伊曲康唑分散片人體藥動學及生物等效性研究

伊曲康唑分散片人體藥動學及生物等效性研究【摘要】目的:研究伊曲康唑分散片和伊曲康唑膠囊在正常人體的藥動學與生物等效性。方法:18名健康男性志愿受試者隨機交叉口服g單劑量伊曲康唑分散片受試制劑和伊曲康唑膠囊參比制劑后，采用高效液相色譜法測定伊曲康唑的血漿藥物濃度，采用方差分析及雙單側(cè)t檢驗判定其生物等效性。結(jié)果:兩種制劑均符合一級吸收開放性一室模型，伊曲康唑分散片和伊曲康唑膠囊主要藥代動力學參數(shù)AUC0→72分別為和ng/(h·mL)，AUC0→∞分別為和ng/(h·mL)，Cmax分別為和ng/mL，Tmax分別為和h，t1/2分別為和h。伊曲康唑分散片的相對生物利用度為%。結(jié)論:伊曲康唑分散片和伊曲康唑膠囊為生物等效制劑。

【關(guān)鍵詞】伊曲康唑；藥物代謝動力學；生物等效性

伊曲康唑為抗真菌藥物，主要用于念珠菌性陰道炎、花斑癬、皮膚癬菌病如足底部癬、手掌部癬、口腔念珠菌病、真菌性角膜炎、甲真菌病以及系統(tǒng)性真菌病等。由于伊曲康唑是一種高親脂性化合物，患者服用伊曲康唑后生物利用度波動較大［1］。臨床上一般采取餐后立即給藥的方式，但食物成分又會影響其生物利用度［23］。本文對兩廠家生產(chǎn)的伊曲康唑分散片和伊曲康唑膠囊的人體藥動學和相對生物利用度進行研究，并對兩制劑進行生物等效性評價，為臨床用藥提供參考。

1材料與方法

試驗材料

藥品與試劑

受試制劑：伊曲康唑分散片；參比制劑：伊曲康唑膠囊。伊曲康唑?qū)φ掌?。乙腈，甲基叔丁基醚，其它試劑為國產(chǎn)分析純，水為重蒸餾水。

儀器

Agilent1100高效液相色譜儀，配Agilent1100FLD檢測器及Chemstations色譜工作站。AB135S電子分析天平，TDZ4AWS低速臺式離心機。

血藥濃度測定方法［1］

色譜條件

采用HypersilODS2色譜柱，柱溫30℃；流動相：∶乙腈，流速：mL/min；檢測波長：Ex260nm，Em365nm；進樣量：20μL。

溶液的配制

精密稱取伊曲康唑?qū)φ掌穖g置100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，得μg/mL的伊曲康唑?qū)φ掌穬淙芤?，用甲醇逐步稀釋?、1、ng/mL的對照品工作溶液，置冰箱中冷藏備用。

血樣處理

精密量取樣品血漿mL于10mL離心管中，加1mol/L的氫氧化鈉溶液200μL，旋渦振蕩5min，再加入mL甲基叔丁基醚，旋渦振蕩2min，3000r/min離心5min，吸取上清液置于5mL玻璃離心管中，45℃水浴氮氣吹干，殘渣加100μL流動相溶解，20μL進樣。外標法以峰面積進行定量分析。

標準曲線制備

用空白血漿將伊曲康唑標準儲備液稀釋成、、、、、、ng/mL的系列標準血漿樣品，按樣品處理方法處理并測定，以伊曲康唑峰面積對伊曲康唑濃度進行線性回歸，得標準曲線方程。

回收率及精密度測定

在空白血漿中加入標準溶液，分別配制成低、中、高濃度標準系列血樣各5份，按“樣品處理”方法處理并測定，另用甲醇配制含伊曲康唑濃度分別、、ng/mL的甲醇溶液各1mL，進樣20μL，記錄伊曲康唑峰面積，以此為標準，將兩組峰面積進行比較計算伊曲康唑的萃取回收率。取空白血漿及對照品溶液，按“標準曲線制備”項下方法制備伊曲康唑低、中、高三個濃度的質(zhì)量控制樣品，每一濃度平行操作5份，代入線性方程計算濃度，以測得值與加入值的比值計算回收率，并計算日內(nèi)精密度。連續(xù)3d配制并測定上述濃度樣品，考察方法的日間精密度。

樣品穩(wěn)定性

用空白血漿配制3個不同濃度的樣品，分別進行凍融實驗，20℃凍存條件下穩(wěn)定性及樣品室溫穩(wěn)定性試驗。結(jié)果樣品反復(fù)凍融4次、20℃凍存條件下120d、室溫放置10h均穩(wěn)定。

生物利用度試驗方法

18名健康志愿受試者，均為男性，年齡歲，身高cm，體重kg，無煙酒嗜好，實驗前經(jīng)詢問病史、體格檢查和實驗室檢查未發(fā)現(xiàn)異常。受試者無藥物過敏史和藥物依賴史，無慢性病史，兩周內(nèi)未服用任何藥物。受試期間統(tǒng)一清淡飲食，不使用除受試制劑以外的任何藥物，不接受煙、酒及含咖啡因飲料。受試者試驗前簽署知情同意書。試驗方案經(jīng)中南大學湘雅二醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。

采用兩制劑雙周期交叉試驗設(shè)計，將受試者隨機等分成兩組，每組9人。受試者禁食12h后，于早上8：00分別口服受試制劑或參比制劑g，統(tǒng)一用溫開水200mL送服。服藥前1h及服藥后2h禁止飲水，服藥后4h及10h統(tǒng)一進食標準餐。受試者服藥前及服藥后、、、、、、、、、、、h取靜脈血4mL。間隔2周后，交叉單劑量服用參比制劑或受試制劑，并于相同時間點采集血樣。血樣置肝素管中，立即離心，分離出血漿，于20℃冰箱中貯藏。

藥動學分析及數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法

18名受試者血藥濃度時間數(shù)據(jù)經(jīng)DAS藥動學程序［4］處理，符合一室模型。擬合求得消除速率常數(shù)λz，t1/2，梯形面積法求得AUC0→72，AUC0→∞=AUC0→72+

C72/λZ，Tmax及Cmax均用實測值，相對生物利用度F=AUC0→72/AUC0→72(R)×100%。

數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法：AUC0→72和Cmax經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后進行藥物間、周期間、個體間的三因素方差分析，再以雙單側(cè)t檢驗進行等效性判斷。若受試制劑AUC0→72對數(shù)值的90%可信限落在參比制劑80％～125%范圍內(nèi)，Cmax對數(shù)值的90%可信限落在參比制劑70％～143%范圍內(nèi)，則認定受試制劑與參比制劑生物等效［23］。Tmax采用非參數(shù)檢驗方法，判斷試驗制劑與參比制劑之間有無差別。

2結(jié)果

色譜圖

圖1分別為空白血漿、標準品、空白血漿中加入標準品和受試者服藥后血樣的色譜圖。伊曲康唑的保留時間約為min，血漿內(nèi)源性物質(zhì)及其它雜質(zhì)不干擾樣品的分離測定。

標準曲線線性范圍和最小可定量濃度

回歸方程為A=+，相關(guān)系數(shù)r=。伊曲康唑血漿濃度在～ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低定量限為ng/mL。

回收率及精密度試驗結(jié)果

萃取回收率：伊曲康唑低、中、高濃度的萃取回收率分別為%、%、%。

方法回收率及精密度：伊曲康唑低、中、高三個濃度的方法回收率、日內(nèi)精密度、日間精密度測定結(jié)果見表1。方法回收率均在85%～115%之內(nèi)，日內(nèi)、日間RSD均小于15%。符合生物等效性研究的方法學要求。表1回收率和精密度試驗結(jié)果

血藥濃度測定結(jié)果

18例受試者口服伊曲康唑分散片和伊曲康唑膠囊g后各時間的平均血漿藥物濃度時間曲線見圖2。

藥動學參數(shù)

單劑量口服伊曲康唑T和R制劑g后的主要藥代動力學參數(shù)見表2。表2主要藥代動力學參數(shù)

生物等效性分析結(jié)果

AUC0→12、Tmax、Cmax分別經(jīng)三因素方差分析，僅個體間差異有統(tǒng)計學意義，藥物間、周期間差異無統(tǒng)計學意義。經(jīng)雙向單側(cè)t檢驗，logAUC0→72TL=，TH=，均大于，；logCmaxTL=，TH=，均大于，。等效性檢驗合格，說明試驗制劑與參比制劑均在規(guī)定的80%～120%范圍內(nèi)，90%置信區(qū)間AUC0→72為%～%，Cmax為%～%。受試制劑相對于參比制劑的生物利用度為%。Tmax采用非參數(shù)檢驗方法檢驗符合要求。因此判定兩制劑具有生物等效性。

3討論

本研究建立的HPLC法測定伊曲康唑的血漿藥物濃度，色譜條件穩(wěn)定。方法簡便，特異性高，無內(nèi)源性物質(zhì)及其他雜質(zhì)干擾，回收率、精密度等符合藥動學和生物利用度研究的要求。

AUC0→72、Tmax、Cmax分別經(jīng)三因素方差分析，周期間差異無統(tǒng)計學意義，說明實驗設(shè)計合理，無周期間影響。受試制劑和參比制劑的各主要藥動學參數(shù)之間差異無統(tǒng)計學意義。雙單側(cè)t檢驗結(jié)果表明，試驗制劑與參比制劑為生物等效制劑。

試驗結(jié)果中，健康受試者口服伊曲康唑g分散片后，達峰濃度時間Tmax為h左右，口服伊曲康唑g膠囊后，達峰濃度時間Tmax為h左右，受試制劑Tmax較參比制劑小，符合分散片口服吸收快的特點。

【參考文獻】

［1］繆海均,劉皋林,惲蕓蕾,等.鹽酸伊曲康唑膠囊的人體生物等效性研究［J］.中國藥房,2006,17(1):4243.

［2］BaroneJA,KohJG,BiermanRH,etal.Foodinteractionandsteadystatepharmacokineticsofitraconazolecapsulesinhealthymalevoluneteers［J］.AntimicrobAgen