第六章金黃色葡萄球菌的檢驗

第六章金黃色葡萄球菌的檢驗第一頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一雪印牛奶中毒事件人民日報（記者于青管克江）報導(dǎo)6月底以來，日本關(guān)西等地區(qū)發(fā)生特大食品中毒事件，截至6月30日晚間，因喝下有問題的雪印牌低脂肪牛奶而產(chǎn)生上吐下瀉、腹痛等不適癥狀的患者人數(shù)為4891人，到7月1日中午，中毒人數(shù)已經(jīng)超過5000人！且受害范圍也由原來的5個行政區(qū)域擴(kuò)大至8個。這是戰(zhàn)后日本發(fā)生的規(guī)模最大的一起食品中毒事件。7月2日，大阪府公共衛(wèi)生研究所證實，從患者飲用剩余的雪印牛奶中檢查出了金黃色葡萄球菌，這種葡萄球菌導(dǎo)致A型腸毒素滋生，該毒素可造成飲用者腹瀉、嘔吐及全身不適。牛奶被污染原因何在？第二頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一一、金黃色葡萄球菌的生物學(xué)特性

1、形態(tài)與染色：(staphylococcusaureus)

金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，不運動典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8

mm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。

革蘭氏染色陽性

附：金黃色葡萄球菌的顯微照片金黃色葡萄球菌的染色照片金黃色葡萄球菌的掃描電鏡照片金黃色葡萄球菌的透射電鏡照片第三頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一

金黃色葡萄球菌的顯微照片

典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8

mm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。

第四頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一

金黃色葡萄球菌革蘭氏染色顯微照片

金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜革蘭氏染色陽性

第五頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一金黃色葡萄球菌的掃描電鏡照片StaphylococcusaureusEnhancedsemw:7.9micron

第六頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一金黃色葡萄球菌的透射電鏡照片Temx12000digitizedStaphylococcusaureus

第七頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一2、培養(yǎng)特性：

金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，加少量葡萄糖或血液生長更旺盛。需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37℃，最適生長pH7.4

金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在7.5～15%NaCl肉湯中生長。

第八頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一3、生化特性：

可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽性，VP反應(yīng)弱陽性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強的抵抗力，對磺胺類藥物敏感性低，但對青霉素、紅霉素等高度敏感。第九頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一金黃色葡萄球菌的致病性

金黃色葡萄球菌的致病力強弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；b.殺白細(xì)胞素：可破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；c.血漿凝固酶：當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細(xì)胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關(guān)；d.脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌；e.腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素，分為A、B、C、D、E及F六種血清型。

第十頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一

*金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生問題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個細(xì)菌性食物中毒的33%，加拿大則更多，占45%，我國每年發(fā)生的此類中毒事件也非常多。腸毒素形成條件：

√存放溫度，在37℃內(nèi)，溫度越高，產(chǎn)毒時間越短；

√存放地點，通風(fēng)不良氧分壓低易形成腸毒素；

√食物種類，含蛋白質(zhì)豐富，水分多，同時含一定量淀粉的食物，腸毒素易生成。第十一頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一

＊＊＊當(dāng)金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品，如牛奶和乳制品、肉、蛋等，在溫度條件適宜時，經(jīng)過8～10小時即可產(chǎn)生相當(dāng)數(shù)量的腸毒素，腸毒素可耐受100℃煮沸30分鐘而不被破壞。人攝食該菌污染的食物2～3h后可引起中毒癥狀，它引起的食物中毒癥狀是嘔吐和腹瀉。

第十二頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一金黃色葡萄球菌的流行病學(xué)特點

季節(jié)分布，多見于春夏季；中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報道。

第十三頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一GB4789.10-2010√第一法：金黃色葡萄球菌的定性檢測√第二法：金黃色葡萄球菌Baird-Parker平板計數(shù)√第三法：金黃色葡萄球菌MPN計數(shù)金黃色葡萄球菌的檢驗第十四頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一金黃色葡萄球菌的定性檢驗檢樣增菌（7.5％氯化鈉肉湯或10％氯化鈉胰酪胨大豆肉湯）BP平板，血平板涂片染色觀察溶血BHI肉湯和營養(yǎng)瓊脂血漿凝固酶實驗報告第十五頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一金黃色葡萄球菌的檢驗1、樣品制備按無菌操作取檢樣25g（mL），加入225mL滅菌生理鹽水，固體樣品研磨或置均質(zhì)器中制成1:10樣品混懸液。

供計數(shù)檢驗時，可按十進(jìn)位遞增稀釋法將樣品勻液再進(jìn)行適當(dāng)稀釋。第十六頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一金黃色葡萄球菌的檢驗2、增菌及分離培養(yǎng)

吸取5mL混懸液，接種于7.5%氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯50mL培養(yǎng)基內(nèi)，36℃±1℃培養(yǎng)24h，轉(zhuǎn)種血平板和Baird-Parker平板，36℃±1℃培養(yǎng)24h，挑取血平板上金黃色（有時為白色）菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗。第十七頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一血平板上金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)

金黃色葡萄球球菌的單個菌落在血平板上呈金黃色，有時也為白色，大而突出、圓形、不透明、表面光滑，周圍有溶血圈。

第十八頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一溶血圈第十九頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一金黃色葡萄球菌在BP平板上的菌落形態(tài)

在Baird-Parker瓊脂平板上菌落呈圓形，表面光滑、凸起、濕潤，直徑2～3mm?；液谏梁谏?，有光澤，常有淺色（非白色）的邊緣，周圍繞以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰帶。當(dāng)用接種針觸及菌落時具有黃油樣粘稠感。有時可見到不分解脂肪的菌株，除沒有不透明圈和清晰帶外，其他外觀基本相同。從長期貯存的冷凍或脫水食品中分離的菌落，其黑色常較典型菌落淺些，且外觀可能較粗糙，質(zhì)地較干燥。第二十頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一亞碲酸鉀卵磷脂環(huán)甘氨酸、氯化鋰成分：胰蛋白胨牛肉膏酵母膏丙酮酸鈉甘氨酸氯化鋰卵黃亞碲酸鉀瓊脂第二十一頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一BP平板主要成分及作用氯化鋰、甘氨酸抑制非致病性葡萄球菌的生長丙酮酸鈉促進(jìn)葡萄球菌生長亞碲酸鉀抑制G-桿菌生長，可被金黃色葡萄球菌還原為碲鹽呈黑色卵黃含蛋白質(zhì)、卵磷脂、脂肪，提供營養(yǎng)和有利于觀察卵磷脂環(huán)第二十二頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一金黃色葡萄球菌在甘露醇鹽平板上的菌落

Staphylococcusaureusonmannitolsaltsagar

第二十三頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一3、血漿凝固酶試驗：

吸取1:4新鮮兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入培養(yǎng)24h的金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL，振蕩搖勻，置36±1℃溫箱或水浴內(nèi)，每半小時觀察一次，觀察6h，如呈現(xiàn)凝固,即將試管倒置或傾斜時，呈現(xiàn)凝塊者，被認(rèn)為陽性結(jié)果。同時以已知陽性和陰性葡萄球菌株及肉湯作為對照。第二十四頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一第二十五頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測

一、動物學(xué)試驗主要用幼貓和猴。二、血清學(xué)試驗?zāi)c毒素作為抗原，可以和特異性抗體發(fā)生結(jié)合性反應(yīng)，產(chǎn)生可見沉淀。用血清學(xué)反應(yīng)檢驗金黃色葡萄球菌腸毒素，方法主要有：免疫瓊脂擴(kuò)散法反向間接血凝試驗免疫熒光法酶聯(lián)免疫吸附法

第二十六頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期一金黃色葡萄球菌快速檢測方法

目前，隨著研究的深入，一些快速和采用現(xiàn)代技術(shù)的檢測方法不斷出現(xiàn)，這些新的快速方法，一般都縮短了傳統(tǒng)檢測方法的時間，能夠較快地得到檢測結(jié)果，并且操作相對簡單。