。2、土壤性質(zhì)：土壤性質(zhì)決定了蟲(chóng)卵與土壤顆粒粘合的程度，蛔蟲(chóng)卵檢出率沙土最高，壤土次之，粘土最低。3、離心的時(shí)間與次數(shù)：延長(zhǎng)離心時(shí)間、提高離心速度或增加離心次數(shù)均可以提高蛔蟲(chóng)卵與土壤顆粒的分離效果進(jìn)而提高檢出率。9第九頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五受精蛔蟲(chóng)卵呈短橢圓形或圓形，卵殼厚，雙線層，外包一層乳頭狀突起的蛋白膜，呈棕黃色。未受精蛔蟲(chóng)卵與受精卵相比顯得狹長(zhǎng)，多為長(zhǎng)橢圓形，卵內(nèi)充滿大小不等油滴狀卵黃顆粒。10第十頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五1.含一個(gè)卵細(xì)胞活受精蛔蟲(chóng)卵，外包有乳頭狀突起的蛋白膜。2.脫蛋白膜活受精蛔蟲(chóng)卵11第十一頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五3.含2個(gè)卵細(xì)胞活受精蛔蟲(chóng)卵4.含4個(gè)卵細(xì)胞活受精蛔蟲(chóng)卵12第十二頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五5.含8個(gè)卵細(xì)胞活受精蛔蟲(chóng)卵6.含16個(gè)卵細(xì)胞活受精蛔蟲(chóng)卵13第十三頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五7.桑椹期脫蛋白膜活受精蛔蟲(chóng)卵8.含幼蟲(chóng)的活受精蛔蟲(chóng)卵14第十四頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五9.未受精蛔蟲(chóng)卵外包鋸齒狀突起的蛋白膜10.脫蛋白膜的未受精蛔蟲(chóng)卵15第十五頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五活的受精蛔蟲(chóng)卵：內(nèi)含一個(gè)球形的卵細(xì)胞，卵殼兩端和卵細(xì)胞之間，有半月形的空隙，卵內(nèi)的卵黃顆粒清晰而致密；若卵內(nèi)含幼蟲(chóng)，蟲(chóng)體的前后部沒(méi)有顆粒，中部顆粒清晰而有金屬光澤，有立體感，鏡檢時(shí)，注視或輕壓，可見(jiàn)有輕微蠕動(dòng)，強(qiáng)壓后，有時(shí)可擠出幼蟲(chóng)。死受精蛔蟲(chóng)卵(變性卵)：卵細(xì)胞移向一端，或向不定部位呈球狀收縮，致使卵殼兩端呈現(xiàn)有大小不等的半月形空隙；卵內(nèi)脂肪變性，形成空泡；卵細(xì)胞顆粒減少或消失；細(xì)胞質(zhì)渾濁，呈黑色或棕黑色；卵殼的一側(cè)或兩側(cè)向內(nèi)凹陷或破裂；只有蛋白質(zhì)殼，而缺內(nèi)容物。若卵內(nèi)含幼蟲(chóng)，蟲(chóng)體內(nèi)幾乎充滿顆粒，且模糊不清，無(wú)金屬光澤，缺乏立體感，久久不見(jiàn)蠕動(dòng)，稍稍加熱或輕壓，不會(huì)蠕動(dòng)；強(qiáng)壓時(shí)，雖能擠出幼蟲(chóng)，但也不改變其原來(lái)的卷曲狀態(tài)。16第十六頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五11.外包蛋白膜的死受精蛔蟲(chóng)卵，卵細(xì)胞移向一端12.脫蛋白膜的死受精蛔蟲(chóng)卵，卵細(xì)胞移向一端17第十七頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五13.桑椹期脫蛋白膜死蛔蟲(chóng)卵14.死受精蛔蟲(chóng)卵，在卵細(xì)胞上部可見(jiàn)透明細(xì)胞質(zhì)18第十八頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五15.外包蛋白膜死受精蛔蟲(chóng)卵，卵內(nèi)脂肪變性，細(xì)胞質(zhì)形成空泡。16.脫蛋白膜死受精蛔蟲(chóng)卵，在卵細(xì)胞上部形成空泡。19第十九頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五17.卵細(xì)胞皺縮死受精蛔蟲(chóng)卵18.空泡化死受精蛔蟲(chóng)卵20第二十頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五19.卵細(xì)胞崩解的死受精蛔蟲(chóng)卵20.卵細(xì)胞崩解的死受精蛔蟲(chóng)卵21第二十一頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五21.卵細(xì)胞不規(guī)則裂開(kāi)的死受精蛔蟲(chóng)卵22.卵胚變形的死受精蛔蟲(chóng)卵22第二十二頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五23.內(nèi)含物變形死受精蛔蟲(chóng)卵24.卵殼內(nèi)幼蟲(chóng)變形的死受精蛔蟲(chóng)卵23第二十三頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五正常發(fā)育過(guò)程中蛔蟲(chóng)卵-活受精蛔蟲(chóng)1.單細(xì)胞期活受精蛔蟲(chóng)卵2.二細(xì)胞期活受精蛔蟲(chóng)卵3.四細(xì)胞期活受精蛔蟲(chóng)卵4.多細(xì)胞期活受精蛔蟲(chóng)卵5.桑椹期卵（卵胚一端透明有光澤）6.蝌蚪期卵（卵胚的一部分凹陷）7.仔蟲(chóng)期卵（可見(jiàn)幼蟲(chóng)呈8字狀運(yùn)動(dòng)）8.不均等發(fā)育，卵內(nèi)一部分發(fā)育為仔蟲(chóng)期，一部分為蝌蚪期24第二十四頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五死受精蛔蟲(chóng)卵1.卵細(xì)胞顆?；?.卵細(xì)胞萎縮3.卵細(xì)胞空泡化4.卵細(xì)胞質(zhì)的周邊部透明化25第二十五頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五1、在直徑10～12cm的玻璃平皿底部平鋪一層厚約0.5cm的脫脂棉；2、在脫脂棉上鋪一張直徑與平皿等大的普通濾紙；3、在濾紙上，再放一張直徑2cm的小濾紙，將蟲(chóng)卵滴在小濾紙片上；4、加入2%福爾馬林液，以濕透濾紙和脫脂棉；5、放入在28～30℃溫箱中培養(yǎng)1個(gè)月觀察蟲(chóng)卵死活。6、培養(yǎng)一個(gè)月后自皿中取出小濾紙片，將蟲(chóng)卵置于載玻片上，滴加50％甘油溶液，使其透明后，根據(jù)形態(tài)，鑒定卵的死活。凡含有幼蟲(chóng)的，都認(rèn)為是活卵，其他階段的或單細(xì)胞的，都判為是死卵。26第二十六頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五美藍(lán)、伊紅、硼砂染色法原理美藍(lán)、伊紅、硼砂染液（簡(jiǎn)稱M.E.B）溶于水呈堿性?；钕x(chóng)卵可以還原堿性染料，降低著色力，不易被染色。死蟲(chóng)卵不能還原堿性染料，容易著色?；紫x(chóng)卵外層蛋白膜容易被著色，染色前需脫去蛋白膜。配制將0.2g美藍(lán)加入100ml蒸餾水中煮沸10分鐘，加入硼砂0.5g，再煮沸10分鐘，冷卻后加入伊紅0.1g，待完全溶解后過(guò)濾備用，pH值為10～11，在室溫中可放置1.5年。27第二十七頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五步驟1、脫蛋白膜將收集的蛔蟲(chóng)卵加入30%次氯酸鈉，作用數(shù)分鐘，并經(jīng)常振蕩，再用蒸餾水洗2次，即可脫掉蛋白膜。28第二十八頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五2、染色鏡檢

吸取蟲(chóng)卵沉淀物一滴置于載玻片上，加M.E.B染色液一滴，上覆蓋玻片，靜置3～5分鐘后鏡檢。或者，吸取蟲(chóng)卵沉淀物1滴放入小試管內(nèi)，加入染色液染30分鐘，再用蒸餾水洗2