霍亂弧菌彎曲菌不發(fā)酵G桿菌

弧菌科一群菌體短小、彎曲成弧形或直桿狀的革蘭陰性細(xì)菌兼性厭氧，發(fā)酵葡萄糖，許多菌株生長需要2%~3%氯化鈉大多數(shù)菌株氧化酶陽性具有一端單一鞭毛、運(yùn)動迅速弧菌科細(xì)菌廣泛分布于自然界，以水中最為多見。其中有一些種對人類致病。

本文檔共51頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分霍亂弧菌一、臨床意義是引起腸道烈性傳染病——霍亂的病原體。有兩個(gè)主要生物型：古典生物型、EL·Tor生物型。經(jīng)消化道傳染，通過霍亂腸毒素致病本文檔共51頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分小腸上皮細(xì)胞膜上激活腺苷酸環(huán)化酶細(xì)胞內(nèi)ATPCAMP（濃度升高）腸腺分泌大量液體和電介質(zhì)腔內(nèi)液體增多劇烈嘔吐，腹瀉，一“米泔樣”水、電介質(zhì)丟失休克、酸堿中毒霍亂腸毒素A1片段本文檔共51頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分二、微生物學(xué)特性

形態(tài)與染色

革蘭染色陰性弧形或逗點(diǎn)狀周身菌毛，有莢膜，無芽胞單鞭毛，運(yùn)動活潑直接染色鏡檢，可見排列如“魚群”狀；懸滴觀察，可見穿梭運(yùn)動本文檔共51頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分本文檔共51頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分培養(yǎng)兼性厭氧營養(yǎng)要求不高耐堿不耐酸喜pH8.0-9.0堿性環(huán)境pH8.4堿性蛋白胨水（選擇培養(yǎng)基）

生化反應(yīng)發(fā)酵甘露醇及蔗糖，緩慢發(fā)酵乳糖霍亂紅反應(yīng)陽性，不同生物型生化反應(yīng)不同本文檔共51頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分三、微生物檢驗(yàn)標(biāo)本采集米泔樣排泄物涂片鏡檢觀察“魚群樣”運(yùn)動分離培養(yǎng)堿性蛋白胨水本文檔共51頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分分解色氨酸還原硝酸鹽靛基質(zhì)亞硝酸鹽亞硝酸靛基質(zhì)加數(shù)滴濃硫酸紅色反應(yīng)鑒別：●

霍亂紅反應(yīng)本文檔共51頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分0.5%去氧膽酸鈉溶液霍亂弧菌混勻成濃懸液懸液由混變清，同時(shí)變粘稠用接種環(huán)挑取，有粘絲形成1分鐘●粘絲試驗(yàn)本文檔共51頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分0/129敏感試驗(yàn):O1和非O1群敏感雞紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)：古典生物型陽性，EL·Tor生物型陰性多粘菌素B敏感試驗(yàn)：古典生物型敏感，EL·Tor生物型不敏感第Ⅲ、Ⅴ組噬細(xì)菌體敏感試驗(yàn)：古典生物型可被第Ⅳ組裂解，EL·Tor生物型可被第Ⅴ組裂解抗生素敏感試驗(yàn)抗體檢測本文檔共51頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分本文檔共51頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分（一）臨床意義具有嗜鹽性（halophilic）存在于近海的海水、海底的沉淀物、魚蝦類和貝殼及鹽漬加工的海產(chǎn)品中主要引起食物中毒和急性腹瀉是我國沿海地區(qū)及海島食物中毒的最常見病原菌胃腸炎臨床表現(xiàn)有：惡心、嘔吐、腹痛、低熱、寒戰(zhàn)等。腹瀉呈水樣便，偶爾血性，恢復(fù)較快，病程2~3天，通常為自限性還可引起傷口感染和菌血癥副溶血性弧菌

本文檔共51頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分（二）生物學(xué)特性1.形態(tài)革蘭陰性桿菌，有鞭毛（極單毛），無莢膜，無芽胞2.抗原結(jié)構(gòu)耐熱的菌體（O）抗原，具有群特征性，副溶血性弧菌的O抗原有13種鞭毛抗原，不耐熱，無型特異性本文檔共51頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分（三）微生物檢驗(yàn)本文檔共51頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分第十二章

彎曲菌及螺桿菌本文檔共51頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分第一節(jié)彎曲菌屬彎曲菌屬（Campylobacter）是一類呈逗點(diǎn)狀或S形的革蘭陰性菌，廣泛分布于動物界其中有些可引起動物與人類的腹瀉、胃腸炎和腸道外感染等疾病對人致病有空腸彎曲菌、大腸彎曲菌、胎兒彎曲菌等，其中空腸彎曲菌是腹瀉的常見病原菌本文檔共51頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分生物學(xué)特性革蘭陰性，菌體彎曲呈逗點(diǎn)、弧形、S形、螺旋形或典型的海鷗展翅（gullwing）形。陳舊培養(yǎng)物可呈球形或長絲狀。無芽胞?？乖煞钟芯w(O)抗原、熱不穩(wěn)定抗原(HL系統(tǒng))和鞭毛(H)抗原。最佳氣體環(huán)境為含5%氧氣、10%二氧化碳及85%氮?dú)獾挚沽Σ粡?qiáng)，室溫可迅速死亡。對熱敏感，標(biāo)本在4℃冰箱可保存3周。本文檔共51頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分微生物檢驗(yàn)本文檔共51頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分第二節(jié)螺桿菌屬螺桿菌屬（Helicobacter）：細(xì)菌有20余種，有9個(gè)種可從人體分離到能引起人類疾病菌種幽門螺桿菌(H.pylori)、H.fennelliae和H.cinaedi。幽門螺桿菌與萎縮性胃炎，胃、十二指腸潰瘍和胃癌等疾病相關(guān)其他螺桿菌也可感染胃粘膜，但少見。本章主要敘述幽門螺桿菌。本文檔共51頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分諾貝爾生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)1983年Marshall和Warren首先用微需氧技術(shù)從慢性胃炎、消化性潰瘍患者的胃粘膜分離出彎曲狀的細(xì)菌，并證明該細(xì)菌感染胃部會導(dǎo)致胃炎、胃潰瘍和十二指腸潰瘍，由此獲得了2005年諾貝爾生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)本文檔共51頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分一、分類最初因形態(tài)、分離培養(yǎng)方法與彎曲菌屬細(xì)菌相似，又僅從胃標(biāo)本中分離到，被稱作胃彎曲菌樣細(xì)菌由于此菌在胃竇部多見，且形態(tài)、培養(yǎng)及某些生化特性與彎曲菌屬相似，DNAG+Gmol%也在彎曲菌屬范圍內(nèi)，故命名為幽門彎曲菌(campylobacterpylori)1989年Goodwin等根據(jù)該菌的超微結(jié)構(gòu)、形態(tài)、菌體脂肪酸組成、生長特征和酶的活力、16SrRNA序列等，提出該菌不應(yīng)歸于彎曲菌屬，后稱為幽門螺桿菌(Helicobacterpylori,HP)本文檔共51頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分臨床意義HP感染非常普遍。該菌為一種高度適應(yīng)或只能生活于胃粘膜的細(xì)菌，菌體周圍微環(huán)境的pH值為7.0。胃竇為其定植的最佳部位HP感染與慢性淺表性胃炎或萎縮性胃炎之間的病因關(guān)系已充分確立。流行病學(xué)資料表明胃癌發(fā)病率在一些HP感染率高的人群中較高本文檔共51頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分生物學(xué)特性菌體細(xì)長彎曲呈螺形、S形或海鷗形。菌體一端或兩端可有多根帶鞘鞭毛，運(yùn)動活潑。菌體長2.5~4.0μm，寬0.5~1.0μm。革蘭染色陰性，有動力。在胃粘膜上皮細(xì)胞表面常呈典型的螺旋狀或弧形。本文檔共51頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分固體培養(yǎng)基上生長時(shí)，除典型形態(tài)外，有時(shí)可出現(xiàn)桿狀或圓球狀。電鏡下菌體的一端可伸出2~6條帶鞘鞭毛。鞭毛長為菌體1~1.5倍，粗約30nm。鞭毛在運(yùn)動中起推進(jìn)器作用，在定居過程中起錨住作用。本文檔共51頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分為微需氧菌，在5%O2、10%CO2、85%N2的環(huán)境中生長良好。最適生長溫度為37℃。相對濕度在98%以上為宜營養(yǎng)要求較高，一般需含血液或血清才能生長，常用的培養(yǎng)基有哥倫比亞血瓊脂、心腦浸液血瓊脂、布氏菌血培養(yǎng)基等本文檔共51頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分HP生長緩慢，需經(jīng)48~72h才長出菌落圓形孤立的小菌落，無色半透明呈露滴狀，直徑約0.5~1mm，血平板上有輕度溶血。沿接種線擴(kuò)散生長，融合成片，扁平，無色半透明HP生化反應(yīng)不活躍，不能利用糖類；本文檔共51頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分具有大量高活力的胞外脲酶，產(chǎn)生的脲酶相當(dāng)于普通變形桿菌的20~70倍。此外還產(chǎn)生氧化酶、觸酶、堿性磷酸酶、α-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶和DNA酶等pH降至3.5以下時(shí)活力明顯減弱生理濃度的膽鹽可抑制HP生長本文檔共51頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分四、微生物檢驗(yàn)本文檔共51頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分（二）微生物檢驗(yàn)標(biāo)本采集經(jīng)胃鏡用活檢鉗于近幽門部、胃竇部或病變鄰近處取材，最好采取多位點(diǎn)樣品應(yīng)立即行床邊接種或放入20%葡萄糖運(yùn)送液0.5ml內(nèi)，4℃中保存不超過5h受檢者術(shù)前應(yīng)停服鉍劑或抗菌藥物一周本文檔共51頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分（三）標(biāo)本直接檢查1.直接顯微鏡檢查涂片或懸滴觀察將活檢組織研碎，涂片或懸滴，置相差或暗視野顯微鏡下可見HP形態(tài)典型、運(yùn)動活潑直接涂片染色鏡檢將活檢粘膜組織在玻片上涂抹后，經(jīng)革蘭染色或單染色后鏡檢，如發(fā)現(xiàn)典型形態(tài)的HP即可診斷本文檔共51頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分組織切片染色鏡檢組織塊經(jīng)福馬林固定、切片經(jīng)W-S銀染色、姬姆薩染色、HE染色和熒光染色等染色后鏡檢HP，以W-S銀染效果最好免疫組化用免疫組化法可檢出胃粘膜組織切片中的完整HP及破碎的菌體或抗原成分間接免疫熒光法（IIF）本文檔共51頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分2．快速脲酶試驗(yàn)

Christensen尿素培養(yǎng)基將小塊的活檢組織塊放入裝有培養(yǎng)基的瓶內(nèi)，如培養(yǎng)基由黃變?yōu)榧t色為陽性。提示由該菌產(chǎn)生的高活性的脲酶已將尿素分解，結(jié)果常在幾分鐘至24小時(shí)內(nèi)得到本文檔共51頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分3．核酸檢測

現(xiàn)有的方法是從克隆的HP染色體DNA的特異性片段中構(gòu)建引物從HP脲酶A基因序列中構(gòu)建引物用PCR擴(kuò)增結(jié)合限制性內(nèi)切酶多態(tài)性分析技術(shù)鑒別HP可檢測出不能分離培養(yǎng)的HP本文檔共51頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分4．糞便標(biāo)本抗原檢測

可采用ELISA方法直接測定糞便標(biāo)本中的抗原。適用于不能進(jìn)行13C或14C標(biāo)記尿素呼吸試驗(yàn)或胃鏡檢查的患者本文檔共51頁；當(dāng)前第34頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分（四）分離培養(yǎng)與鑒定

分離培養(yǎng)宜用新鮮配制的選擇培養(yǎng)基。將標(biāo)本的粘膜面在平板上反復(fù)涂擦，或?qū)?biāo)本研碎后用研磨棒蘸取適量勻漿接種將接種后的平板放入微需氧和98%以上濕度的環(huán)境培養(yǎng)本文檔共51頁；當(dāng)前第35頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分鑒定主要根據(jù)菌落特征、形態(tài)和染色性；37℃生長；氧化酶和觸酶均陽性、脲酶強(qiáng)陽性；對萘啶酸耐藥、頭孢噻吩敏感；在1%甘油和1%膽鹽中均不生長。本文檔共51頁；當(dāng)前第36頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分（五）抗體檢測用血清學(xué)方法檢測患者體內(nèi)的抗HP抗體（IgG、IgM和IgA）系最常用的無創(chuàng)傷性診斷HP感染的方法目前已有補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、膠乳凝集試驗(yàn)及ELISA等，而以ELISA應(yīng)用最為廣泛，現(xiàn)有商品化的ELISA、膠乳凝集試驗(yàn)試劑盒用于檢測患者血清中HP的菌體抗體或脲酶抗體本文檔共51頁；當(dāng)前第37頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分（六）13C或14C標(biāo)記尿素呼吸試驗(yàn)基本方法是患者禁食一夜，進(jìn)食用13C或14C標(biāo)記的尿素，HP產(chǎn)生的脲酶分解尿素釋放帶有同位素的CO2，因此可測定患者呼氣中釋放帶有同位素的CO2量，如CO2含量超過標(biāo)準(zhǔn)，提示有HP存在。該方法敏感性與特異性均很好，只是需要特殊的同位素測定儀。本文檔共51頁；當(dāng)前第38頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分第九章非發(fā)酵革蘭陰性桿菌概念：一大群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧、無芽胞的革蘭陰性桿菌。這一章節(jié)中講述的細(xì)菌大多為條件致病菌，某些菌種是引起醫(yī)院感染的病原體，如：銅綠假單胞菌不動桿菌屬產(chǎn)堿桿菌屬黃桿菌屬軍團(tuán)菌屬（人類的致病菌）本文檔共51頁；當(dāng)前第39頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分假單胞菌屬分布廣泛，人類不發(fā)酵菌感染中，假單胞菌占70％～80％，主要為銅綠假單胞菌，其他較為常見的菌種有嗜麥芽窄食單胞菌、鮑曼不動桿菌等

第一節(jié)假單胞菌屬(Pseudomonas)本文檔共51頁；當(dāng)前第40頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分微生物特性革蘭陰性、無芽胞、專性需氧有端鞭毛或叢鞭毛生長溫度范圍廣，最適生長溫度為35℃產(chǎn)生各種水溶性色素：綠膿素、膿玉紅素、熒光素、膿褐素對理化因素耐受性較強(qiáng)，對多種抗生素耐藥

本文檔共51頁；當(dāng)前第41頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分二、銅綠假單胞菌（P.aeruginosa)1.臨床意義：銅綠假單胞菌在自然界分布較為廣泛，因此很容易污染器械而造成感染機(jī)會

本文檔共51頁；當(dāng)前第42頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分2.生物學(xué)特性革蘭陰性，長短不一單鞭毛生長溫度25～42℃氧化酶陽性還原硝酸鹽、分解尿素、精氨酸酶陽性本文檔共51頁；當(dāng)前第43頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分銅綠假單胞菌（P.aeruginosa)血平板上毛玻璃樣，金屬光澤，生姜味可產(chǎn)生多種色素：熒光素與綠膿素本文檔共51頁；當(dāng)前第44頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分銅綠假單胞菌（P.aeruginosa)綠膿素本文檔共51頁；當(dāng)前第45頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分1.肉浸湯2.胰化酪蛋白大豆肉湯37℃培養(yǎng)18－24h挑選菌落鑒定分型血清學(xué)噬菌體綠膿素初步鑒定菌落特征、色素、綠膿素：+涂片、革蘭染色、氧化酶：+最后鑒定生化反應(yīng)腦脊液、胸（腹）水、膿液、分泌物、痰、尿液、十二指腸引流液血液、環(huán)境用品分離培養(yǎng)：直接涂片革蘭染色糞便血瓊脂平板SS、麥康凱分離培養(yǎng)：37℃如生長銅綠假單胞菌檢驗(yàn)程序本文檔共51頁；當(dāng)前第46頁；編輯于星期二\21點(diǎn)45分

分類軍團(tuán)菌屬(Legionella)屬于軍團(tuán)菌科（Legionellaceae）常見的與人類疾病有關(guān)的軍團(tuán)菌：嗜肺軍團(tuán)菌（Legionellapneumophila）米克戴德軍團(tuán)菌（L.mi