液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用課件

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用2023/6/6液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用生物樣品中藥物及代謝物濃度測定臨床前吸收試驗(yàn)組織分布試驗(yàn)代謝排泄毒代臨床

臨床藥動學(xué)制劑生物利用度及生物等效性

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用生物樣品中代謝物濃度測定代謝物,影響藥物的安全性和有效性藥動學(xué)研究測定母體藥物和代謝物濃度制劑生物等效性評價測定母體藥物和代謝物的濃度,等效性評價時以母體藥物濃度作為主要判斷指標(biāo)主要代謝物，活性不清楚藥動學(xué)研究測定母體藥物和代謝物濃度制劑生物等效性評價測定母體藥物濃度

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用生物樣品中代謝物濃度測定母體藥物體液濃度很低,代謝物為體內(nèi)的主要存在形式藥動學(xué)研究測定母體藥物和代謝物濃度制劑生物等效性評價測定代謝物的濃度前體藥物藥動學(xué)研究測定母體藥物(如果能測到)和代謝物濃度制劑生物等效性評價測定代謝物的濃度

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用生物樣品中藥物濃度測定方法的建立和確證基本概念生物樣品分析方法的建立生物樣品分析方法的確證生物樣品分析方法的應(yīng)用分析數(shù)據(jù)的記錄與報告提交液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用基本概念生物樣品分析方法的重要性

臨床藥理學(xué)研究、藥代動力學(xué)試驗(yàn)、生物等效性試驗(yàn)、藥物組織分布試驗(yàn)、排泄試驗(yàn)：數(shù)量和質(zhì)量血漿藥物濃度

藥物在體內(nèi)達(dá)到平衡狀態(tài)時，血漿中藥物濃度一般與藥物在作用部位的濃度密切相關(guān)：藥效和毒性分析方法

色譜學(xué)方法、免疫學(xué)方法、微生物學(xué)方法液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用基本概念生物介質(zhì)生物來源物質(zhì)能夠以可重復(fù)方式采集和處理包括全血、血漿、血清、尿、糞、各種組織液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用基本概念分析批包括待測樣品、適當(dāng)數(shù)目的標(biāo)準(zhǔn)樣品和質(zhì)控樣品的完整系列：相同實(shí)驗(yàn)條件和時間區(qū)段一天內(nèi)可以完成幾個分析批一個分析批也可以持續(xù)幾天完成通常一天完成一個分析批液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用基本概念準(zhǔn)確度在確定的分析條件下，測得值與真實(shí)值的接近程度精密度在確定的分析條件下，相同介質(zhì)中相同濃度樣品的一系列測量值的分散程度液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用基本概念選擇性分析方法測量和區(qū)分共存組分中分析物的能力這些共存組分包括代謝物、雜質(zhì)、分解產(chǎn)物、介質(zhì)組分等基質(zhì)效應(yīng)由樣品中存在的干擾物質(zhì)，對響應(yīng)造成的直接或間接的影響液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用基本概念重現(xiàn)性分析方法在相同條件下，間隔一段短時間后測定結(jié)果的分散程度不同實(shí)驗(yàn)室間采用同一分析方法，測定結(jié)果的分散程度液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用基本概念標(biāo)準(zhǔn)樣品在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的樣品用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線、計算質(zhì)控樣品和未知樣品中分析物濃度質(zhì)控樣品（QC樣品）在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的樣品用于監(jiān)測分析方法的重現(xiàn)性、評價每一分析批中未知樣品分析結(jié)果的完整性和正確性液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用基本概念標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)響應(yīng)值與分析物濃度間的關(guān)系應(yīng)采用適當(dāng)?shù)募訖?quán)和統(tǒng)計檢驗(yàn)，用簡單的數(shù)學(xué)模型來最適當(dāng)?shù)孛枋鰬?yīng)以各濃度點(diǎn)回歸計算結(jié)果的百分偏差最小為基礎(chǔ)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用基本概念定量范圍包括定量上限（ULOQ）和定量下限（LLOQ）的連續(xù)的濃度范圍采用濃度-響應(yīng)關(guān)系能進(jìn)行可靠的、可重現(xiàn)的定量其準(zhǔn)確度和精密度可以接受液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用OptimizationValidationImplementationDevelopmentRevalidationPre-Validation生物樣品分析方法的建立液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用生物樣品分析方法的建立生物樣品分析常用方法色譜法

HPLC,GC,LC/MS,LC/MS/MS,GC/MS微生物法免疫分析法選擇依據(jù)

藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、待測物濃度范圍、實(shí)驗(yàn)室條件液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用生物樣品分析方法的建立（1）查閱相關(guān)文獻(xiàn)是否有分析方法可供借鑒盡可能獲知分析物待測濃度范圍JournalofChromatographyBRapidCommunicationsinMassSpectrometryJournalofPharmaceuticalandBiomedicalAnalysisBiomedicalChromatography 藥學(xué)學(xué)報，藥物分析雜志，中國臨床藥理學(xué)雜志液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用生物樣品分析方法的建立（2）根據(jù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)分子的極性、酸堿性、穩(wěn)定性建立色譜分析方法的可能性使用哪種檢測器質(zhì)譜、紫外、熒光、電化學(xué)…液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用生物樣品分析方法的建立（3）樣品的穩(wěn)定性采集哪種生物樣品：血漿、血清、全血、尿、組織…儲存條件

–20C：大部分藥物

–80C：阿莫西林等 加穩(wěn)定劑：卡托普利等立即測試：維生素C等液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用生物樣品分析方法的建立（4）生物樣品預(yù)處理液-液提取液-固提取沉淀蛋白在線提取液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用生物樣品分析方法的建立（5）色譜條件選擇色譜柱流動相組成pH值和緩沖鹽流速液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用生物樣品分析方法的建立（6）內(nèi)標(biāo)選擇與待測藥物色譜行為相近與待測藥物檢測器響應(yīng)相近與待測藥物提取回收率相近液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用生物樣品分析方法的建立（7）質(zhì)譜條件選擇準(zhǔn)分子離子和碎片離子碰撞誘導(dǎo)解離條件考察生物樣品的基質(zhì)效應(yīng)與色譜條件的匹配液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用生物樣品分析方法的建立（8）各種條件和參數(shù)的進(jìn)一步優(yōu)化

考察選擇性

考察靈敏度 考察線性關(guān)系 考察重現(xiàn)性（9）實(shí)際樣品預(yù)實(shí)驗(yàn)

最終確定濃度測定范圍液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用生物樣品分析方法的建立（10）其他因素

血漿蛋白結(jié)合 生物樣品測試的安全防護(hù)

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用MethodValidationAccuracyPrecisionLimitofDetectionLimitof

QuantitationLinearityandRangeSpecificity/SelectivitySystemSuitabilityRuggedness/Robustness生物樣品分析方法的確證液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用分析方法的確證全面確證首次建立的生物樣品分析方法增加新的定量組份(如代謝物)對以前的方法進(jìn)行較大的改進(jìn)如：改變儀器、檢測器等液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用分析方法的確證部分確證生物分析方法在實(shí)驗(yàn)室間的轉(zhuǎn)移定量濃度范圍改變生物介質(zhì)改變

相同生物基質(zhì)內(nèi)種屬的改變（例如大鼠血漿和小鼠血漿）同種內(nèi)生物樣品的改變（例如人血漿和人尿）稀少生物介質(zhì)證實(shí)復(fù)方給藥后分析方法的選擇性小幅改變流動相比例和柱溫液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用分析方法的確證選擇性證明所測定的物質(zhì)是預(yù)期的分析物內(nèi)源性物質(zhì)和其他代謝物不得干擾樣品的測定多組分定量分析時應(yīng)對每一待測物進(jìn)行考察，以保證它們互相之間不產(chǎn)生干擾色譜法：考察不同來源（n6）空白生物樣品色譜圖，標(biāo)準(zhǔn)生物樣品色譜圖（注明濃度），實(shí)際生物樣品色譜圖空白生物樣品中干擾物質(zhì)的響應(yīng)不超過待測物定量下限時響應(yīng)的20%液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用分析方法的確證標(biāo)準(zhǔn)曲線與定量范圍配制標(biāo)準(zhǔn)曲線時所用生物基質(zhì)必須與實(shí)際研究樣品生物基質(zhì)相同

必須用至少6個非零濃度樣品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線根據(jù)待測物濃度與響應(yīng)的相關(guān)性，用回歸分析法獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線計算標(biāo)準(zhǔn)曲線時不包括空白點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)曲線高、低濃度范圍為定量范圍定量范圍要能覆蓋全部待測濃度，不允許外推液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)曲線與定量范圍

在定量范圍內(nèi)濃度測定結(jié)果應(yīng)達(dá)到試驗(yàn)要求的精密度和準(zhǔn)確度

標(biāo)準(zhǔn)曲線上75%的濃度點(diǎn)測定值不能超出真實(shí)值的15%（LLOQ濃度點(diǎn)不超出真實(shí)值的20%）相關(guān)系數(shù)r>0.99分析方法的確證液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用分析方法的確證定量下限定量下限是標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點(diǎn)至少應(yīng)滿足測定3～5個半衰期的藥物濃度，或Cmax的1/10～1/20時的藥物濃度其準(zhǔn)確度應(yīng)在真實(shí)濃度的80～120%范圍內(nèi)，RSD應(yīng)小于20%其響應(yīng)應(yīng)為空白生物基質(zhì)干擾物響應(yīng)的5倍至少應(yīng)由5個標(biāo)準(zhǔn)樣品測試結(jié)果證明液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用分析方法的確證精密度與準(zhǔn)確度選擇3個濃度的質(zhì)控樣品考察方法的精密度和準(zhǔn)確度低濃度選擇在定量下限附近，<3LLOQ高濃度接近于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限濃度，75～90%測定3個分析批，每批每一濃度至少5個樣品精密度：質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間標(biāo)準(zhǔn)差

RSD15%，低濃度RSD20%準(zhǔn)確度：質(zhì)控樣品的相對偏差

允許范圍85～115%，低濃度80～120%液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用分析方法的確證樣品穩(wěn)定性文獻(xiàn)中關(guān)于分析物穩(wěn)定性的報道含藥生物樣品冷凍儲存條件下的穩(wěn)定性含藥生物樣品在室溫、凍融條件下的穩(wěn)定性樣品處理過程中的穩(wěn)定性樣品處理后在溶液中的穩(wěn)定性儲備液的穩(wěn)定性液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用分析方法的確證提取回收率樣品提取過程前、后，分析物含量百分比注意扣除基質(zhì)效應(yīng)和體積改變應(yīng)考察低、中、高3個濃度的提取回收率其結(jié)果應(yīng)當(dāng)基本一致、精密和可重現(xiàn)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用分析方法的確證基質(zhì)效應(yīng)液相色譜-質(zhì)譜分析時，內(nèi)源性物質(zhì)使待測物的離子化效率降低或增強(qiáng)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用分析方法的確證微生物學(xué)和免疫學(xué)分析標(biāo)準(zhǔn)曲線是非線性的采用更多的濃度點(diǎn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果的準(zhǔn)確度是關(guān)鍵因素如果重復(fù)測定能改善準(zhǔn)確度，則應(yīng)在方法確證和未知樣品測定中采用同樣的步驟液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用分析方法的確證分析質(zhì)量保證標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品和QC樣品分別配制獨(dú)立的質(zhì)量保證人員未知濃度樣品考核質(zhì)量檢查報告液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用生物樣品分析方法的應(yīng)用未知濃度樣品的測試應(yīng)在生物樣品分析方法確證完成之后，開始測試未知濃度的樣品由獨(dú)立的人員配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，對分析方法進(jìn)行考核每個未知樣品一般測定一次，必要時進(jìn)行復(fù)測生物等效性試驗(yàn)中，來自同一個體的生物樣品最好在同一批中測定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用生物樣品分析方法的應(yīng)用未知濃度樣品的測試每個分析批應(yīng)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，組織分布試驗(yàn)時，可視具體情況而定隨行測定低、中、高3個濃度的QC樣品，每個濃度至少雙樣本，并應(yīng)均勻分布在未知樣品測試順序中當(dāng)一個分析批中未知樣品數(shù)目較多時，應(yīng)增加各濃度QC樣品數(shù)，使QC樣品數(shù)大于未知樣品總數(shù)的5%液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用生物樣品分析方法的應(yīng)用未知濃度樣品的測試質(zhì)控樣品測定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于15%，低濃度點(diǎn)偏差一般應(yīng)小于20%最多允許1/3不在同一濃度的質(zhì)控樣品測定結(jié)果超限如果QC樣品測定結(jié)果不符合上述要求，則該分析批樣品測試結(jié)果作廢濃度高于定量上限的樣品，應(yīng)采用相應(yīng)的空白介質(zhì)稀釋后重新測定；對于濃度低于定量下限的樣品，應(yīng)以零值計算液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用分析數(shù)據(jù)的記錄與報告提交基本要素建立一般性和特殊性的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程保存完整的實(shí)驗(yàn)記錄：分析方法建立、確證和未知樣品測試過程中產(chǎn)生的測試原始圖譜和數(shù)據(jù)，包括QC樣品測試提交完成試驗(yàn)工作的相關(guān)資料：綜合信息、方法建立過程、日常樣品分析中的基本資料、其他相關(guān)信息液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用分析數(shù)據(jù)的記錄與報告提交綜合信息項(xiàng)目編號分析方法編號、分析方法類型、分析方法確證簡化的理由相應(yīng)的項(xiàng)目計劃編號項(xiàng)目標(biāo)題液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用分析數(shù)據(jù)的記錄與報告提交方法建立過程分析方法的詳細(xì)描述：該方法所用對照品（被測藥物、代謝物、內(nèi)標(biāo)物）的純度和來源穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)描述和相關(guān)數(shù)據(jù)描述考察選擇性、準(zhǔn)確度、精密度、回收率、定量限、標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)驗(yàn)，并給出獲得的主要數(shù)據(jù)列出批內(nèi)、批間精密度和準(zhǔn)確度的詳細(xì)結(jié)果根據(jù)具體情況，提供代表性的色譜圖、質(zhì)譜圖，并加以說明液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用分析數(shù)據(jù)的記錄與報告提交在日常樣品分析中的基本資料（一）所用對照品（被測藥物、代謝物、內(nèi)標(biāo)物）的純度和來源樣品處理和保存的情況：樣品編號、采集日期、運(yùn)輸前的保存、運(yùn)輸情況、分析前的保存信息應(yīng)包括日期、時間、樣品所處條件，以及任何偏離試驗(yàn)計劃的情況液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用分析數(shù)據(jù)的記錄與報告提交在日常樣品分析中的基本資料（二）樣品分析批的綜合信息：分析批編號、分析日期、分析方法、分析人員、開始和結(jié)束時間、主要設(shè)備和材料的變化，以及任何可能偏離分析方法建立時的情況用于計算結(jié)果的回歸方程，分析樣品時標(biāo)準(zhǔn)曲線列表各分析批QC樣品測定結(jié)果綜合列表計算批內(nèi)和批間精密度、準(zhǔn)確度各分析批包括的未知樣品濃度計算結(jié)果液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用分析數(shù)據(jù)的記錄與報告提交在日常樣品分析中的基本資料（三）提交20%受試樣品測試的色譜圖復(fù)印件，包括相應(yīng)分析批的標(biāo)準(zhǔn)曲線和QC樣品的色譜圖復(fù)印件注明缺失樣品的原因、重復(fù)測試的結(jié)果對舍棄任何分析數(shù)據(jù)和選擇所報告的數(shù)據(jù)說明理由液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究中的應(yīng)用分析數(shù)據(jù)的記錄與報告提交其他相關(guān)信息縮略語列表參考文獻(xiàn)列表標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程列表液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物動力學(xué)和代謝研究