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實(shí)驗(yàn)九紫外分光光度法測(cè)定

核酸的含量一實(shí)驗(yàn)原理

核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵系統(tǒng)，能吸收紫外光。RNA和DNA的紫外吸收高峰在A260nm波長(zhǎng)處。一般在A260nm波長(zhǎng)下，每ml含1μgRNA溶液的光吸收值為0.022。所以測(cè)定未知濃度RNA溶液A260nm波長(zhǎng)的光吸收值即可計(jì)算出其中核酸的含量。二實(shí)驗(yàn)操作1.稱(chēng)取核酸樣品0.05g——加入2ml左右的DW溶解（可在水浴鍋上加熱促其溶解）——然后用玻璃棒蘸取稀氨水調(diào)節(jié)pH到7——使用pH試紙調(diào)節(jié)——調(diào)好后將樣品液定容到5ml（使用10ml量筒定容）2.取2支離心管，按下表加樣——振蕩均勻——在冰箱中冷卻30min——然后離心15min,V=8000離心管號(hào)12樣品液2ml2mlDW2ml--沉淀劑--2ml3.上清液稀釋100倍：用移液管從離心管中移取0.5ml上清液置于量筒中——用DW定容到50ml——倒入小燒杯攪拌均勻——然后用紫外分光光度計(jì)測(cè)OD260nm值A(chǔ)1,A24.計(jì)算：RNA％＝(A1-

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