霍亂弧菌實驗室檢測課件

2023/6/7霍亂實驗室檢測

檢驗科2023/6/7霍亂病原菌發(fā)現(xiàn)1883年德國科學家Koch發(fā)現(xiàn)霍亂弧菌1905年埃及埃兒托檢疫站首次分離到ElTor弧菌，與霍亂弧菌甚為相似，但經(jīng)過多年的觀察并不致病或僅引起輕度腹瀉，直到1937-1958年發(fā)生4次爆發(fā)后才逐漸認識到ElTor弧菌致病性1992年10月印度馬德拉斯發(fā)現(xiàn)了新菌型O139霍亂弧菌2023/6/7一、霍亂概述霍亂是由01群和0139群霍亂弧菌（V．cholerae）引起的急性腸道傳染病，發(fā)病急、傳播速度快、波及范圍廣、危害嚴重的甲類傳染病。是國內(nèi)交通檢疫傳染病之一。也是當今三種國際檢疫傳染病中最嚴重的一種。2023/6/7二、霍亂病原學霍亂的病原學分類霍亂的病原學特征2023/6/7霍亂弧菌抗原結(jié)構(gòu)及分類抗原結(jié)構(gòu)霍亂弧菌有耐熱的菌體（O）抗原和不耐熱的鞭毛（H）抗原。H抗原為霍亂弧菌屬所共有；O抗原有群特異性和型特異性兩種抗原，是霍亂弧菌分群和分型的基礎(chǔ)。WHO腹瀉控制中心將霍亂弧菌分為三群。一、01群霍亂弧菌：包括古典生物型霍亂弧菌（vibriocholerde）和埃爾托生物型（vibriocholerdeEL-Torbiotype）。01群的特異抗原有A、B、C三種，其中A抗原為01群所共有，A抗原與其他B與C抗原結(jié)合則可分為三型，即：原型——AC（稻葉，Inaba）、異型——AB（小川，Ogawa）和中間型——ABC（彥島，Hikojima）。2023/6/7二、非01群霍亂弧菌：本群弧菌鞭毛抗原與01群相同，而菌體（0）抗原則不同，不被01群霍亂弧菌多價血清所凝集，依O抗原之異，本群可分為137個血清型。以往認為本群僅引起散發(fā)的胃腸炎性腹瀉，一般此類弧菌感染不作霍亂處理，但1992年在印度及孟加拉等地發(fā)生霍亂暴發(fā)流行，后證實流行菌不被01群和137個非01群霍亂弧菌診斷血清所凝集。乃定為0139霍亂弧菌，并認定為真正的霍亂弧菌。三、不典型01群霍亂弧菌：可被多價01群血清所凝集，但該群菌不產(chǎn)生腸毒素，因此無致病性2023/6/7霍亂病原學特點形態(tài)與染色弧狀或逗點狀革蘭染色陰性有一根單鞭毛，細菌運動非?；顫姡属~群穿梭樣或流星狀2023/6/7革蘭染色2023/6/7電鏡負染色—鞭毛2023/6/7霍亂弧菌動力視頻鏈接/v_show/id_XNTg3MTczNTY4.html2023/6/7三、霍亂弧菌常規(guī)檢驗樣本采集、送檢和保存標本的檢驗流程2023/6/7樣本采集、送檢和保存糞便：標本的采集以病人糞便為主，水樣便采取1～3mL，亦可用棉拭或采便管由肛門插入直腸內(nèi)3～5cm處采取。急性期病人取水樣便標本在增菌培養(yǎng)的同時可取其粘液絮片或用棉拭子直接接種于堿性瓊脂、TCBS瓊脂培養(yǎng)基。不能立即檢查的糞便標本，要放入堿性蛋白胨水中。2023/6/7檢驗流程接收到大便動力弧菌培養(yǎng)標本，請先建單。方法如下2023/6/71.左鍵單擊微生物檢驗，進入微生物檢驗窗口。2023/6/7

2.單擊標本號（左鍵、右鍵均可），會出現(xiàn)下拉框。單擊“其它”

2023/6/73.該標本會由lis自動生成編號，如1505970005。2023/6/7

4.編號由lis自動生成后，根據(jù)病人實際信息，先選擇“患者類別”，然后輸入患者編號（門診號或住院號），項目類別自動顯示為大便力霍亂弧培養(yǎng)。最后一步，點“建單”。2023/6/7建單完成后，如下圖2023/6/75.取糞便標本在高倍鏡暗視野下看動力，看完動力后，在“初步動力”欄錄入結(jié)果（陰性或陽性），并審核打印報告。同時糞便標本轉(zhuǎn)種到堿性胨水中并放入35℃孵箱中培養(yǎng),在化驗單上記錄轉(zhuǎn)種時間。2023/6/72023/6/76.增菌培養(yǎng)6-8小時后，需要取胨水生長物再次觀察動力，進行6-8小時動力報告。并轉(zhuǎn)種到慶大霉素平板并放入35℃孵箱中培養(yǎng)。在進行6-8小時動力報告時，需要先取消之前的審核，在原報告單上進行審核（1505970005）。2023/6/72023/6/7疑似菌落初步鑒定：7.慶大平板培養(yǎng)18-24h后挑取可疑菌落進行動力觀察，如動力陰性，可進行最終陰性報告，如下圖。2023/6/72023/6/7注意：1.動力試驗陰性，無需進行血清制動試驗。2.任何一次動力陽性，都需進行血清制動試驗并在LIS上記錄和審核試驗結(jié)果。3.當動力和血清制動試驗同為陽性時，為疑似霍亂弧菌感染，要立即通知開單科室和醫(yī)務(wù)處，對病人采取相應(yīng)的隔離治療等必要措施。2023/6/7血清制動試驗包括4瓶血清。第1瓶為O1群多價，第2、3瓶為小川、稻葉型單價。第4瓶為O139群抗血清。當觀察到動力陽性，首先進行O1群多價的制動試驗。如為陰性，接著做O139群的制動試驗。兩者均陰性，可初步排除霍亂弧菌病感染。如O1多價制動試驗陽性，則進一步進行第2、3瓶的制動試驗，即進行小川、稻葉型單價血清的制動試驗2023/6/7注意：門診在上午11：00之前收到的大便弧培標本，需要將轉(zhuǎn)種好的胨水和患者化驗單一起轉(zhuǎn)運至微生物室，后續(xù)步驟由微生物室來完成：門診在上午11：00以后收到的標本，需將轉(zhuǎn)種好的胨水和患者化驗單一起放置門診35°C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，門診拖班人員需跟當晚住