演示文稿微生物的分離和純培養(yǎng)

演示文稿微生物的分離和純培養(yǎng)本文檔共53頁；當前第1頁；編輯于星期一\17點10分（優(yōu)選）微生物的分離和純培養(yǎng)本文檔共53頁；當前第2頁；編輯于星期一\17點10分微生物的分離和純培養(yǎng)顯微鏡和顯微技術本文檔共53頁；當前第3頁；編輯于星期一\17點10分§1微生物的分離和純培養(yǎng)本文檔共53頁；當前第4頁；編輯于星期一\17點10分無菌技術用液體培養(yǎng)基分離、培養(yǎng)用固體培養(yǎng)基分離、培養(yǎng)二元培養(yǎng)物分離、培養(yǎng)選擇培養(yǎng)分離單孢子分離微生物分離方法微生物的保藏技術本文檔共53頁；當前第5頁；編輯于星期一\17點10分微生物純種分離將多種混雜微生物，經(jīng)某種技術或方法分離成純種的過程純培養(yǎng)（pureculture）在適宜條件下培養(yǎng)純種獲得的培養(yǎng)物（群體）本文檔共53頁；當前第6頁；編輯于星期一\17點10分單個微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結構的子細胞群體，稱為菌落(colony)。菌落本文檔共53頁；當前第7頁；編輯于星期一\17點10分一個菌落是一個純種，也是一個純培養(yǎng)；單個微生物只在固體培養(yǎng)基上形成菌落；在液體培養(yǎng)基中不會形成菌落本文檔共53頁；當前第8頁；編輯于星期一\17點10分同一細菌在不同的培養(yǎng)平板上形成不同的特征菌落本文檔共53頁；當前第9頁；編輯于星期一\17點10分一、用固體培養(yǎng)基（營養(yǎng)瓊脂平板）分離純種本文檔共53頁；當前第10頁；編輯于星期一\17點10分微生物樣品多種混雜某種方法分散成單個微生物平板培養(yǎng)單菌落每個菌落為純種（純培養(yǎng)）單菌落轉(zhuǎn)接培養(yǎng)純種（純培養(yǎng)）（一）、微生物純種分離的原理和方法本文檔共53頁；當前第11頁；編輯于星期一\17點10分（二）、純種平板分離的不同方法從土壤中分離純微生物104/ml103/ml102/ml101/ml本文檔共53頁；當前第12頁；編輯于星期一\17點10分涂布平板法稀釋倒平板法1、涂布平板法（spreadplatemethod)本文檔共53頁；當前第13頁；編輯于星期一\17點10分2、稀釋倒平板法（傾注平板法）（pourplatemethod)本文檔共53頁；當前第14頁；編輯于星期一\17點10分分區(qū)劃線法（蛇形線法）操作圖第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)3、平板劃線法（streakplatemethod）本文檔共53頁；當前第15頁；編輯于星期一\17點10分分區(qū)劃線法適用范圍：

適用于濃度較大的樣品本文檔共53頁；當前第16頁；編輯于星期一\17點10分連續(xù)劃線法操作圖連續(xù)劃線法適用范圍：

適用于濃度較小的樣品本文檔共53頁；當前第17頁；編輯于星期一\17點10分培養(yǎng)嚴格厭氧微生物4、稀釋搖管法（dilutionshakeculturemethod)本文檔共53頁；當前第18頁；編輯于星期一\17點10分二、用液體培養(yǎng)基分離純化培養(yǎng)

個別細胞較大的細菌

原生動物、藻類接種物液體培養(yǎng)基順序稀釋法分離營養(yǎng)瓊脂平板不能長菌落如何分離純培養(yǎng)？本文檔共53頁；當前第19頁；編輯于星期一\17點10分培養(yǎng)物在液體培養(yǎng)基中進行高度順序稀釋，如果經(jīng)稀釋后的同一稀釋度的大多數(shù)（95%以上）試管中沒有微生物生長，有微生物生長的試管得到的培養(yǎng)物可能就是純培養(yǎng)物。本文檔共53頁；當前第20頁；編輯于星期一\17點10分上節(jié)課知識回顧微生物分離純化方法用固體培養(yǎng)基分離、純培養(yǎng)稀釋倒平板法涂布平板法平板劃線法稀釋搖管法用液體培養(yǎng)基分離、純培養(yǎng)本文檔共53頁；當前第21頁；編輯于星期一\17點10分三、單細胞（單孢子）分離采用顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細胞或單個個體進行培養(yǎng)以得到純培養(yǎng)，稱為單細胞（單孢子）分離法。本文檔共53頁；當前第22頁；編輯于星期一\17點10分個體較小的微生物需采用顯微操作儀分離難度與細胞或個體的大小成反比營養(yǎng)瓊脂平板上不能形成菌落較大的微生物可使用毛細管提取本文檔共53頁；當前第23頁；編輯于星期一\17點10分Eachcolonywasexaminedmicroscopically本文檔共53頁；當前第24頁；編輯于星期一\17點10分四、選擇培養(yǎng)分離創(chuàng)造適于目的微生物生長條件原理促使目的微生物快速生長呈優(yōu)勢菌抑制非目的微生物生長從混雜微生物中分離目的微生物本文檔共53頁；當前第25頁；編輯于星期一\17點10分1、利用選擇培養(yǎng)基進行直接分離選擇培養(yǎng)基

只允許特定微生物生長，而同時抑制或阻止其他微生物生長的培養(yǎng)基本文檔共53頁；當前第26頁；編輯于星期一\17點10分土壤目的菌優(yōu)勢非目的菌選擇培養(yǎng)基直接分離單細胞選擇培養(yǎng)基平板（含牛奶或酪蛋白唯一C、N源）37℃培養(yǎng)目的菌落菌落周圍有透明蛋白水解圈1、利用選擇培養(yǎng)基進行直接分離例一：分離篩選蛋白酶產(chǎn)生細菌本文檔共53頁；當前第27頁；編輯于星期一\17點10分含牛奶選擇培養(yǎng)基目的菌生長平板營養(yǎng)選擇因子：牛奶或酪蛋白只允許分解利用蛋白質(zhì)的目的菌生長，淘汰非目的菌長出的目的菌并不一定是同種細菌，但皆產(chǎn)蛋白酶例一：分離篩選蛋白酶產(chǎn)生細菌本文檔共53頁；當前第28頁；編輯于星期一\17點10分例二：分離篩選產(chǎn)高溫淀粉酶（65℃）細菌單細胞選擇培養(yǎng)基平板（淀粉為唯一C源）65℃培養(yǎng)淀粉水解透明圈目的菌菌落選擇因子：營養(yǎng)選擇因子淀粉環(huán)境選擇因子65℃高溫本文檔共53頁；當前第29頁；編輯于星期一\17點10分人為創(chuàng)造一些條件只讓所需的微生物生長，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進行競爭，在生長能力方面遠遠超過其他微生物。2、富集培養(yǎng)法富集培養(yǎng)是分離微生物菌種最強有力的技術之一營養(yǎng)選擇因子和生理條件選擇因子可無窮盡組合，可從自然界選擇分離各類特異微生物本文檔共53頁；當前第30頁；編輯于星期一\17點10分例：從土壤中分離能產(chǎn)生?－半乳糖苷酶的微生物富集培養(yǎng)選擇培養(yǎng)基分離目的菌驗證本文檔共53頁；當前第31頁；編輯于星期一\17點10分如果培養(yǎng)物中只含有兩種微生物，而且是有意識的保持兩者之間的特定關系的培養(yǎng)物稱為二元培養(yǎng)物。五、二元培養(yǎng)物病毒和宿主細胞纖毛蟲、變形蟲和粘細菌本文檔共53頁；當前第32頁；編輯于星期一\17點10分微生物純培養(yǎng)分離方法的比較方法應用范圍稀釋倒平板法

涂布平板法平板劃線法稀釋搖管法液體稀釋法單細胞分離法選擇培養(yǎng)分離即可定義,又可定量,用途廣泛用得最多方法簡便,多用于分離細菌主要分離嚴格厭氧菌適用于培養(yǎng)細胞較大的微生物局限于高等專業(yè)化的科學研究適用于分離某些生理類型較特殊的微生物本文檔共53頁；當前第33頁；編輯于星期一\17點10分六、無菌技術在分離、轉(zhuǎn)接及培養(yǎng)純培養(yǎng)物時防止其被其他微生物污染的技術稱為無菌技術。它是微生物研究進行的關鍵。用于分離、培養(yǎng)微生物的器具事先不含任何微生物在轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)微生物時防止其他微生物的污染本文檔共53頁；當前第34頁；編輯于星期一\17點10分1、所用物品的滅菌技術A、玻璃或金屬器皿滅菌高溫干熱滅菌：干燥箱160－170℃干熱空氣2h滅菌濕熱滅菌：高壓蒸汽滅菌鍋121℃濕熱滅菌30min本文檔共53頁；當前第35頁；編輯于星期一\17點10分B、培養(yǎng)基或溶液的滅菌濕熱滅菌：高壓蒸汽滅菌鍋121℃濕熱滅菌30min本文檔共53頁；當前第36頁；編輯于星期一\17點10分C、血清或生長因子溶液滅菌過濾除菌：細菌濾器濾膜孔徑小于細菌細胞的大小本文檔共53頁；當前第37頁；編輯于星期一\17點10分上節(jié)課知識回顧二、無菌技術單孢子分離選擇培養(yǎng)分離二元培養(yǎng)物一、微生物分離純化方法1、所用物品的滅菌技術玻璃或金屬器皿滅菌培養(yǎng)基或溶液滅菌血清或生長因子滅菌本文檔共53頁；當前第38頁；編輯于星期一\17點10分2、接種接種:將微生物接到適于它生長繁殖的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過程叫做接種.無菌接種:培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過滅菌的工具在無菌條件下將含菌材料接種于培養(yǎng)基上，這個過程叫做無菌接種。本文檔共53頁；當前第39頁；編輯于星期一\17點10分1.接種針2.接種環(huán)3.接種鉤4.接種鋤5.接種鏟6.接種匙7.接種刀8.接種刀9.剪刀10.鋼鉤11.鑷子12.彈簧接種槍13.接種、槍（日本式）涂布棒彈簧接種槍本文檔共53頁；當前第40頁；編輯于星期一\17點10分接種環(huán)的滅菌接種環(huán)燒紅接種環(huán)稍冷卻接種工具本文檔共53頁；當前第41頁；編輯于星期一\17點10分挑選單個菌落劃線本文檔共53頁；當前第42頁；編輯于星期一\17點10分1、實驗臺2、空氣環(huán)境條件本文檔共53頁；當前第43頁；編輯于星期一\17點10分七、微生物的保藏技術菌種保藏的原理：根據(jù)菌種特性及保藏目的的不同，給微生物菌株以特定的條件，使其存活而得以延續(xù)。例如干燥、低溫、缺氧、避光、缺乏營養(yǎng)等條件，使菌株的代謝水平降低，乃至完全停止，達到半休眠或完全休眠的狀態(tài)。本文檔共53頁；當前第44頁；編輯于星期一\17點10分傳代培養(yǎng)保藏冷凍保藏干燥保藏紙片保藏薄膜保藏寄主保藏微生物菌株保藏的方法：本文檔共53頁；當前第45頁；編輯于星期一\17點10分傳代保藏斜面、半固體瓊脂柱、液體傳代培養(yǎng)保藏斜面：可保存數(shù)周至數(shù)年，可用石蠟或橡皮塞封口，低溫延長保存時間液體：菌苔制成菌懸液，低溫（懸液保藏法）缺點：繁瑣、易污染、變異喪生原有特性本文檔共53頁；當前第46頁；編輯于星期一\17點10分冷凍保藏液氮保藏、低溫冰箱等液氮可達－196℃，效果較好注意：速凍，減少冰晶損傷細胞冷凍保藏法細胞體積大的要比體積小的對低溫更敏感；無細胞壁的比有細胞壁的更敏感。本文檔共53頁；當前第47頁；編輯于星期一\17點10分干燥保藏沙土管保藏、冷凍真空干燥保藏沙土管：產(chǎn)孢子菌。制成孢子懸液，加無菌沙土管，減壓抽干水分，石蠟封口，冰箱保存。冷凍真空干燥：加保護劑樣品預先冷凍，真空冰升華去水，低溫保存，保存數(shù)十年，目前最普遍、最重要的方法，菌種保藏中心多采用此法。菌種保藏時采用不同手段保藏，防止某種方法失敗導致菌種喪失。干燥保藏法本文檔共53頁；當前第48頁；編輯于星期一\17點10分標準菌株的保存使用

1.長期保存的儲存菌株以冷凍干燥保藏為主，特殊要求的菌種可用其它方法進行保存，保存期可長達幾年至幾十年。

2.半儲存菌株以含20%甘油的肉湯或液體石臘封存的半固體瓊脂為主，在0℃以下保存，保存期為3－6個月。

3.應用菌株以瓊脂斜面為主，在4℃保存，保存期為1－3個月。

4.菌種的傳代不可超過6次。視菌種的特性及使用情況，一般儲存菌株每5年傳記代一次，每1-2年從儲存菌株轉(zhuǎn)接至半儲存菌株，半儲存菌株每3-6個月傳代一次，每1-3個月從半儲存菌株轉(zhuǎn)接接至應用菌株。

5.每次檢驗用的菌株必須是從應用菌株轉(zhuǎn)接的新鮮菌株。每支應用菌株用兩次后必須銷毀（121℃，0.1MPa高壓滅菌處理15分鐘以上）。

本文檔共53頁；當前第49頁；編輯于星期一\17點10分國內(nèi)外菌種保藏部分情況我國于1979年7月成立了中國微生物菌種保藏管理委員會(CCCCM).該委員會下設6個菌種保藏管理中心,其負責單位、代號及保藏菌種的性質(zhì)如下:

本文檔共53頁；當前第50頁；編輯于星期一\17點10分普通微生物菌種保藏管理中心(CCGMC)--中科院微生物所,北京(AS),真菌、細菌;中科院武漢病毒研究所,武漢(AS-IV),病毒。農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心(ACCC)---中國農(nóng)業(yè)科學院土壤肥料研究所,北京(ISF)。工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(CICC)---輕工業(yè)部食品發(fā)酵工業(yè)科學研究所,南京(ID),真菌;衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所,北京(NICPBP),細菌；中國醫(yī)學科學院病毒研究所,北京(IV),病毒。本文檔共53頁；當前第51頁；編輯于星期一\17點10分抗菌素菌種保藏管理中心(CACC)---中國醫(yī)學科學院抗菌素研究所北京(IA)；四川抗菌素工業(yè)研究所,成都(SIA),新抗菌素菌種;華北制藥廠抗菌素研究所,石家莊(IANP),生產(chǎn)用抗菌素菌種。獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心(CVCC)---農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)藥品監(jiān)察所,北京(CIVBP)。除了上述保藏中心外,我國從事微生物研究并保藏有一定數(shù)量各類專業(yè)用微生物菌種的科研單位、大專院校還有近百所。

本文檔共53頁；當前第52頁；