培養(yǎng)基適用性檢查驗證方案

培養(yǎng)基適用性驗證方案編 制：審 核：批 準(zhǔn)：驗證目的：本次驗證的目的是確認(rèn)無菌檢查、微生物限度檢查、控制菌檢查用培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基的適用性檢查，符合靈敏度要求。參照標(biāo)準(zhǔn)2010版中國藥典二部附錄： A無菌檢查法和 G微生物限度檢查法。驗證項目無菌檢查、微生物限度檢查、控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查。驗證小組人員及職責(zé)：小組人員職務(wù)職責(zé)王志鳳負(fù)責(zé)驗證方案的審批，確認(rèn)所有的驗證項目均已完成，并按方案執(zhí)行。李晨負(fù)責(zé)驗證日常管理工作，負(fù)責(zé)驗證方案的審核。郭月負(fù)責(zé)驗證方案及報告的起草，負(fù)責(zé)該方案的實施，對實施過程中資料和數(shù)據(jù)進(jìn)行匯總并完成報告。前提條件確認(rèn)5.1 所有本次驗證實施過程中用到的儀器都已經(jīng)過計量并且在計量有效期內(nèi)。5.2所有參與本次驗證的公司人員均進(jìn)行相關(guān)培訓(xùn)接受標(biāo)準(zhǔn)6.1.液體培養(yǎng)基促生長能力檢査：被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗菌應(yīng)生長良好。6.2.液體培養(yǎng)基指示能力檜查：與對照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗菌生長情況、指示劑反應(yīng)等應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。6.3.固體培養(yǎng)基促生長能力檢査：被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基上生長的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)一致。6.4. 固體培養(yǎng)基指示能力檢査：被檢培養(yǎng)基上試驗菌生長的菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。6.5.培養(yǎng)基抑制能力檢査：試驗菌應(yīng)不得生長。6.6.無菌性檢查：應(yīng)不得有菌生長。6.7.適用性檢查：被檢培養(yǎng)基上的菌落數(shù)不小于對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%，且生長的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)一致。驗證實施7.1. 試驗用儀器和物料所用培養(yǎng)皿、移液管、工器具均應(yīng)嚴(yán)格按照相關(guān)的滅菌程序滅菌；生物安全柜、滅菌器、霉菌培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、水浴鍋、電熱鼓風(fēng)干燥箱等。7.2.驗證用培養(yǎng)基及試劑名稱營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基改良馬丁培養(yǎng)基大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)十六烷三甲基溴化銨培養(yǎng)基0.9%無菌氯化鈉溶液0.9%無菌氯化鈉溶液（含0.05%聚山梨酯）

批號201511160012015110500120160615-0020151106001201511060012015110500120151102001

配制（稱樣量→體積）32.0g→100018.0g→100028.5.0g→100040g→100065.1g→100031.5g→100029.25g→100035g→100030g→100037.5g→100038g→100044.0g→100038.3g→1000

7.2±0.27.2±0.26.4±0.27.3±0.25.6±0.26.0±0.27.1±0.27.4±0.27.4±0.27.1±0.27.2±0.27.3±0.27.52±0.27.3.驗證用菌株名稱編號名稱編號大腸埃希菌（B）44102生孢梭菌（B）64941金黃色葡萄球菌（B）26003乙型副傷寒沙門菌（B）50094枯草芽孢桿菌（B）63501白色念珠菌（F）98001銅綠假單胞菌（B）10104黑曲霉菌（F）980037.4.測試菌懸液菌液制備接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于 30～35℃培養(yǎng)18～24小時。分別取上述新鮮培養(yǎng)物用 0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1含菌數(shù)50~100的菌懸液。接種生孢梭菌至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中， 30～35℃培養(yǎng)18～24小時。上述新鮮培養(yǎng)物用 0.9%無菌氯化鈉溶液制成每 1含菌數(shù)10~100的菌懸液。接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中，于23～28℃培養(yǎng)24~48小時。取上述培養(yǎng)物用 0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1含菌數(shù)50~100的菌懸液。接種黑曲霉菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，于23～28℃培養(yǎng)5～7天，加入3～5含0.05%（）聚山梨脂 80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，用適宜方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含 0.05%（）聚山梨脂 80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每 1含孢子數(shù)50～100的菌懸液。備注：控制菌項檢查用工作菌液濃度為 10~100l，無菌項檢查用工作菌液濃度小于 100。7.5. 檢查液體培養(yǎng)基促生長能力檢查：分別接種不大于 100的試驗菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)。液體培養(yǎng)基指示能力檢查：分別接種不大于 100的試驗菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)規(guī)定的培養(yǎng)溫度和最短時間下培養(yǎng)。固體培養(yǎng)基促生長能力檢查：取0.1（含菌數(shù)50～100）的試驗菌分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最短時間下培養(yǎng)。固體培養(yǎng)基指示能力檢查：取不大于100的試驗菌分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及時間下培養(yǎng)。培養(yǎng)基抑制能力檢查：接種不大于100的試驗菌于被檢培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最長時間下培養(yǎng)。無菌性檢查：每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5支（瓶）/傾注相應(yīng)數(shù)量的平皿，按規(guī)定條件培養(yǎng)。適用性檢查：取50～100的試驗菌1，分別注入無菌平皿中，立即傾注被檢培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，按規(guī)定條件培養(yǎng)，計數(shù)。同時，用相應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗?？瞻讓φ眨罕粰z培養(yǎng)基同時做空白對照，按上述規(guī)定條件培養(yǎng)。7.6. 各培養(yǎng)基檢查信息結(jié)果被檢培養(yǎng)基名稱檢查用菌種檢查能力培養(yǎng)時間培養(yǎng)溫度營養(yǎng)瓊脂金黃色葡萄球菌、枯草適用性檢查不超過3天30~35℃芽孢桿菌、大腸埃希菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基沙門菌促生長18~24h30~35℃改良馬丁培養(yǎng)基白色念珠菌、黑曲霉促生長5天20~25℃無菌14天金黃色葡萄球菌、枯草芽不超過3天大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基孢桿菌、銅綠假單胞菌適用性檢查30~35℃白色念珠菌、黑曲霉不超過5天沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基白色念珠菌促生長、指示24h30~35℃白色念珠菌、黑曲霉適用性檢查不超過5天23~28℃玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基白色念珠菌、黑曲霉適用性檢查不超過5天23~28℃金黃色葡萄球菌、枯草適用性檢查3天30~35℃硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基芽孢桿菌、銅綠假單胞無菌檢查14天菌、生孢梭菌乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基大腸埃希菌促生長18h35±2℃金黃色葡萄球菌抑制24h乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基大腸埃希菌促生長、指示24h35±2℃伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基大腸埃希菌促生長、指示24h35±2℃金黃色葡萄球菌、大腸液體培養(yǎng)基埃希菌、沙門菌、銅綠促生長24h35±2℃假