肺炎鏈球菌的分離和鑒定演示文稿

肺炎鏈球菌的分離和鑒定演示文稿當(dāng)前第1頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)優(yōu)選肺炎鏈球菌的分離和鑒定當(dāng)前第2頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)

肺炎鏈球菌不產(chǎn)生外毒素，主要靠莢膜侵襲力致病。肺炎鏈球菌主要引起人類大葉性肺炎，肺炎后可繼發(fā)胸膜炎、膿胸，也可引起中耳炎、乳突炎、副鼻竇炎、支氣管炎、心內(nèi)膜炎、腹膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎和敗血癥等。

當(dāng)前第3頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)

細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)不僅對(duì)疾病的病原學(xué)診斷有重要價(jià)值，同時(shí)對(duì)臨床治療的藥物選擇也具有十分重要意義。當(dāng)前第4頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)

一、生物學(xué)性狀當(dāng)前第5頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)1.形態(tài)與染色肺炎鏈球菌革蘭染色呈陽性。球形或矛頭狀，成雙排列，少呈鏈狀。在組織中可形成莢膜（人工培養(yǎng)莢膜逐漸消失），無鞭毛及芽孢。當(dāng)前第6頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)當(dāng)前第7頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)當(dāng)前第8頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)當(dāng)前第9頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)2.培養(yǎng)特點(diǎn)（1）培養(yǎng)基肺炎鏈球菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求較高，需采用質(zhì)量好的哥倫比亞血液平板（5％馬血或羊血）。當(dāng)前第10頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)（2）分離培養(yǎng)1）標(biāo)本處理

及時(shí)將采集標(biāo)本接種到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上是提高分離率的前提。因?yàn)?，肺炎鏈球菌?duì)干燥、對(duì)寒冷的抵抗力均較弱，在標(biāo)本離開機(jī)體暴露于外界復(fù)雜的環(huán)境中，其存活率十分低，不及時(shí)接種適當(dāng)培養(yǎng)基是導(dǎo)致分離率低的主要原因。當(dāng)前第11頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)2）選擇性分離培養(yǎng)基培養(yǎng)基中添加5μg/ml慶大霉素有利于肺炎鏈球菌的分離。當(dāng)前第12頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)3）培養(yǎng)環(huán)境

5～10％CO2、35℃培養(yǎng)24～48h。當(dāng)前第13頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)（3）肺炎鏈球菌的菌落形態(tài)在營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基上，肺炎鏈球菌形成扁平、中間有凹陷的典型菌落，少數(shù)菌可呈粘液型菌落。當(dāng)前第14頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)當(dāng)前第15頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)當(dāng)前第16頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)當(dāng)前第17頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)肺炎鏈球菌當(dāng)前第18頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)肺炎鏈球菌當(dāng)前第19頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)當(dāng)前第20頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)肺炎鏈球菌當(dāng)前第21頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)3.抗原結(jié)構(gòu)（1）種屬特異性抗原：為菌體多糖抗原，存在于肺炎鏈球菌的細(xì)胞壁。（2）型特異性抗原：是存在于肺炎鏈球菌莢膜中的一種多糖多聚體，可溶于水，據(jù)此抗原可將肺炎鏈球菌分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ……等個(gè)型，其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型致病性最強(qiáng)。（3）菌體核蛋白抗原：存在于菌體深部，為蛋白質(zhì)，無特異性。當(dāng)前第22頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)二、肺炎鏈球菌鑒定肺炎鏈球菌的鑒定，主要應(yīng)與甲型溶血性鏈球菌鑒別。其中以膽汁溶菌試驗(yàn)、菊糖發(fā)酵和optochin試驗(yàn)最為常用。必要時(shí)可作莢膜腫脹試驗(yàn)或小鼠毒力試驗(yàn)加以鑒別。在上述試驗(yàn)中，肺炎鏈球菌均應(yīng)陽性，而甲型溶血性鏈球菌為陰性。也可用特異性單克隆乳膠或自動(dòng)化儀器等相應(yīng)鑒定卡作鑒定。當(dāng)前第23頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)肺炎鏈球菌鑒定要點(diǎn)

革蘭陽性雙球菌，矛頭狀，不呈鏈；血平皿菌落呈草綠溶血，濕潤(rùn)，菌落表面無小白點(diǎn)；培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)出現(xiàn)臍窩狀；膽汁溶解試驗(yàn)陽性；莢膜腫脹試驗(yàn)陽性；乳膠單克隆抗體凝集陽性。當(dāng)前第24頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)1.溶血性檢查肺炎鏈球菌在厭氧或二氧化碳環(huán)境中溶血能力大大加強(qiáng)，草綠色溶血環(huán)很大，可與其他草綠色鏈球菌相區(qū)別。當(dāng)前第25頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)2.Optochin(OP，奧普托欣)敏感試驗(yàn)該藥對(duì)肺炎鏈球菌的作用機(jī)制是干擾其葉酸的合成。optochin敏感試驗(yàn)方法是藥敏試驗(yàn)。挑取被檢菌，密涂于血平板上，貼上含5μg/片的optochin紙片，置5~10%CO2的大氣中（或燭缸），35℃孵育過夜。抑菌環(huán)直徑>=14mm為敏感，推斷為肺炎鏈球菌。抑菌環(huán)直徑<14mm時(shí)參照膽汁溶菌試驗(yàn)。肺炎鏈球菌的抑制圈直徑常在20mm以上，甲型溶血性鏈球菌（約98%）小于12mm。

當(dāng)前第26頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)

也有例外，我們?cè)趯?shí)際工作中檢出過耐optochin的肺炎鏈球菌，并發(fā)現(xiàn)大多數(shù)的緩癥鏈球菌和部分口腔鏈球菌對(duì)optochin的抑菌環(huán)直徑>=14mm。應(yīng)注意鑒別。但大多數(shù)肺炎鏈球菌對(duì)苯唑西林（Oxacillin,OX）是敏感的(除外PRP)，而緩癥鏈球菌和口腔鏈球菌對(duì)OX耐藥。這可作為輔助鑒別點(diǎn)。當(dāng)前第27頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)當(dāng)前第28頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)肺炎鏈球菌當(dāng)前第29頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)肺炎鏈球菌當(dāng)前第30頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)當(dāng)前第31頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)當(dāng)前第32頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)3.膽汁溶菌試驗(yàn)

自溶酶是一種L-丙氨酸--N-乙酰胞壁酰胺酶，能切斷肽聚糖上L-丙氨酸與N-乙酰胞壁酸間的連接鍵，從而破壞細(xì)胞壁，使菌溶解。自溶酶在菌生長(zhǎng)的穩(wěn)定期被激活，也可被膽汁或膽鹽等活性物質(zhì)激活，從而促進(jìn)培養(yǎng)物中的菌體溶解。肺炎鏈球菌膽汁溶菌試驗(yàn)為陽性，甲型溶血性鏈球菌的膽汁溶菌試驗(yàn)為陰性。當(dāng)前第33頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)

（1）試管法:

取新鮮培養(yǎng)物分裝于兩支試管內(nèi)（每支1ml），其中一支加入10%的去氧膽酸鈉溶液0.1ml或純牛膽汁0.2ml，另一支加入無菌鹽水兩滴（對(duì)照），15min后，陽性者細(xì)菌被溶解，試管內(nèi)液體呈透明狀，陰性者無變化。當(dāng)前第34頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)當(dāng)前第35頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)

（2）平皿法:

加一滴10%的去氧膽酸鈉溶液或純牛膽汁于被檢菌菌苔上，15min后，陽性者細(xì)菌菌苔被溶解，陰性者無變化。試驗(yàn)應(yīng)有已知肺炎鏈球菌作陽性對(duì)照。當(dāng)前第36頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)當(dāng)前第37頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)當(dāng)前第38頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)膽溶陰性當(dāng)前第39頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)4.乳膠凝集試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、快速、特異性高。當(dāng)前第40頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)當(dāng)前第41頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)當(dāng)前第42頁\共有44頁\編于星期六\10點(diǎn)5.莢膜腫脹試驗(yàn)

取一滴抗血清與一滴菌懸液混勻，加少量美藍(lán)液混合后加蓋片，室溫10~2