密封完好性試驗(yàn)

密封完好性試驗(yàn)第一頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日目錄

一、概述二、試驗(yàn)準(zhǔn)備三、試驗(yàn)步驟四、再驗(yàn)證周期第二頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日概述第三頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日第四頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日一、概述1、試驗(yàn)?zāi)康模河梦⑸锴秩朐囼?yàn)對凍干粉針劑車間軋蓋密封系統(tǒng)進(jìn)行挑戰(zhàn)性試驗(yàn)，以確認(rèn)軋蓋后容器密封系統(tǒng)的完好性。2、試驗(yàn)概述：取西林瓶灌裝入已滅菌培養(yǎng)基，在正常生產(chǎn)線上抽真空、壓塞、軋蓋。此后，將容器密封面浸入高濃度運(yùn)動(dòng)性菌液中，取出并檢查是否有微生物侵入，以確認(rèn)容器密封系統(tǒng)的完好性。同時(shí)，須做陽性對照試驗(yàn)，確認(rèn)培養(yǎng)基的促菌生長能力。第五頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日試驗(yàn)準(zhǔn)備試驗(yàn)準(zhǔn)備洗瓶膠塞處理培養(yǎng)基菌懸液第六頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日二、試驗(yàn)準(zhǔn)備

批量：1000瓶/批1、洗瓶:清洗西林瓶1100只，經(jīng)305℃干熱滅菌12分鐘后送至灌裝間備用。2、膠塞處理:清洗膠塞1100只，經(jīng)121℃濕熱滅菌20分鐘后備用。第七頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日

3.1預(yù)先對配制、灌裝系統(tǒng)按照凍干粉針劑無菌操

作要求進(jìn)行清潔、滅菌。

3.2按照培養(yǎng)基生產(chǎn)廠商要求，每批按TSB（胰

酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基）32.3g，加1L注射用水

的比例進(jìn)行配制，加熱溶解并標(biāo)定至4.5L，置

于滅菌柜中用純蒸汽121℃滅菌20min。二、試驗(yàn)準(zhǔn)備

3、配制培養(yǎng)基:第八頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日

二、試驗(yàn)準(zhǔn)備

3.3將滅菌后的培養(yǎng)基（TSB配制液）通過

未裝濾膜及濾芯的過濾系統(tǒng)，在灌裝機(jī)

的數(shù)控器上調(diào)節(jié)好裝量（3.5ml）進(jìn)行灌

裝半加塞。3.4將灌裝半加塞的培養(yǎng)基在百級層流保護(hù)下轉(zhuǎn)移至凍干機(jī)內(nèi)抽真空，結(jié)束后全壓塞、出箱、軋蓋。第九頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日4、制備微生物菌懸液：

4.1從銅綠假單胞菌（ATCC9027）的新鮮斜面上取一整環(huán)培養(yǎng)物，分別接入含6ml無菌培養(yǎng)基的試管中，在30～35℃下培養(yǎng)18～24h。

4.2將每管的培養(yǎng)物分別轉(zhuǎn)入含600ml相同培養(yǎng)基的容器內(nèi)，于30~35℃下培養(yǎng)18～24h。在培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，能明顯見容器內(nèi)培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁。

4.3在微生物侵入試驗(yàn)開始時(shí)，所用菌懸液濃度（活菌數(shù)）必須達(dá)到1×106CFU/ml。

二、試驗(yàn)準(zhǔn)備

第十頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日試驗(yàn)步驟營養(yǎng)試驗(yàn)微生物侵入試驗(yàn)陽性對照實(shí)驗(yàn)微生物侵入試驗(yàn)后營養(yǎng)試驗(yàn)第十一頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日三、試驗(yàn)步驟1.1從1000瓶培養(yǎng)基中取150瓶作為本次試驗(yàn)的試樣品。1.2用剪刀輕輕從斜側(cè)面去除至少50瓶試樣品的整個(gè)鋁蓋（注意不要破壞其密封口，將去鋁蓋時(shí)不慎損壞容器密封性的所有試樣品剔除），另取80瓶帶蓋試樣品，將每一試樣品倒轉(zhuǎn)，使培養(yǎng)基與西林瓶內(nèi)表面及膠塞充分接觸，在30～35℃豎立倒置培養(yǎng)14天。1、試驗(yàn)樣品的制備:第十二頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日三、試驗(yàn)步驟1.3在培養(yǎng)期內(nèi)，當(dāng)試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)任何帶蓋試樣品長菌時(shí)，則試驗(yàn)無效，須棄去全部試樣品，重新從頭開始試驗(yàn)。

第十三頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日2.1所有試樣品培養(yǎng)14天均不長菌時(shí)，從上述1.2

試樣品中隨機(jī)取20個(gè)帶蓋試樣品，每個(gè)試樣

品內(nèi)接種100CFU銅綠假單胞菌。在30～35℃

下培養(yǎng)7天，或培養(yǎng)至所有試樣品都呈陽性結(jié)

果。三、試驗(yàn)步驟2、確認(rèn)培養(yǎng)基促菌生長能力―營養(yǎng)試驗(yàn)：第十四頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日2.1.1若7天內(nèi)，所有接種銅綠假單胞菌的試樣品中，微生物生長良好，則容器內(nèi)培養(yǎng)基的促菌生長能力可判為合格。使用革蘭染色后，并置于紫外燈下，培養(yǎng)基呈藍(lán)綠色熒光，則確認(rèn)試樣品容器內(nèi)生長的菌為接入的銅綠假單胞菌，即為陽性。2.1.2若7天內(nèi)，所有接種銅綠假單胞菌的試樣品中，微生物生長條件不好或經(jīng)鑒別后受其它菌種污染，則試驗(yàn)失敗，需重新作營養(yǎng)試驗(yàn)。三、試驗(yàn)步驟第十五頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日3、微生物侵入試驗(yàn)操作步驟:

微生物培養(yǎng)及侵入試驗(yàn)應(yīng)在不影響生產(chǎn)環(huán)境的地方（中心化驗(yàn)室陽性室）進(jìn)行。三、試驗(yàn)步驟第十六頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日3.1將新鮮的銅綠假單胞菌（ATCC9027）的菌懸液倒入適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)，用試管架固定試樣品。三、試驗(yàn)步驟3.2從上述1.2試樣品中再取50只帶蓋試樣品為A組，另取25個(gè)去蓋試樣品為B組，均倒置于菌懸液中,使試樣容器內(nèi)的培養(yǎng)基充分接觸封口內(nèi)表面，試樣品的頸部及封口的外表面應(yīng)完全浸泡在菌懸液中（如下圖1所示）。第十七頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日圖1微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)示意圖三、試驗(yàn)步驟第十八頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日3.3將A組和B組試樣品在菌懸液中持續(xù)浸泡約4h后，取出試樣品，擦干試樣品容器外殘余的菌懸液，其外表用含0.5%過乙酸的70%異丙醇消毒五分鐘（注意不要破壞其密封口）。三、試驗(yàn)步驟3.4從1.2試樣品中另取有蓋和去蓋的培養(yǎng)基各兩個(gè)，做陽性對照。陽性對照試樣品不經(jīng)菌懸液浸泡，其外表用含0.5%過乙酸的70%異丙醇消毒五分鐘后，接種10～100CFU銅綠假單胞菌，按營養(yǎng)試驗(yàn)的步驟進(jìn)行陽性對照試驗(yàn)。第十九頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日3.5將消毒后的試樣品放入塑料袋中，置30～35℃下培養(yǎng)7天。檢查試樣品內(nèi)微生物生長情況，有生長記作“﹢”，無生長記作“﹣”。三、試驗(yàn)步驟3.5.1如果試樣品長菌，則按照2.1所述方法確認(rèn)生長菌是挑戰(zhàn)微生物――銅綠假單胞菌。第二十頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日3.5.2如果所有試樣品均不長菌，則從浸過菌懸液的A組試樣中取10甁，B組試樣中取5瓶，按2.所述方法對試樣品進(jìn)行營養(yǎng)性試驗(yàn)。

三、試驗(yàn)步驟3.6微生物侵入試驗(yàn)用菌懸液經(jīng)滅菌后丟棄。

第二十一頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日4.1步驟2、3.4中進(jìn)行的營養(yǎng)試驗(yàn)和3.5.2中進(jìn)行的陽性對照試驗(yàn)都合格，微生物侵入試驗(yàn)才有效。三、試驗(yàn)步驟4、結(jié)果評價(jià):第二十二頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日4.2挑戰(zhàn)試驗(yàn)中A組和B組如有長菌，需記錄長菌的試樣數(shù)。在A組中如出現(xiàn)長菌，則須按下述要求作進(jìn)一步調(diào)查。4.2.1仔細(xì)去除微生物生長的容器的蓋和塞，檢查容器封口是否有缺損，造成微生物侵入。

4.2.2將觀察到試樣品封口的缺陷，采用拍照或其他適當(dāng)方式詳細(xì)記錄。三、試驗(yàn)步驟第二十三頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日

4.3如果任何挑戰(zhàn)試驗(yàn)中長菌的試樣品不是由于容器封口明顯的物理性缺損所致，容器密封性挑戰(zhàn)試驗(yàn)作失敗論。三、試驗(yàn)步驟第二十四頁，共二十八頁，編輯于2023年，星期日5、貯存穩(wěn)定性:5.1將剩余未經(jīng)挑戰(zhàn)試驗(yàn)的容器放入箱中，保存在室溫黑暗處；5.2在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔（如12個(gè)月、24個(gè)月）取出一些容器，重復(fù)挑戰(zhàn)性試驗(yàn)（步驟同上）。

三、試驗(yàn)步驟第二十五頁，共二十八頁，編輯于